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1、1天然药物化学实验须知建立良好的实验规章制度是保证实验课程教学的重要的环节，尤其进行天然药物化学实验，经常要使用易燃、有毒、有腐蚀性、有刺激性甚至爆炸性的物质以及在加温或减压情况下进行实验操作，为保障实验课程正常开展，防止实验中意外事故的发生，要求学生实验前认真学习实验须知、在思想上要高度重视，严格遵守操作规程，确保实验安全有序的进行。 一、实验室规则1实验前必须充分预习，掌握实验原理和操作程序，做好实验计划。2实验开始前应检查仪器是否完整、装置安装是否正确，合格后方能开始实验；实验过程中不得擅自离开，注意观察实验现象，保证实验正常进行，并及时做好实验记录。3保持实验室内清洁、安静。实验台面要
2、干净整洁，与实验无关的物品不得放在台面上，仪器用后应及时清洗，破损仪器要填写报告单，并注明原因。4实验结束时应搞好各自台面的卫生，关好水电，值日生要负责搞好整个实验室的卫生，关好水、电、门、窗。二、实验室安全规范防火防爆注意事项1倾倒和存放易燃、易挥发性有机溶剂时要远离火源，切勿倒入水池内，必须倒入指定容器内。2不得在烘箱内干燥带有机溶剂的仪器或物品。3存放于冰箱中的有机溶剂必须置于带塞容器内，并应注明标签，定时2清扫和检查。乙醚、石油醚等闪燃点低的溶剂不能置冰箱中保存。4使用明火时，实验台面周围不得放置易燃性有机溶剂。5回流或蒸馏易燃性有机溶剂时，不得直火加热，应根据溶剂沸点选用水浴、油浴、
3、沙浴或电热套。注意仪器装置切勿漏气，加入溶剂量不应超量，加热前要加入止爆剂。添加溶剂或补加沸石时必须停止加热，待降温后才能加入，否则会发生爆沸。6乙醚闪燃点低，遇火易引起爆炸，而且在蒸馏过程中，因其本身产生的过氧化物浓度增加易引起爆炸，所以在蒸馏乙醚时不应蒸干。7使用电器设备时应先了解操作规程，不要用湿手触摸电器。8万一不慎引起明火，要保持镇静，立即切断室内所有电源和水源，搬走易燃品，并视着火情况采取不同的灭火措施。防止中毒注意事项：实验室中常用的氯仿、甲醇、苯、卤代甲苯、苯胺、苯酚、二硫化碳、汞、铅等及其化合物，均为有毒或剧毒的药品，中毒途径一般为消化道、呼吸道及皮肤吸收，所以在采用时应注意
4、：1采用毒物要注意，勿洒在容器外边，勿接触皮肤和口腔。2室内应保持良好的通风状况。3产生毒气的操作应在通风橱中进行。4毒物不得随意倾倒，要倒入指定容器统一处理。3实验一 虎杖蒽醌类成分的提取、分离和鉴定虎杖是蓼科蓼属植物 Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc 的根茎及根，又名阴阳莲。民间用于消炎、杀菌、利尿、通经和镇痛，近年来用于烫伤、止血、消结石和降血脂均有疗效。虎杖根茎中含有较大量的蒽醌类成分和二苯乙烯类成分，后者具降血脂的作用。一、实验目的1学习脂溶性成分和水溶性成分的分离方法。2学习用 pH 梯度萃取法分离酸性不同的蒽醌类成分。3了解蒽醌类成分的一般性质和
5、鉴别反应。二、实验原理虎杖中的蒽醌成分由于结构中酚羟基数目及位置不同而呈不同强度的酸性。根据此性质，先用乙醚萃取出蒽醌等脂溶性成分，使脂溶性和水溶性成分得到分离，然后再用碱度递增的水溶液（5%NaHCO 3，5%Na 2CO3，2%NaOH）自乙醚中提出游离蒽醌类成分，达到分离目的。1大黄酸（Rhein）OHHOHCOOHOO黄色针状结晶，mp321322（升华） ，不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液、微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。42大黄素（Emodin）OHHOOHCH3OO橙黄色长针晶（丙酮中结出者为橙色，甲醇中为黄色） ， mp256257能升华，其溶解度如下：Et 2O 0.
6、14%，CCl 4 0.01%，CH 2Cl2 0.0718%，CS 2 0.009%，几乎不溶于水，可溶于 Na2CO3，NH 4OH，NaOH 水溶液。3大黄素-6-甲醚(physion)OH OHH3CO CH3OO金黄色针晶，熔点 207，能升华，溶解性与大黄素类似。4大黄酚（chrysophanol ）OH OHCH3OO黄色针晶，易溶于苯、氯仿、乙醚、氢氧化钠水溶液，稍溶于甲醇，难溶于石油醚，不溶于碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。易升华。5白黎芦醇葡萄糖苷（polydatin）HO HC CHOHOGlc5易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水、可溶于乙酸乙酯，碳酸钠和氢氧化钠水溶液，稍溶于冰水，不
7、溶于乙醚。三、实验流程 虎 杖 粗 粉乙 醇 提 取 、 回 收 乙 醇浸 膏加 适 量 水 、 乙 醚 萃 取水 层 活 性 炭 脱 色趁 热 过 滤滤 液浓 缩浓 缩 液乙 酸 乙 酯 萃 取乙 酸 乙 酯 液回 收 乙 酸 乙 酯残 留 物Al2O3净 化80%乙 醇 洗 脱洗 脱 液浓 缩 ， 放 置析 晶白 黎 芦 醇 葡 萄 糖 苷乙 醚 层 5%NaHCO3萃 取NaHCO3液酸 化 过 滤沉 淀 物乙 醚 液5% Na2CO3萃 取Na2CO3液 乙 醚 液酸 化 过 滤沉 淀 物干 燥 甲 醇 重 结 晶大 黄 素 2%NaOH萃 取NaOH液 乙 醚 液酸 化 过 滤 回
8、收沉 淀 物 -谷 甾 醇 等脂 溶 性 成 分Cl4:CH3O(1:)重 结 晶大 黄 素 -6甲 醚四、实验方法1乙醇总提取物的制备取虎杖粗粉 75 克，用 95%乙醇回流提取两次，每次用 250ml，回流时间分别为 1h，0.5h。合并乙醇并浓缩至无醇味。2脂溶性和水溶性成分的分离将总提取物用 75ml 水溶解,用乙醚萃取三次，用量分别为50ml，25ml，25ml，合并乙醚液为总游离蒽醌乙醚溶液，水层为水溶性成分。63游离蒽醌的分离（1）强酸性成分的分离将上述乙醚液用 5%碳酸氢钠水溶液萃取两次（20ml 每次） ，合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节溶液的 pH=2，放置，抽滤，水洗沉
9、淀至中性，干燥，得深褐色粉末，为强酸性成分。（2）中等酸性成分的分离将上述 5%碳酸氢钠萃取过的乙醚液用 5%碳酸钠萃取 5 次（每次 20ml） ，合并后的碱液同 1 法处理，所得产品用丙酮重结晶一次，再用甲醇重结晶至薄层色谱检查显单一斑点，测定 mp,与文献值对比。（3）弱酸性成分的分离将上述用 5%碳酸钠萃取过的乙醚液再用 2%氢氧化钠萃取三次（每次15ml） ，合并后的碱液同 1 法处理，产品用氯仿甲醇（1：1）重结晶。（4）中性成分上述用氢氧化钠处理过的乙醚液，用水洗至中性，用无水硫酸钠脱水，回收乙醚，残留物用甲醇重结晶。4水溶性成分的分离取 2 中用乙醚提取过的不溶于乙醚的部分，挥
10、干乙醚，用 250ml 水热溶，过滤，滤液加活性碳煮沸 10 分钟，过滤，滤液在蒸发皿中水浴浓缩至510ml，冷却后转移至三角瓶中，加入 5ml 乙醚，放置，析出物用甲醇重结晶。5鉴定（1）层析法鉴定7吸附剂：硅胶 CMC 板样品： 自制大黄素，大黄素甲醚展开剂：石油醚甲酸乙酯甲酸（15：5：1）显色：（1）在紫外灯下观察荧光（2）浓氨水熏，然后在紫外灯下观察荧光（2）定性反应：分别取大黄素，大黄素甲醚少许，用乙醇溶解，做如下反应：、Borntrger 反应：取试液 1ml，滴加 2%NaOH 溶液，观察颜色。、Mg(OAc) 2 试验：取试液 1ml，加入 0.5% Mg(OAc)2 溶液
11、23 滴，观察颜色。五、操作注意事项1. 萃取过程中，容易产生乳化，故应轻轻振摇。2由于乙醚沸点很低，远离火源，打开窗户。3提前烘干所需玻璃仪器。4注意回收乙醇的操作。六、思考题1减压回收较常压回收有哪些优点？影响减压回收速度的关键是什么？如何控制？停止减压蒸馏应如何操作？2pH 梯度萃取法的原理是什么？适用于哪些中草药成分的分离？83根据 TLC 结果，分析各蒽醌类成分的结构与 Rf 值的关系。4过滤方式有几种？怎样选用？5试总结萃取操作程序及注意事项。实验二 芦丁和槲皮素的提取、分离及鉴定芦丁也称芸香苷，广泛存在于植物界，其中在槐米花中含量较高，可作为提取芦丁的原料。槲皮素即芸香苷苷元，可
12、经芦丁水解制得。槐花米是豆科槐属植物 (Sophora japonica L.) 的花蕾，具有清热、凉血、止血的功效。槐花米的主要成分是芦丁，药理实验证明，其具有调节毛细血管的渗透、抗炎、解痉、抗溃疡、影响脂质代谢及抗菌等作用。一、实验目的1学习黄酮类化合物的提取分离方法。2掌握由黄酮苷水解制取苷元的方法。3了解黄酮类化合物的一般性质及黄酮苷、苷元和糖部分的鉴定方法。 二、实验原理1芦丁（Rutin）淡黄色针晶，熔点 188，易溶于热吡啶、热甲醇，热水中溶解度0.55%，冷水中溶解度 0.0013%。9OOOHHOOOHOHO O OOHOHOHOHOHOHMe芦 丁2槲皮素(Querceti
13、n)黄色结晶，溶于甲醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮、不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚，在乙醇中的溶解度沸时 1:23，冷水中 1:290。OOHHOOHOHOHO槲 皮 素本实验利用芦丁可溶于热水，不溶于冷水的性质进行提取、精制。黄酮苷通过酸水解得到苷元及糖，并可通过 TLC、PC 进行鉴识。不同黄酮类化合物对紫外光有特定吸收，可利用此对其进行结构测定。三、实验流程10槐 花 米加 热 水 煮 沸 ， 趁 热 过 滤水 溶 液沉 淀 （ 芦 丁 粗 品 ）水 精 制水 精 品酸 水 解 结 晶 （ 芦 丁 精 品 ）甲 醇 精 制糖 苷 元 （ 槲 皮 素 ） 放 置 ， 过 滤四、实验方法1芦丁的
14、提取称取槐花米 20 克，置烧杯中（1000mL）加热水（50以上）200mL 煮沸 1520 分钟，趁热过滤，滤渣再用 150mL 热水煮提一次，时间为 20 分钟，趁热过滤，将上两次的滤液合并，置于烧杯或三角烧瓶中，放置，可析出大量沉淀，等沉淀完全，滤取沉淀，即得芦丁粗品。2芦丁的精制上述沉淀称重后（湿品）加入 3040 倍量的热水溶解，趁热过滤，放冷析出结晶，过滤，结晶自然干燥（或在红外灯下干燥） ，得芦丁水精制品。取 0.3g 水精制品用甲醇重结晶（1:1015）的芦丁精品。3芦丁的水解称取芦丁水精制品 0.3 克，置于 250mL 烧杯中，加入 30mL2%的硫酸溶解煮沸 30 分钟
15、（注意观察现象） ，注意烧杯内液面的位置，保持液面不变。放冷过滤，滤液留作糖的检识，沉淀物为芦丁苷元-槲皮素的粗品，水洗至中性用 60%乙醇重结晶，干燥称重，得槲皮素精品。4芦丁的检识11（1）糖的检识取芦丁水解后的滤液 20mL，加 NaHCO3 溶液中和至中性（不断搅拌下进行） ，旋蒸仪浓缩至干，加 23mL 甲醇溶解，滤去白色的 Na2SO4 沉淀,滤液作纸层析的样品溶液。层析：纸层析。对照品：鼠李糖，葡萄糖。展开剂：正丁醇：冰乙酸：水（4:1:5） 。显色：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂，喷后 105加热 510 分钟，显棕色或棕红色斑点。（2）芦丁和槲皮素的纸层析层析：纸层析。对照品：芦丁，
16、槲皮素精品。样品：自制芦丁，槲皮素。展开剂：正丁醇：冰乙酸：水（4:1:5） 。显色：可见光下观察，再在紫外光下观察，经氨气熏后再观察。（3）芦丁槲皮素的性质实验：样品制备：取芦丁，槲皮素精品各约 10mg（豆粒大）用 5ml 甲醇溶解定性试验：取上述试液 1ml 分别置于小试管中，按下列方法进行实验，比较苷元和苷的反应情况。、Molish 反应12加 10%-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加 0.5ml 浓硫酸。静置观察液面交界处颜色变化。、盐酸-镁粉反应取样品液 1ml 分别置于两只小试管中，加镁粉约 50mg 滴加几滴浓盐酸，观察颜色变化。、Mg(OAc 2)纸片反应取两张滤纸条，分别滴 2 滴芦丁、槲皮素的甲醇溶液，然后各加 1%的Mg(OAc) 2 甲醇溶液 2 滴，于紫外灯下观察荧光变化。、
