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1、西藏虎头兰培育技术规程 地方标准编制说明（征求意见稿）西藏虎头兰培育技术规程 标准起草组2019年4月目录1 背景及任务来源I2 意义和目的I3 标准编制过程14 编制原则15 技术依据15.1标准的格式15.2相关术语16 标准编制主要内容说明16.1组织培养16.2苗期管理76.3病虫害防治76.4换袋86.5水肥管理96.6包装96.7运输96.8档案管理97 专利及实际知识产权情况9DBXX/ XXXXXXXXX1 背景及任务来源西藏虎头兰(CymbidiumtracyanumL.)又称大虎头兰、西姆比兰、新美娘兰、东亚兰、蝉兰，属兰科兰属，多年生常绿草本植物，产云南西南部、贵州西南部
2、至东南部和西藏东南部，生于林中大树干上或树杈上，也见于溪谷旁岩石上，海拔1200-1900米。西藏虎头兰花具有株型优美、花朵硕大、花形端庄、香味浓郁、花期长等特点，在市场上很受消费者欢迎，用于盆栽，也可作切花，为兰花栽培广泛种，具有很高的观赏和经济价值。2006年课题组承担了贵州省科技厅 “贵州特色兰花培育技术研究及产业示范” 项目。项目组就西藏虎头兰资源开展了相关工作，调查地点主要选择黔西南的兴义册亨安龙望谟等地，摸清了西藏虎头兰的资源状况，进行了西藏虎头兰的引种、驯化、保存技术研究，掌握了西藏虎头兰的栽培技术要点。2008年、2009年开展了西藏虎头兰组培技术研究，从无菌播种、增殖分化、壮
3、苗生根、炼苗移栽等技术环节对其进行了完整的组培快繁技术体系研究。2011年，课题组成员经过年多的技术攻关，已成功掌握西藏虎头兰组培繁殖的核心技术，部分研究成果发表于植物生理学通讯（2009年1期）。2016年，团队成员利用组培和分株方式繁殖技术，已成功培育出10000株优质西藏虎头兰开花株。通过前期的研究基础，课题组于2017年4月申报贵州省质监局标准项目，当年9月成功立项。2 意义和目的 制定贵州省地方标准西藏虎头兰培育技术规程，为我省兰花产业化进程中提供快繁技术规程，推动我省花卉标准化、规范化培育进程。 103 标准编制过程2017年9月贵州省质监局标准项目成功立项，在接到省局制定标准的计
4、划任务后，标准起草小组立即明确了工作指导思想，制定了工作原则，10定了起草小组人员的分工。起草小组首先收集、查阅了大量国内相关标准、技术资料。采取独立或集中的形式对相关标准进行学习，进一步安排试验验证相关数据的准确性，为标准的起草收集第一手材料。2018年8月，主管单位林业厅组织相关专家对工作组讨论稿进行了广泛的讨论，经多次修改完善形成了标准初稿；2018年9月经标准化院审核后提出意见，并对相应意见进行修改，修改完成后提交到标准化处，形成征求意见稿。4 编制原则 坚持理论与实践相结合的原则。坚持相关数据支撑来源于科学研究与实践的原则。坚持科学研究与技术熟化相结合的原则；把多年来的项目组的研究成
5、果进行总结、提炼、完善，使之规范化和标准化。坚持科研与生产相结合的原则；标准中的技术要素是紧密结合生产实际制定的，具有可操作性和应用的普及性。5 技术依据5.1标准的格式本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写的规定起草，在标准编写软件TCS2009中编写。5.2相关术语原球茎种子经过3周培养后，胚开始膨大，种皮破裂，继而呈乳白色球状体，称为原球茎。增殖分化由原球茎增殖产生的后代，在形态结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。6 标准编制主要内容说明6.1组织培养6.1.1种子选用性状典型稳定，生长健壮无病虫害的植株进行人工授粉，取授粉后480d成熟尚未开裂的
6、西藏虎头兰蒴果。以蒴果里的西藏虎头兰种子为繁殖材料。6.1.2 培养条件实验室要求符合GB 19489和GB/T 22278规定。培养温度为25.02，光照强度40molm-2s-1，光照时间12hd-1。6.1.3培养基母液的配制和保存MS培养基母液，所用药品符合GB 437、GB/T 628、GB/T 647、GB/T 659、GB/T 664、GB/T 666、GB/T 671、GB/T 1272、GB/T 1274、GB/T 1401、GB/T 15899的规定。 将培养基配方扩大若干倍，一般为10100倍的浓缩液体。药品配制严格按照GB/T 603规定方法配制；所用水应符合GB/T
7、6682的要求。为了避免药品交叉污染，称取药品使用的钥匙必须专药专用。将配制好的母液分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数和日期，贮存在24的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配制。 6.1.4 激素母液配制和保存将各种植物生长调节剂单独配成浓度为0.51.0mg/ml。多数植物生长调节剂难溶于水，其溶解方法：NAA、IBA等常用少量95%的乙醇溶解，然后加热溶解，再加蒸馏水定容。6-BA先用少量1mol/L盐酸溶解，再加蒸馏水定容。所用水要符合GB/T 6682的要求。配制好植物生长调节剂然后过滤灭菌，分别贴上标签，标签写上名称、配制浓度和日期，分装贮存在-2
8、0的冰箱中，储藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配制。6.1.5 培养基配制以MS为基本培养基，添加新鲜马铃薯、蔗糖、琼脂、水。6.1.5.1种子萌发培养基（1）MS+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（2）1/2MS+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（3）MS+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（4）1/2MS+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（5）MS+椰乳100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（6）1/2MS +椰乳100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂6.1.5.2原球茎继代增殖培养基（1）MS+NAA0.1+ 马铃薯100mlL
9、-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（2）MS+NAA0.5+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（3）MS+NAA1.0+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（4）MS+6-BA0.5+NAA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（5）MS+6-BA1.0+NAA0.1+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（6）MS+6-BA2.0+NAA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（7）MS+Kt0.5+IBA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（8）MS+Kt1.0+IBA0.2+马铃薯100m
10、lL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（9）MS+Kt1.5+IBA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂6.1.5.3壮苗及生根培养基（1）花宝1号3 gL-1+IBA0.5+活性炭2gL-1（2）花宝3号3 gL-1+IBA0.5+活性炭2gL-1（3）1/2MS+IBA0.2+活性炭2gL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂（4）1/2MS+IBA0.4+活性炭2gL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂6.1.6 结果分析6.1.6.1种子萌发培养基筛选发育480 d的种子分别接种到萌发培养基（1）（6）上，培养3周左右，可见虎头兰种子肿胀继而呈乳白色原球体状，继续培养8周后原
11、球茎转绿，有叶原基出现，原球茎之间有白色绒毛黏连。培养基（1）、（2）种子萌发率约40%；培养基（5）、（6）种子萌发率约60%；培养基（3）、（4）上的种子萌发率可达90%以上，种子在各培养基上均有萌发，只是萌发率各有不同，表明添加马铃薯有利于西藏虎头兰种子萌发。培养基（3）较培养基（4）萌发速度快，可提前20 d左右，表明MS培养基较1/2MS培养基更有利于西藏虎头兰种子萌发生长。见表1。表1 种子萌发培养基筛选序号培养基萌发率（%）1MS+2.0%蔗糖+0.6%琼脂4021/2MS+2.0%蔗糖+0.6%琼脂403MS+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂9041/2MS+
12、马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂905MS+椰乳100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂6061/2MS +椰乳100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂606.1.6.2原球茎继代增殖培养基筛选将带有叶原基的原球茎转移至培养基（1）（9），培养120 d原球茎长出小芽，同时小芽的基部又有新的原球芽产生。培养基（1）、（2）、（3）原球茎增殖快，球与球之间呈快状相连，分化出的芽较少；培养基（7）、（8）、（9）分化出的芽有部分玻璃化且随着Kt浓度的增加尤为甚；培养基（4）、（5）、（6）原球茎成苗快，培养基（4）原球茎大多形成植株且长势好，培养基（6）原球茎分化出的苗很
13、多，比较纤弱，健壮程度不高；培养基（5）原球茎的分化介于两者之间。由此可见，NAA和6-BA组合当中，随着6-BA浓度的增加，植株有弱化的趋势。见表2。表2 原球茎继代增殖培养基筛选序号培养基分化率（%）1 MS+NAA0.1+ 马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂202 MS+NAA0.5+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂153 MS+NAA1.0+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂304 MS+6-BA0.5+NAA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂605 MS+6-BA1.0+NAA0.1+马铃薯100mlL-1+2
14、.0%蔗糖+0.6%琼脂406 MS+6-BA2.0+NAA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂457 MS+Kt0.5+IBA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂138 MS+Kt1.0+IBA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂109 MS+Kt1.5+IBA0.2+马铃薯100mlL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂86.1.6.3壮苗及生根培养基筛选将较大的无根苗转入生根培养基（16）（19）上培养，培养30 d左右，即可长出23条约1 cm长的根，培养基（16）、（17）不定根的诱导率为70%，培养基（18）、（19）不
15、定根的诱导率达95%以上，植株生长旺盛，7周后形成35 cm的小苗，培养基（18）比培养基（19）根系发达，说明低浓度的IBA有利于根的产生，高浓度IBA对根的萌发有抑制作用。表3 壮苗及生根培养基筛选序号培养基生根率（%）1 花宝1号3 gL-1+IBA0.5+活性炭2gL-1702 花宝3号3 gL-1+IBA0.5+活性炭2gL-1703 1/2MS+IBA0.2+活性炭2gL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂954 1/2MS+IBA0.4+活性炭2gL-1+2.0%蔗糖+0.6%琼脂956.1.7 pH值培养基最佳pH值控制在5.25.4，用pH计测试，常用（1mol/L）NaOH或HCl进行调整。6.1.8培养基的分装和灭菌将配制好的培养基在
