临床检验方法学性能评价

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1、临床检验方法学性能评价临床检验方法学性能评价临床检验方法学性能评价临床检验方法学性能评价 卫生部北京医院郭健 2010年3月 方法学评价方法学评价方法学评价方法学评价 ? 国家卫生行政管理部门和医学实验室认可， 都对实验室方法性能评价提出了明确要求： ?临床实验室引入新的新的或修订的修订的检验方法，在 常规应用前，应对检验方法的性能进行全面 地评价或验证。 引入新实验方法的流程图引入新实验方法的流程图 Kristian Linnet and James C. Boyd 定义定义 ? 测量准确度测量准确度（accuracy of measurement）就其计量学意义，指单次 测量结果与被测量真

2、值之间的一致程度，受 随机误差和系统误差的影响。 ? 正确度正确度（trueness）：指大量测量结果的 平均值与可接受参考值参考值之间的接近程度。 定义定义定义定义 ? 溯源性Traceability：通过一条具有规定不 确定度的不间断的比较链，使测量结果或测 量标准的值能够与规定的参考标准，通常是 与国家标准或国际标准联系起来的特性。 VIM：1993，定义6.10 定义定义 ? 测量不确定度测量不确定度 Uncertainty of measurement ? 表征合理地赋予被测量之值被测量之值的分散性，与测 量结果相联系的参数。 VIM：1993，定义3.9 ? ISO/PDTS 25

3、680.8医学实验室测量不确定 度的计算和表达 测量的目的测量的目的测量的目的测量的目的 ? 获得被测对象的准确量值，所谓准确量值是 指测量结果可以溯源到国际或国家的基准量 值 基准量 值，以保证被测对象的量值在国际或国家范 围内保持一致。 ? 但这种“一致”是有条件的，即在某个不确定 度 不确定 度范围内的一致。 临床检验的特点临床检验的特点临床检验的特点临床检验的特点 测量分类测量分类测量分类测量分类目的目的目的目的被测物性质被测物性质被测物性质被测物性质溯源性溯源性溯源性溯源性 结果相关结果相关结果相关结果相关 信息信息信息信息 计量学测量计量学测量获取准确量值 物理、化学 （长度、质

4、量、时间、温 度、电阻） 可 部分 不确定度 临床检验临床检验 为区分健康状 况提供信息 生物体参考区间 方法学性能要点方法学性能要点方法学性能要点方法学性能要点 ? 校准 Calibration ? 校准物和校准方式 ? 校准间隔 ? 校准验证 ? 分析特异性和干扰 Analytical Specificity and Interference 精密度精密度精密度精密度 PrecisionPrecision ? 重复性 Repeatability：批内CV（OCV） ? 中间精密度：总CV（RCV） ? 实验室内 ? 条件改变：时间、校准、操作者、仪器 ? 重现性 Reproducibili

5、ty： ? 实验室间 ? 条件改变：操作者、设备 （EP5A2） 方法学性能要点方法学性能要点方法学性能要点方法学性能要点 ? 线性范围 Linearity Range ? 被测量与方法输出成线性关系 ? 测量范围 Measurement Range ? 符合方法学性能 ? 可报告范围 Reportable Range ? 临床有用性 测量区间（测量区间（测量区间（测量区间（Measuring Interval） ? 也称：（分析）测量范围。 ? 测量程序可给出测量结果（数值）、由测量 低限 测量 低限和测量高限测量高限构成的闭区间闭区间； ? 在此区间内，测量总误差满足方法规定的性 能指标

6、。 极限参数极限参数（分析灵敏度） ? 空白限（LoB）：空白样本的最高观测值 ? 检测限（LoD）：可检出的被测物最低量 ? 定量限（LoQ）：可靠检测的最低量 ? 测量范围下限（LMR） ? 线性范围下限（LLR） （EP17A） 检测方法的极限参数检测方法的极限参数检测方法的极限参数检测方法的极限参数 0 被测量 LoD LoQ 极限参数的关系极限参数的关系极限参数的关系极限参数的关系 LoB LoBLoDLoQ 实验室分析目标的确立实验室分析目标的确立实验室分析目标的确立实验室分析目标的确立 ? 允许总误差： ? 精密度：RCV ? 准确度：偏倚 ? 样本误差样本误差：只考虑分析误差时

7、，被忽略。 ? 管理要求 不精密度不精密度不精密度不精密度 ? 分析标准差：分析标准差： ? 总标准差总标准差： ? 分析不精密度分析不精密度在测量过程中引入的随机误差是非常有限的. 22 AWithinBT += WithinBA = 2 1 偏倚偏倚（Bias）： ? 允许偏倚与参考区间的宽度相关联；由个体间、个 体内生物变异及分析变异决定； ? 建议： 22 4 1 BetweenBWithingB Bias+ 管理要求管理要求管理要求管理要求 ? 管理部门或学会提出的目标； ? 目标使用浓度目标使用浓度：医学决定水平、危急值、参 考区间、治疗范围，等 ? 建议：以1/4 PT要求作为允

8、许总误差，以 兼顾方法学稳定性和质量成本。 临床实验室分析目标临床实验室分析目标（临床化学） 临床实验室分析目标临床实验室分析目标（临床化学） 检验项目室间质量评价标准室内不精密度检验项目室间质量评价标准室内不精密度CV% 钾靶值0.4mmol/L3.6 钠靶值4mmol/L1.9 氯靶值5%1.8 钙靶值0.25mmol/L2.9 磷靶值10.7%6.4 血糖靶值10%4.3 尿素靶值9%5.3 肌酐靶值15%3.5 尿酸靶值17%4.3 胆固醇靶值9%4.5 甘油三酯靶值18.8%8.1 丙氨酸氨基转移酶靶值18%7.3 天门冬氨酸氨基转移酶靶值20%6.0 乳酸脱氢酶靶值20%4.3 北

9、京市部分临床检验项目不精密度建议北京市部分临床检验项目不精密度建议 肌酸激酶靶值21%6.6 碱性磷酸酶靶值27%4.8 谷氨酰基转移酶靶值20%6.4 白细胞靶值10%3.9 红细胞靶值4%2.4 血红蛋白靶值4.5%2.1 红细胞压积靶值5%2.1 血小板靶值14%6.8 乙肝表面抗原3份样本定性均符合NA 乙肝表面抗体3份样本定性均符合NA 乙肝e抗原3份样本定性均符合NA 乙肝e抗体3份样本定性均符合NA 乙肝核心抗体3份样本定性均符合NA 丙肝抗体3份样本定性均符合NA 北京市部分临床检验项目不精密度建议北京市部分临床检验项目不精密度建议 依据依据: 1. 生物学变异生物学变异; 2

10、. 三甲医院检验科实际三甲医院检验科实际RCV (95%范围范围) 质控图钾 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 4. 4.1 4.2 4.3 0510152025 日期 设定设定： Mean = 3.9 SD=0.10 (1/4PT) 质控图K 3.78 3.81 3.84 3.87 3.9 3.93 3.96 3.99 4.02 0510152025 日期 设定：设定： Mean=3.9 SD = 0.03 计算：计算： Mean = 3.85 SD = 0.03 血钾测定血钾测定血钾测定血钾测定CVCV要求要求要求要求 ? 室间质评：0.4 mmol/l ? 室内不精密度室内不精密度

11、： 3.6 % ? 以上为北京市卫生局提出的要求 ? 检验科RCV：1.0 % 质控图K 3.69 3.73 3.77 3.81 3.85 3.89 3.93 3.97 4.01 0510152025 日期 设定：设定： Mean=3.85 SD = 0.04 CV 3.6% 计算：计算： Mean = 3.85 SD = 0.03 GLU测定 mmol/l 2 8 仪器 准确度评估准确度评估 偏倚 RCV S.I.单位？ 公议值？ 均值 ？ 误差和不确定度误差和不确定度误差和不确定度误差和不确定度 ? 误差误差：被测量的单个结果与真值之差； ? 是单个数值； ? 已知误差的数值可用于修正结果

12、； ? 不确定度不确定度： ? 以一个区间表示； ? 不能修正测量结果 方法学评价的内容与相关文件方法学评价的内容与相关文件方法学评价的内容与相关文件方法学评价的内容与相关文件 ? 初步评价（CLSI EP10A2） ? 精密度（ CLSI EP5A2） ? 对比及偏差（ CLSI EP9A2） ? 线性范围（CLSI EP6A） ? 抗干扰能力（ NCCLS EP7A2） ? 基质效应（ CLSI EP14A2） 方法学评价内容与相关文件方法学评价内容与相关文件方法学评价内容与相关文件方法学评价内容与相关文件 ? 极限参数测定（CLSI EP17A） ? 临床准确度（CLSI GP10A2）

13、 ? 定性实验方法的评价 （CLSI EP-12A） ? 参考区间 （CLSI C28A) ? 操作精密度和准确度的使用者证明（操作精密度和准确度的使用者证明（CLSI EP15A） 方法学研究方法学研究方法学研究方法学研究 ? 评估（Evaluation）：实验室通过实验，测 量新方法的分析性能； ? 确证（Validation）：方法满足预期用途的 证明过程； ? 验证（Verification）：方法满足一定性能 标准的检验过程； ? 证明（Demonstration）评价实验室能否 遵循厂家指导书，并取得预期结果。 验证验证 操作精密度和准确度的证明操作精密度和准确度的证明操作精密度和

14、准确度的证明操作精密度和准确度的证明(EP-15) ? 精密度精密度 ? 批内不精密度2/3总变异：n=4/s/d 5d ? 批内不精密度2/3总变异：n=3/s/d 3d ? 准确度准确度 ? 方法学比对 ? 样本数：20 临床准确性临床准确性临床准确性临床准确性 ? 区分不同健康状况的能力； ? 阳性结果：真阳性和假阳性 ? 阴性结果：真阴性和假阴性 ? 临界值改变：影响灵敏度和特异性 准确度及其评价准确度及其评价 ? 回收实验回收实验 ? 干扰实验干扰实验 ? 方法学对比方法学对比 临床对临床对临床对临床对“ “准确性准确性准确性准确性” ”的要求的要求的要求的要求 ? 实验室提供的检验

15、结果或数据，应有助于临 床医生进行疾病诊断、疗效评估和预后判 断。 ? 除了计量学准确性计量学准确性外，实验室还应对检验方 法的临床准确性临床准确性进行评价。 回收实验回收实验回收实验回收实验 ? 用于评估实验方法正确测定在常规样本中加 入的被测物量的（质量、浓度、活性）能 力； ? 通过测定比例系统误差，对实验方法的准确 度进行评价。 回收实验的基本要求回收实验的基本要求回收实验的基本要求回收实验的基本要求 ?使用常规样本基质，如血清或血浆；如果加入的被测物为液 体，应控制体积在10%以内； ?保证样本基质的一致性，原始样本中应加入不含被测物的相同 溶液，作为基础样本； ?对加入的物质能够实

16、现准确定量，如称重、使用标准物质或标 准液； ?应选择有临床意义的浓度加入基础样本，一般加入的浓度应有 3个或以上不同的浓度水平，并保证对实验样本最终的测定结 果在检测方法的线性范围内。 回收率回收率回收率回收率（recovery） ? 计算方法（以加入的被测物为标准液为例） ? 回收浓度 = 样本最终测定浓度 - 基础样本浓度 标准液体积基础样本体积 标准液体积 标准液浓度加入浓度 + = %100%= 加入浓度 回收浓度 回收率）（ 回收率回收率回收率回收率 ? 对加入不同浓度水平的样本在完成回收实验 后，计算平均回收率。 ? 理想状态时的回收率为100%， ? 误差大的方法其回收率低，准确度较差。 参考（定值）物质：正确度验证参考（定值）物质：正确度验证参考（定值）物质：正确度验证参考（定值）物质：正确度验证 ? 新鲜冰冻人血清：NIST、CAP ? 参考物质或实验室间比对材料：PT组织者提 供；