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1、乳酸菌生长最佳培养基的筛选摘要：文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。实验表明,在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上,乳酸菌生长最好,活菌数含量最高,菌落和溶钙圈最大。同种培养基,半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长,前者出菌快,活菌数多。关键词：乳酸菌 固体培养基 半固体培养基 菌落乳酸菌是有益于人体健康的益生菌,主要存在于人体肠道,其有助于宿主调整正常菌群,维持肠道微生态环境的平衡。乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH值,抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用,并有帮助消化、防止便秘,防止细胞老化,降低胆固醇
2、,抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用1-5。在食品向天然型、功能型发展的今天,乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视,通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数,菌落和溶钙圈的大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基,用于乳酸菌制品的研究与开发一、材料及方法111菌种及来源 保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus),由西北农业大学微生物室提供。(以下简称乳酸菌)。112培养基 11211固体培养基的筛选 RJP培养基(1号):牛肉膏3g;蛋白胨3g;酵母膏3g;乳糖20g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH610。LAB培养基(2号):牛肉膏10g;酵母膏10g;
3、乳糖20g;琼脂15g;吐温80110ml;CaCO310g;KH2PO42g;蒸馏水950ml;pH616。214号培养基(3号):牛肉膏3g,胰胨10g;NaCl5g;酵母膏6g;葡萄糖2g;半胱氨酸013g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH714715乳酸菌分离培养基(4号):牛肉膏1g;蛋白胨1g;酵母膏1g;葡萄糖1g;蕃茄汁20%;吐温800105%;CaCO32g;溴甲酚绿0101%;琼脂115g;蒸馏水100ml;pH615。改良马铃薯培养基(5号):马铃薯(去皮)200g煮出汁;脱脂牛乳100ml(016%);酵母膏5g;琼脂15g;加水至1000ml;pH710;配培养
4、基时,脱脂牛乳90e、水浴30min,与其它成分分开灭菌,倒平板前混合。蕃茄汁培养基(6号):蕃茄汁20g;脱脂牛乳10g;蛋白胨10g;琼脂6g;加蒸馏水至400ml;pH610612。11212 添加不同配料比较实验选用平菇、马蹄、大葱、青瓜、胡萝卜、马铃薯各40g,煮汁,分别添加在乳酸菌分离培养基中,配制成6种添加不同配料的乳酸菌分离培养基。11213 半固体培养基除琼脂含量为013%外,其余成分均与固体培养基相同。113 实验方法11311 固体培养取经多次活化的乳酸菌发酵奶1ml,用无菌水进行10倍系列均匀稀释,取10-6,10-7,10-8三种稀释度,用混合平板法培养,凝固后置于3
5、7e培养,24h后进行菌落计数,每天一次,并用直尺在放大镜下测量菌落、溶钙圈的大小。11312 半固体培养根据高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的原理,利用马向前等人研制的一种简便、快速的计数方法,在6种半固体培养基上对乳酸菌进行活菌计数6。将培养基融化,加入1ml乳酸菌发酵奶,以10倍系列均匀稀释。凝固后置37e培养,24h后计菌落数,每天一次,并用直尺在放大镜下测量菌落的大小。二 结果211 固体培养基的筛选在上述6种固体培养基中,乳酸菌的生长情况见表1从表1的结果可以看出,在6种培养基中,乳酸菌在乳酸菌分离培养基中生长最佳,第四天,活菌数达3197108个/ml,第六天菌落直径达019
6、0mm,溶钙圈直径达1140mm。其次是蕃茄汁培养基,第五天,活菌数达2130108个/ml,菌落直径0112mm。乳酸菌生长最差的是214号培养基,第五天活菌数仅为0138108个/ml,菌落直径为0104mm。212 在乳酸菌分离培养基中添加不同配料的比较实验在乳酸菌分离培养基中添加不同配料,乳酸菌的生长情况见表2 表2的结果表明,在乳酸菌分离培养基中添加不同配料,以加入胡萝卜汁,乳酸菌生长最佳,第五天,活菌数达2138109个/ml,为单一培养基活菌数的6倍。其次以加入平菇汁和大葱汁较好,第六天,活菌数分别达1125109个/ml和1103109个/ml,为单一培养基的311倍和216倍
7、。生长较差的依次是青瓜汁、马铃薯汁和马蹄汁,与单一培养基对比,活菌数无明显变化。另外,添加不同配料,乳酸菌的菌落及溶钙圈大小均无明显变化。213 乳酸菌在固体培养和半固体培养的比较按上述各种培养基配方,添加不同剂量的琼脂,制成固体和半固体两类培养基,接入乳酸菌进行培养,检测其生长情况,结果见表3 表3的实验结果表明,同种培养基,相同培养条件,乳酸菌在半固体培养基中活菌数大大增加,为固体培养基活菌数的15113倍不等,且高峰期出现较早,一般在第三天。三 讨论 乳酸菌有特殊且复杂的营养要求,正常生长需要各类营养成分满足其碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素及水的需要。研究发现在乳酸菌分离固体培养基上
8、,乳酸菌生长最佳,活菌数最多,菌落、溶钙圈最大。在乳酸菌分离培养基中,含有蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、蕃茄汁等多种组分。其中,牛肉膏、蛋白胨含有各种氨基酸、肽类、月示等可溶性氮化合物7,为乳酸菌生长提供氮源;酵母膏为乳酸菌生长提供氨基酸、维生素类和无机盐类,葡萄糖则供给丰富的碳源,等等。另外,蕃茄汁富含维生素,可刺激乳酸菌快速生长繁殖。如在乳酸菌分离固体培养基中添加不同配料,乳酸菌生长更佳,尤其以添加胡萝卜汁最好,活菌数为单一培养基活菌数的6倍。因为胡萝卜汁中富含B2胡萝卜素,蕃茄红素,氨基酸,维生素B1、维生素B2、维生素PP、维生素C、和铜、锌等无机盐8、9,大大刺激乳酸菌的生长繁殖。 固体和
9、半固体培养比较实验中,乳酸菌菌落在半固体培养基上出现早,活菌数明显增加,可能的原因是,乳酸菌多数是厌氧型细菌,它们的生长不需要氧10。高层半固体琼脂培养基具有良好的厌氧性能,能更好地满足乳酸菌这一生长特性;而固体培养基,在普通的培养箱中培养,氧压大,可影响乳酸菌的生长另外,固体培养,采用的琼脂浓度为115%,培养基较硬实,而半固体培养基,琼脂的含量仅为013%,较软,菌体易在其中扩展为肉眼可见的菌落。故半固体培养较固体培养更适于乳酸菌的生长繁殖。综上所述,添加胡萝卜汁的乳酸菌分离半固体培养基最适合于培养乳酸菌,可利用该培养基进行优质乳酸菌菌种的筛选,广泛用于食品、医药、农业、工业等各行业,创造
10、更高社会效益和经济效益。参考文献1 罗予,李金陵,蔡访勤1口服乳酸杆菌对大鼠粪便正常菌群的影响1微生物学报,1992,27(3):29529722 郭维烈1实用微生物技术1北京:科学技术文献出版社,1991160703 3 顾瑞霞,谢继志1乳酸菌与人体保健1北京:科学出版社,19951156 4马向前,周德庆1双岐杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法1微生物学报,1997,37(1):62647 5诸葛健,王正祥1工业微生物实验技术手册1中国轻工业出版社,199411091128 6黄君红,陈青荷1提高泡菜汁中乳酸菌含量的研究1中国酿造,1997,(4):26299 7刘铭主1烹饪营养学1中国商业出版社,1990126629010 8周德庆1微生物学教程1高等教育出版社,1993119319 吉林农业大学发酵工程实验设计论文报告名称 乳酸菌生长最佳培养基的筛选 年 级 2010级 学 院 生命科学学院 专 业 生物工程 组 员 任课教师 姜云 完成时间 2013/3/15
