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1、选修板块综合练1(2018贵州遵义高三模拟)在白酒发酵的窖池中，培养液的pH4.5后，酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制，甚至停止发酵。耐酸性酵母菌能在pH为3.5的环境下继续表现出较强发酵能力，适宜作白酒发酵生产用菌种，为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌，研究者进行实验。(1)酵母菌的代谢类型是_。在发酵过程中，窖池中培养液的pH会逐渐下降，原因是_。(2)取适量窖底泥、酒糟和黄浆水，分别溶于10 mL无菌水中，再各取1 mL上清液接入10 mL麦芽汁培养基中，置于_(填“有氧”或“无氧”)条件培养，48小时后用_(填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”)分别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上计数统
2、计，培养结果见下表：菌种来源pH窖底泥酒糟黄浆水5.04.03.02.52.0注：“”越多表示菌体长得越好、数量越多，“”表示几乎不生长。(3)在pH3.5的环境下，仍可检测到少量耐酸性酵母菌生长，这些耐酸性酵母菌是菌株发生_和环境选择共同作用形成的。(4)为了进一步纯化适合于生产的菌种，应从pH为_(范围)的培养基中获得菌种，并接种到_(填“固体”或“液体”)培养基上进行培养。(5)实验获得了三个耐酸性强的酵母菌菌株，特点如下表。菌株ABC特点pH3.5时，生长代谢正常，优于其他常规菌种pH3.5时，生长代谢正常，pH46时不正常pH2.06.8，生长代谢正常，优于其他常规菌种依据菌株特点，
3、研究者认为C菌株更适合作为白酒发酵菌株，作出这一判断的理由是_。解析：(1)酵母菌的代谢类型是异养兼性厌氧型，既可进行有氧呼吸，又可进行无氧呼吸。酵母菌在细胞呼吸过程中产生CO2，可形成碳酸，且代谢过程中还产生了其他酸性物质，因此在发酵过程中，窖池中培养液的pH会逐渐下降。(2)取适量窖底泥、酒糟和黄浆水，分别溶于10 mL 无菌水中，再各取1 mL上清液接入10 mL麦芽汁培养基中，置于有氧条件下培养，酵母菌会大量繁殖，48小时后用稀释涂布平板法分别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上计数统计。(3)根据题意可知，在白酒发酵的窖池中，培养液的pH4.5后，酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制，甚至停止发
4、酵。在pH3.5的环境下，仍可检测到少量耐酸性酵母菌生长，这些耐酸性酵母菌是菌株发生基因突变和环境选择共同作用形成的。(4)耐酸酵母菌能在pH3.5的环境下表现出较强的发酵能力，适合做白酒发酵生产用菌种，所以据表格可知，应该从pH为23的培养基中获得菌种，可通过平板划线法接种到固体培养基上进行纯化培养。(5)根据表格可知，C菌对pH的耐受范围更大。发酵初期pH近中性，C菌种适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，C菌种依然能正常生长。答案：(1)异养兼性厌氧型细胞呼吸产生二氧化碳，可形成碳酸；代谢过程中还产生了其他酸性物质(2)有氧稀释涂布平板法(3)自然(自发)突变或基因突变(
5、4)23(或3或3.5)固体(5)该菌对pH的耐受范围更大；或发酵初期pH近中性，C菌种适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，C菌种依然能正常生长2(2018四川泸州高中高三月考)在现代生活中，每年产生大量生活废纸，消耗大量木材，其主要成分是木质纤维，人们正努力通过利用微生物实现废物再利用，基本工作流程如下图，请回答相关问题：(1)为筛选图中环节所需的细菌，一般选用_(从营养物质方面答)的培养基。要有利于从培养基中筛选该细菌，需在培养基中加入_染色剂，接种培养一段时间后，从培养基中挑选周围出现_的菌落进行进一步分离纯化。环节获得的酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种成分，即C
6、1酶、_。(2)环节获得的细菌与环节接种的微生物在结构上的主要区别是前者_。在环节过程中，要注意对发酵装置进行_。(3)在纸张加工过程中，有时会加入一些由植物芳香油制成的香精，植物芳香油提取的常用方法是_；也可以用植物色素使纸张着色，根据植物色素易溶于有机溶剂的特点，可以考虑使用_法提取植物色素。解析：分析题图，表示纤维素分解菌的培养，表示获得纤维素酶液，表示纤维素糖化，表示接种微生物酵母菌，表示无氧发酵。(1)环节所需的细菌为纤维素分解菌，需要先将从土壤中获得的微生物培养在以纤维素为唯一碳源的选择培养基上，在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物
7、不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从培养基中挑选周围出现透明圈的菌落进一步分离纯化。中获得的酶是纤维素分解菌产生的纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，主要包括C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶三种组分。(2)环节获得的细菌是纤维素分解菌，属于原核生物，而环节接种的微生物是酵母菌，属于真核生物，在结构上的主要区别是前者没有核膜包被的细胞核。环节生产中用于发酵产生酒精的微生物是酵母菌，为了确保获得产物乙醇，应将发酵装置密封，确保无氧环境。(3)纸张加工过程中，有时加入一些由植物芳香油制成的香精，水蒸气蒸馏法(或蒸馏法)是植物芳香油提取的常用方法；也可以用植物色素使纸张着色，根据植物色素易溶
8、于有机溶剂的特点，可以考虑使用萃取法提取植物色素。答案：(1)富含纤维素刚果红透明圈葡萄糖苷酶和CX酶(2)没有核膜包被的细胞核密闭(或保证无氧条件)(3)水蒸气蒸馏法(或蒸馏法)萃取3分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题：(1)培养基中加入的化合物A是_。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养，目的是_。(2)为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用_法进行接种。若用稀释涂布平板法
9、进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_。(3)用三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定(结果如图)。据图分析可知，三种菌株对_的降解作用最强。与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中_的降解率变化最大。解析：(1)要筛选到能产生纤维素酶的微生物，应使用选择培养基，在培养基中加入纤维素作为唯一的碳源。将样品稀释涂布到鉴别培养基之前，可通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。(2)采用平板划线法进行接种时，所用接种工具为接种环。采用稀释涂布平板法进行接种，在
10、涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量过多会在培养基表面出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，所以不能过多。(3)分析柱形图可知，三种菌株对半纤维素的降解作用最强；与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中纤维素的降解率变化最大。答案：(1)纤维素增加纤维素分解菌的浓度(2)平板划线培养基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果(3)半纤维素纤维素4(2018四川成都实验中学一模)下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题：资料1巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX基因受到诱
11、导而表达5AOX和3AOX(TT)分别是基因AOX的启动子和终止子。资料2巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，可以将目的基因整合于染色体中以实现表达。(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上_、_限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。(2)酶切获取HBsAg基因后，需用_将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取_。(3)步骤3中应选用限制酶_来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其
12、导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡那霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用_方法进行检测。(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入_以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。(6)与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行_并分泌到细胞外，便于提取。解析：(1)重组质粒上的目的基因若要表达，目的基因的首端和尾端需含有启动子和终止子。而SnaB、Avr识别的序列在启动子与终止子之间，只要在目的基因两侧的A和B位置分别接上这两种序列，并用S
13、naB、Avr这两种限制酶对质粒和目的基因同时进行切割，便会各自出现相同的黏性末端，便于重组与表达，同时可防止自身环化，因此在HBsAg基因两侧的A和B位置应接上SnaB和Avr限制酶的识别序列。(2)用DNA连接酶可将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒；将重组质粒导入大肠杆菌体内的目的是：利用大肠杆菌的无性繁殖，短时间内获取大量的重组质粒。(3)重组DNA的两侧分别是启动子和终止子，除Bgl外，其他限制酶均会破坏含有启动子、终止子的目的基因。所以步骤3中应选用限制酶Bgl来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。(4)可用DNA分子杂交技术检测巴斯德毕赤酵母菌内是否导入了目的基因。(5)资料1显示，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时可诱导HBsAg基因表达，据此可知：转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。(6)大肠杆菌等细菌为原核生物，细胞内没有对分泌蛋白进行加工修饰的内质网和高尔基体，而巴斯德毕
