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1、1补肺片抗炎止咳作用的实验研究作者：黄开珍姚平冼寒梅陈旭林国彪【摘要】目的观察补肺片的抗炎止咳作用。方法用二甲苯致小鼠耳炎症和腹腔毛细血管通透性法观察补肺片对小鼠急性炎症的作用，用小鼠棉球肉芽肿法观察补肺片对小鼠慢性炎症的作用，用浓氨水致咳及小鼠排泌酚红观察补肺片的止咳化痰作用。结果补肺片高、中、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀没有抑制作用（P0.05） ；补肺片高、中剂量小鼠腹腔毛细血管通透性的急性炎症有明显的抑制作用。补肺片高、中剂量组对小鼠皮下肉芽肿的慢性抗炎具有明显的抑制作用（P0.05） 。补肺片高、中、低各剂量对小鼠浓氨水致咳嗽次数和致咳潜伏期均有明显作用（P0.01） 。对小鼠气
2、管排泌酚红的化痰实验，补肺片高、中、低各剂量组均有明显祛痰作用(P0.05);Bufeitabletsinhigh,middledosegroupssignificantlyinhibitedmicecapillarypermeabilityofacuteinflammation.Bufeitabletsinhigh-dosegroupsignificantlyinhibitedmicesubcutaneousgranulomachronicanti-inflammatory(P0.05).Thefrequencyofcoughandlatentperiodofcoughcausedbystr
3、ongammoniaandtheexcretionofphenolredintheairwayofmicewithwassignificantlyinhibitedbyBufeitablets（P0.01）.ConclusionBufeitabletshavetheeffectsofanti-inflammation,reducingsputumandrelievingcoughandenhancingtheimmunocompetenceofthebody.Keywords：Bufeitablets；Anti-inflammation；Antitussive肺气虚证是慢性阻塞性肺疾病（chr
4、onicobstructivepulmonorgdiseaseCOPD，简称为慢阻肺）常见证候，是一种以气流受限为特征的疾病，其气流受限不完全可逆，是进行性发展，与肺部对有害气体或有害颗粒引起的异常炎症有关1 ，是一种破坏性的肺部疾病，临床上以咳嗽、咯痰、胸闷等为主症。根据 COPD 的病理特征，治疗方法主要是辨证2论治，治则可概括为祛邪扶正，活血化淤、化痰降气、急则治标，缓则治本或标本兼治。运用中医药治疗 COPD 具有较好的疗效，尤其是稳定期患者，中医药治疗具有改善症状，减少发作次数，提高免疫功能，而且有不良反应小的优点。根据中医理论，研制出一种中成药制剂“补肺片” 。该药采用扶正固本的传
5、统方剂“玉屏风散”为基础，另加补肺益气，化痰止咳的多种中药及蛤蚧等配制而成。历年来我们应用本药防治具有肺气虚证的 COPD 病人五百多例，总有效率达 85%以上。药理实验证实：“玉屏风散”对体液免疫有调节作用2 ，对流感病毒有抑制作用3和有抗细菌粘附作用4 。我们多年来采用“补肺片”防治肺气虚证的 COPD 病人，取得较好疗效，深受患者欢迎。本实验就“补肺片”抗炎止咳机理方面进行一些探讨。1 材料与仪器1.1 药物和试剂补肺片，广西中医学院药剂实验室制得；冰醋酸，广西南宁化学试剂厂，批号：030212；二甲苯，中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20030311；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股
6、份有限公司，批号：060221；戊巴比妥钠，桂林南药股份有限公司，批号：040215；磷酸可待因，青海制药厂有限公司，批号：20060705；远志水提液，广西中医学院药理实验室制得；伊文思兰，上海化学试剂采购供应站分装厂，批号：040515。1.2 动物动物为昆明种小鼠，普通级，由广西中医学院实验动物中心提供，小鼠合格证号:桂医动字 11004。1.3 器材 1.80-2 型离心机，上海手术器械厂生产；722 型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；AEU-210 型电子天平，日本岛津厂生产。2 方法52.1 抗炎实验2.1.1 补肺片对小鼠腹腔通透性和二甲苯致小鼠耳炎症的影响取 1822g 小
7、鼠 60 只，雌、雄各半，随机分组，分为 5 组：空白对照组，阳性给药组，补肺片高剂量组，补肺片中剂量组，补肺片低剂量组。空白对照组用生理盐水；阳性组药物用地塞米松；补肺片组用补肺片。每鼠每天 i.g 给药，连续 7d，末次药后 1h，尾静脉注射 0.25%伊文思兰，右耳滴二甲苯 0.02ml 致炎，i.p0.6%冰醋酸0.2ml/只，15min 后，脱颈椎处死小鼠，用 6mm 的打孔器沿左右耳廓相同部位打下两侧耳片，分别称重；用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液，于 722 分光光度计590nm 处测定 OD 值，作 t 检验，以两耳片重量差值作为肿胀度，比较药物与对照组之间的差异。2.1.2 补
8、肺片对小鼠棉球肉芽肿的影响取 1822g 小鼠 60 只，雌、雄各半，随机分组，分为 5 组：空白对照组，阳性给药组，补肺片高剂量组，补肺片中剂量组，补肺片低剂量组。空白对照组用生理盐水；阳性组药物用地塞米松；补肺片组用补肺片。先将 20mg 灭菌球(紫外线消毒 1h)，植入小鼠两侧背部皮下。各3组手术第 2 天开始灌胃给药，1 次/d，共给 7d。第 8 天脱颈处死小鼠，剥离肉芽肿称湿重，60烘干箱内干燥 8h，再称重，同时剥离肾上腺、胸腺、脾脏，称湿重。湿重、干重均以 mg/g 计算，进行组间比较。数据以s 表示，各组间均数比较采用 t 检验。2.2 补肺片对小鼠浓氨水致咳的止咳作用取 1
9、822g 小鼠 60 只，雌、雄各半。随机分为补肺片高、中、低剂量组、磷酸可待因阳性对照组和生理盐水空白对照组，共 5 组，每组 12 只小鼠。i.g 给药，磷酸可待因组前 6d 给水，第 7 天给药，末次药后 1h 浓氨水(25%28%)喷雾 5s，压力为 120200W，喷雾终止，记录 2min 内小鼠咳嗽数和潜伏期。2.3 补肺片对小鼠气管排泌酚红的影响取 1822g 小鼠 60 只，雌、雄各半，随机分组，分组同“2.1.1”项，阳性组药物用 100%远志水提液。每鼠每天 i.g给药，给药 7d。末次药前小鼠禁食 1d，不禁水，i.g 给药，45min 后每鼠再i.p5%酚红生理盐水液
10、0.5ml/只，15min 后，处死小鼠，钝性分离气管，用5%NaHCO3 洗涤 3 次，0.5ml/次，回收洗液，于 722 分光光度计测定吸收度。比较药物与对照组之间的差异。3 结果3.1 补肺片对小鼠腹腔通透性和二甲苯致小鼠耳炎症影响的实验见表 12。表 1 补肺片对小鼠二甲苯所致耳炎症的影响（略）与空白对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12表 1 结果显示：与空白对照组比较，地塞米松组对小鼠耳二甲苯致的炎症有明显的抑制作用，补肺片高、中、低剂量组没有明显的抑制作用。表 2 补肺片对小鼠腹腔毛细血管的通透性影响（略）与空白对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12表 2
11、结果显示：地塞米松组与空白对照组比较有显著性差异（P0.05） ，补肺片高、中剂量组有显著性差异(P0.05)，低剂量组没有明显作用。3.2 补肺片对小鼠棉球肉芽肿的影响及对免疫器官的影响见表 34。表 3 补肺片对小鼠肉芽肿的影响（略）与空白对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12表 3 结果显示：给药组与空白对照组比较，补肺片中剂量组和阳性给药组对小鼠肉芽肿的影响有显著性的作用。表 4 补肺片对免疫器官的影响（略）4与空白对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12表 4 结果显示：地塞米松组与空白对照组比较，胸腺指数及脾脏指数有极明显差异(P0.01)；空白组与补肺片剂量组比
12、较，胸腺指数、脾脏指数补肺片高、中剂量组都有显著性差异(P0.05 或 P0.01)，低剂量组作用不明显。3.3 补肺片对小鼠浓氨水致咳的止咳作用见表 5。表 5 补肺片对小鼠浓氨水致咳的止咳作用（略）与空白对照组比较，*P0.05,*P0.01；n=12表 5 结果显示:给药组与空白对照组比较，补肺片高、中、低各剂量和阳性给药组对小鼠浓氨水致咳的咳嗽次数与潜伏期有极显著性差异(P0.01)。3.4 补肺片对小鼠气管排泌酚红影响的实验结果见表 6。表 6 补肺片对小鼠气管排泌酚红的影响（略）与空白对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12表 6 结果显示:给药组与空白对照组比较，补肺片高
13、、中、低剂量组和阳性给药组均有极显著性的祛痰作用(P0.01)。4 讨论本实验采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导的小鼠腹腔通透性实验所导致的渗出性炎症变化，具有高度的重复性，结果可靠。小鼠棉球肉芽肿模型是一亚急性(慢性)炎症模型，是局部异物持续刺激的迟缓性变态反应，有异物的病灶内表现为肉芽肿的形成，该模型是评定药物抗增殖作用的常用模型。有研究表明，补肺片对体液免疫有较强的促进作用4 ，研究显示所有 COPD 病例在入院初期时的血 CD4，CD8 及 NK 细胞均低于正常水平，说明炎症患者存在细胞免疫功能异常；补肺片具有较强的免疫刺激和免疫调节作用。其主要的靶细胞为 T 细胞，可促进 T 淋
14、巴细胞分化及成熟，增加 T 淋巴细胞前体数量，增强 Th 细胞的功能，在应用补肺片治疗后 CD4，及 CD8，T 细胞、NK 细胞较对照组显著增高。补肺片能够改善机体细胞免疫功能的失调，使免疫功能上调，增强机体的抗感染能力，这对于存在免疫功能失调的炎症患者将更利于缓解病情和改善预后5 。急则治其标，缓则治其本的中医治疗原则，支气管哮喘缓解期以扶正固本，健脾益气，补肾纳气之法治之6 。本研究选用“补肺片”治疗缓解期哮喘就是基于此理。方中黄芪益气固表，党参补益肺气，白术健脾益气，三药合用使气旺表实，邪不易内侵；防风解表祛风，并御风邪；蛤蚧补肺气、助肾阳，通过补肾纳气以定喘；再加敛肺止咳、化痰止咳的五味子、桔梗，使全方既有益气固表，祛邪止汗之功，5又有敛肺止咳平喘的治标之效。实验显示补肺片是通过抑制毛细血管通透性，抑制肉芽组织的增生发挥抗炎作用，并在抗炎的同时能增加胸腺、脾脏的重量，提示补肺片抗炎而不降低机体的免疫功能；通过抑制小鼠咳嗽次数及咳嗽的潜伏期，促进小
