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1、HER2免疫组化检测的质量控制,苏州大学附属第一医院 郭凌川,1,内容提要,HER2检测的质量控制和质量保证 HER2检测质量的影响因素 检测前 检测中 检测后 HER2检测的质量保证 内部质保 外部质保 Ring研究,HER2检测的质量控制和质量保证,3,质量体系定义,质量控制 （QC） 用以确保HER2检测结果正确性的内部验证步骤 质量保证 （QA） 通过与其他实验室检测结果相比较而得到的检测技术评价的方式 （例如，外部控制）,Bilous M, et al. Mod Path 2003;16:173182.,质量控制与质量保证有何区别？,质控 达到和/或维持目标质量 在检测中每个步骤均进
2、行样品检查，从而决定是否进行相关改进 操作步骤的内部验证 每批实验都应进行 确保每个检测结果均准确,质保 旨在改善总体检测操作 与其他检测中心相比较,质控/质保原则（推荐）,Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173182. 2003.,质控/质保原则（推荐）,Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173182. 200
3、3.,HER2检测质量的影响因素,8,影响IHC检测结果之常见问题,诸多因素会影响IHC结果的评估,标本固定较差1 染色不均,细胞质染色, IHC 02 弥散性非均一性细胞质染色,标本点状假阳性染色2 棕色点状染色为胞质染色而非胞膜染色,标本边缘假阳性染色1 肿瘤标本边缘染色而中心无染色,W Hanna供图; Dako供图.,影响FISH检测结果之常见问题,标本制备 染色步骤,固定不完全1 片状染色;信号较弱或缺失,过分固定1 持续性自发性荧光; 信号较弱或缺失,消化封闭不完全2 较强自发性荧光；背景亦呈现较强非特异性染色,Abbott供图; 2. Ventana供图.,取样,组织处理,固定方
4、式,检测仪器精准度,实验室步骤,固定时间,检测方 法验证,检测人员,抗原修复类型,实验试剂,对照,实验条件,使用图像分析,判读标准,报告内容,评分系统,HER2检测偏倚,检测后,检测前,检测中,影响HER2检测结果之因素,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.,HER2检测的影响因素：检测前,12,影响HER2检测结果之因素: 检测前,取样,组织处理,固定方式,固定时间,Pre-analytic,HER2检测偏倚,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,检测前,取样 原发性乳腺癌 最好为手
5、术切除而非活检标本，包含癌旁乳腺组织 避免细针穿刺活检取样 转移性乳腺癌 穿刺活检取样 胃癌 经内镜活检取样或经手术切除之标本,影响HER2检测结果之因素: 检测前,取样,HER2检测偏倚,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,HER2检测偏倚,影响HER2检测结果之因素: 检测前,组织处理方式 提供新鲜及已定位之标本或切除后迅速经甲醛固定之标本 立即转送至备检实验室: 尽量缩短从标本切除至浸入10%NBF固定之间的时间，通常控制在2030分钟以内 乳腺癌： 最多1小时 胃癌： 2030分钟之内,从手术切除到实验室接收之间的组织处理不当会
6、造成不理想和不一致的HER2检测结果 最坏的情况下，检测有可能失败,组织处理,HER2检测偏倚,HER2检测偏倚,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145; www.her2testing.org; 乳腺癌HER2检测指南（2009版）编写组 乳腺癌HER2检测指南（2009版）中华病理学杂志 2009,38(12):836840. 胃癌HER2检测指南编写组 胃癌HER2检测指南 中华病理学杂志 2011;40(8):553-557.,影响HER2检测结果之因素: 检测前,固定时间 乳腺癌 最少6小时 不超过48小时 胃癌 穿刺活检最少1小时（
7、以便充分固定） 比较大的样本需要至少8小时 不超过48小时,固定时间,HER2检测偏倚,HER2检测偏倚,乳腺癌HER2检测指南（2009版）编写组 乳腺癌HER2检测指南（2009版）中华病理学杂2009;38(12):836840. 胃癌HER2检测指南编写组 胃癌HER2检测指南 中华病理学杂志 2011;40(8):553-557.,影响HER2检测结果之因素: 检测前,固定方式 首选10%中性缓冲福尔马林（NBF） 10%NBF相当于4% 甲醛溶液,固定方式,HER2检测偏倚,HER2检测偏倚,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145
8、.,HER2检测的影响因素：检测中,18,影响HER2检测结果之因素：检测中,检测仪器精准度,实验室检测步骤,检测人员,抗原修复类型,实验试剂,对照,实验条件,HER2检测偏倚,检测中,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,检测方法验证,影响HER2检测结果之因素：检测中,验证检测方法 用于检测之实验步骤应经已知实验结果验证 标准化实验条件需经标准化试验方法验证后才可常规应用,检测方法验证,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,影响HER2检测结果之因素：检测中,检测仪器之精准度 应
9、有常规校准及维护检测仪器的相关操作流程 移液器 孵育箱 水浴锅 温度计,检测仪器精准性,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,仪器准确度指该实验仪器能正确显示操作者的设定方式 正确运作 仪器精确度指该实验仪器每次操作都能显示相同的检测结果 可重复性,影响HER2检测结果之因素：检测中,实验室步骤 须经验证之免疫组化实验步骤,实验室步骤,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,影响HER2检测结果之因素：检测中,检测人员 相关检测人员应接受正规检测技术培训（包括资格考试）并给予相应支持
10、定期考评：例如年度考评,检测人员,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145; 乳腺癌HER2检测指南（2009版）编写组 乳腺癌HER2检测指南（2009版）中华病理学杂志 2009,38(12):836-840,影响HER2检测结果之因素：检测中,抗原修复类型 所采用之抗原修复系统与现有实验条件相适应，并能产生可重复性结果,抗原修复类型,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,相同FISH阴性乳腺癌组织标本 应用相同浓度抗HER2 抗体检测结果,合理抗原修复,抗原修复对免疫组化检测结果很重
11、要,图片由 A Morey, St Vincents Hospital, NSW, Australia提供.,影响HER2检测结果之因素：检测中,检测试剂 所有试剂应确保其质量稳定，经对照组实验验证后可使用 所有验证应当记录，签名和登记日期,检测试剂,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,影响HER2检测结果之因素：检测中,对照 对照组与实验组实验过程应一致 应使用已知实验结果的组织作为对照 可用已经验证的对照检测新抗体活性 用于对照的组织标本可自行制备或购买而得,对照,阳性及阴性对照,组织标本阳性对照组 理想之阳性对照组, HER2阳性
12、 (IHC3+)1,W Hanna供图; 2. L Bornstein供图.,MDAMB175, HER2阴性 (IHC1+)2,对照细胞系之准备 SK-BR-3, HER2阳性 (IHC3+)1,内部对照设置,患者标本中肿瘤未累及部分可作为内部阴性对照组；若阴性对照结果亦出现染色，则原肿瘤标本之染色结果无效 对照监控 如若对照组未显示预期结果，则实验应重做,例如，正常乳腺上皮膜染色 重复免疫组化检测,W Hanna供图.,影响HER2检测结果之因素：检测中,检测实验条件 检测应于适当条件下进行 温度及湿度的变化会影响染色结果 检测条件需确保得到可靠且可重复的HER2检测结果,检测条件,Wol
13、ff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,如何达到高质量免疫组化检测,勿让低年资实验室技术人员配置试剂 若试剂未能正确配制，免疫组化结果将不可靠 低年资技术人员应接收试剂配制训练及上级指导监督 正确的抗体稀释可避免免疫组化的误差 记录每次抗体稀释的浓度，每次登记相应日期及时间 如遇错误检测结果，上述记录数据可用来追溯错误原因 完善改进抗原修复方法 较耗时但必须进行,设计验证步骤,目的 确定经证实或验证之相关实验步骤是否可于本实验室可行 确定检测参数 固定 检测方法及条件 试剂及浓度 操作设定 (若自动化操作) 操作人员技术能力 样本(检测组) 选择
14、25100个样本用不同经证实的检测方式进行检测，可使用组织芯片,请注意: 乳腺癌与胃癌标本进行检测验证应分开进行,设计验证步骤,记录实验验证的每一操作步骤 这些记录可用于建立实验室标准化操作参考指南 记录所有操作步骤 若任何一个步骤发生变化，整个实验必须重做 目标：阳性及阴性实验验证组与原实验结果达95%的一致性,使用自动化平台有助HER2检测标准化,如果使用自动化检测，必须基于现有的经验证的手动操作方案,PQCC委员会提供数据,国家质量控制认证项目中自动与手动HER2检测方法对比,HER2检测的影响因素：检测后,35,影响HER2检测结果之因素：检测后,图像分析方法,判读标准,报告内容,评分
15、系统,HER2检测偏倚,检测后,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118145.,影响HER2检测结果之因素：检测后,检测结果判读标准及评分系统 需依国内/国际HER2检测指南进行标准化操作,判读标准,评分系统,图像分析方法,IHC检测结果判读及评分,多数操作指南推荐下列分析免疫组化检测结果的标准： 依细胞染色百分比及强度进行评分: 乳腺癌: 全膜染色 评估染色侵入部分，但不包括原位部分 寻找完整深染色及均匀的全膜区域 胃癌：基底侧膜、侧膜或完全性膜染色 分析检测结果时，细胞质染色应排除在外。若细胞质染色干扰细胞膜染色结果判断时，应重新检测。 正常上
16、皮细胞不应有染色出现。若出现染色，则应重新检测。 留意待检标本出现收缩/破损,这些现象会造成检测结果的假阳性 若标本染色不均，应依染色最强部位进行评分 根据对照组实验结果决定实验组检测结果是否可信 乳腺癌或胃癌检测应使用其特异性评分标准,Wolff AC et al. J Clin Oncol 2007;25:118145; www.her2testing.org.,ISH检测结果判读及评分,所有乳腺癌及胃癌IHC2+标本均需再次进行ISH检测进行确定 分析ISH检测结果时之注意事项： 乳腺癌：依H 原位癌不予评分 从浸润性肿瘤的两个不同区域数细胞 胃癌：由于HER2的表达异质性，必需筛选出整个扩增区域包括来自于不同肿瘤领域的细胞以提供一个更加统一的分析评分标准 Brightfield方法如SISH建议确认HER2扩增重点区域 依对照组检测结果决定实验组检测结果是否可信 于两个肿瘤侵及区域
