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1、药品微生物实验室,-质量管理 2018.06,微生物类别,特点： 体积小、结构简单、 分布广、种类(1020万种)、 繁殖快、易变异。,微生物概述,芽孢：,微生物所需的营养物质,药品中微生物的主要污染途径,1. 水系统（饮用水、纯化水、注射用水、纯蒸汽）：过滤净化后检测微生物、细菌内毒素。 2. 原辅料：植物性、动物性（风险最大）；2020版药典中药饮片增加耐热菌、沙门菌。 3. 包装材料：安瓿、PVC、PTP、塑料瓶。检测微生物 4.,药品中微生物的主要污染途径,4.生产人员（最不可控因素）：咳嗽、喷嚏、动作幅度大、皮肤掉屑；测手指、洁净服。 5. 气体：压缩空气、惰性气体；控制微生物或无菌
2、。 6. 生产环境：洁净区密封、空气过滤、定期消毒；测沉降菌、浮游菌、悬浮粒子（A、B、C、D级）。验证和日常监测 7. 设备及配件：清洁、消毒、灭菌；清洁验证,影响药品微生物检验结果的因素,1.样品中的微生物可能分布不均匀。 2. 微生物检验方法误差大。 3. 检验方法未经过验证。 4. 实验室因素：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品。,人员要求,1.操作人员具备微生物学或相近专业知识的教育背景。 2.培训：职责培训、岗位操作规程的培训、设备操作培训、检验技术的培训（包括无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种传代、菌种保藏、微生物检查方法、微生物鉴定基本技术）。 3
3、.实验室安全方面的培训（保证自身安全、防止实验室被污染）。 4.对微生物管理人员的培训：实验室安全、实验室结果的评估、数据偏差的调查。,培养基管理, 培养基影响微生物试验结果的因素 1.供应商：稳定、资质合格、业内口碑好、供货能力强。 2. 培养基的接收 2.1 查看培养基名称、批号、厂家、生产日期、有效期、执行标准是否符合要求。 2.2 在每瓶培养基瓶上贴标签、编号（唯一的标识）、批号、接收日期、接收人、 开瓶日期、开瓶后的有效期。 2.3 培养基接收记录。 3.培养基的储存 按照供应商提供的方法保存，多数是避光，个别厂家要求阴凉干燥（低于20）。,培养基管理,4.培养基的适用性检查（药典要
4、求） 4.1 如果培养基的配制和灭菌程序经过验证，那么同一批脱水培养基适用性检查可只做1次。 4.2 如果培养基的配制和灭菌程序未经过验证，那么每一批灭菌培养基均要进行适用性检查。 培养基的配制和灭菌方法的验证（存储期） 包括：灭菌前后PH值、外观性状；灭菌后的无菌性检查、灵敏度检查；保存几周后的无菌、灵敏度检查。,培养基管理,4.3 适用性检查 购买对照培养基 购买菌种 枯草、白念、黑曲霉接种于计数用培养基 金葡、铜绿、枯草、生孢、白念、黑曲霉接种于无菌检查用培养基 依据药典附录1105试验操作后判断是否合格。 以下是三种培养基适用性检查要求（计数用培养基、无菌检查用培养基、选择性培养基）,
5、计数用培养基适用性检查要求,无菌检查用培养基适用性检查要求,选择性培养基适用性检查要求,用于环境监控的培养基管理, 市售：双层包装和终端灭菌 如果不能采用终端灭菌的培养基，在使用前进行100的预培养，防止出现假阳性。 沉降菌碟暴露时间的验证 选择在换气次数大的需要监控的操作间，培养基加菌暴露若干小时,培养后计算菌的回收率大于70。 暴露多长时间不干裂、促生长能力良好）。 包装形式：试管、三角瓶（密封） 贮存房间的条件 取样计划：取样时间点、测试项目（PH值、无菌、适用性） 加菌液0.1ml，不能加1ml。,菌种的管理,菌种的来源 CMCC中国 复活 标准贮备菌株（0代）解冻转种 工作菌株 （低
6、温冷冻干燥） （不得重新冷冻） TACC美国 1代：是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养。 工作菌株不可替代标准菌株,菌种的管理,涉及菌种管理的记录 标准菌种的申购记录。 从标准菌株到工作菌株的操作SOP及记录。 菌种的传代记录。 菌种的检查记录（确认记录）。 菌种的灭活、销毁记录。,菌种的管理,菌种的接收 1.检查外观是否完好。 2.核对菌种名称、编号。 3.核对接收时是否在合适的环境中。 4.核对菌种是否在有效期范围内。 5.给每株菌一个独立的编号，不能重复。,菌种的管理,菌种的保存 1.标准菌株：超低温冷冻（低于-30）有效期一年； （-70以下冷冻保藏）有效期三年。 2.
7、 斜面菌种：28冷藏，有效期36个月。 3. 菌液： 室温下，2小时内使用。 28，24小时内使用（黑曲霉孢子悬液28，贮存期要验证）,菌种的管理,菌种的使用 -斜面菌种只允许一次使用 菌种的传代 1.将微生物转接到新的培养基，进行培养获得新鲜菌种的过程。 2.购买的标准菌株必须经过传代后使用（在5代以内）。,环境的管理,硬件：阳性菌实验室、培养室、贮藏室（区）、试验结果观察区、培养基及实验用具准备区、灭菌区、样品接收区、标准菌株贮藏室（区）、污染物处理区。 以上区域要有标识（降低交叉污染）。 无菌检查：B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离系统。 微生物限度检查：不低于D级背景下的B级单向流空
8、气区域。,环境监测,1.空调验证：高效过滤器完整性、气流组织、空气流速（平均风速）、换气次数、压差、温度和相对湿度（测试应在模拟正常检测条件下进行） 依据药典附录9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则 2.日常监测： 异常情况要进行分析，不仅仅是数数而已。,监测项目,洁净区灭菌和消毒, A/B级洁净区使用无菌的或经无菌处理的消毒剂或清洁剂。 化学消毒剂应验证消毒效果（不止一种）。 清洁剂、消毒剂在规定的效期内使用。 常用灭菌法 干热灭菌法：火焰法（酒精灯）、烘箱2501h。 湿热灭菌法：12130min。,设备设施管理,1.设备的确认、检定（校准） 每年一次，注意连续性。 2.设备使用日志（使用即填） 3.设备定期清洁和消毒（水浴锅、培养箱、冰箱、生物安全柜）。 4.无菌器具要有明确的标识（已灭菌、未灭菌）。 5.温度计的校准。（注意量程、精度） 6.天平、标准砝码的校准；移液管的校准。 7.悬浮粒子计数器、浮游菌采集器的校准。 8.紫外灯消毒效果的定期检测。,操作方法注意,1.操作SOP中明确的检验方法要经过方法学验证，而且和验证方案报告、省药检所的方法学复核意见中的描述一致 2.操作方法应避免损伤供试品中污染的微生物。 3.对抑菌性较强的供试品，尽可能选用薄膜过滤法。,操作方法注意,共同努力，发现问题，提升管理水平！,谢谢各位！,
