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1、1维药白刺总黄酮对亚急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究【摘要】目的考察唐古特白刺果总黄酮对衰老模型小鼠氧化能力的影响。方法用 D-半乳糖制备衰老模型小鼠，以酶标法测定小鼠血清和肝组织中MDA,SOD,GSH-PX 指标的变化。结果白刺果中总黄酮能显著降低衰老小鼠血清和肝组织 MDA 水平，同时可提高 SOD 和 GSH-PX 活力水平。结论唐古特白刺果总黄酮具有抗氧化作用。【关键词】唐古特白刺总黄酮抗氧化ResearchontheAnti-oxidativeEffectofTotalFlavonoidsofUighurMedicinesNitrariatangutorunBobr.inSubac
2、uteAgingModelMiceAbstract：ObjectiveTostudytheeffectofanti-oxidativeinsubacuteagingmodelmicewithtotalflavonoidsofUighurmedicinesNitrariatangutorunBobr.MethodsTheagedmicewereinducedbyipD(+)-galactosefor8weeks.Determinedmalondialdehyde(MDA)superoxidedismutase(SOD),glutathioneperoxidase(GSH-PX)inthemice
3、sserumandHeparwithmodel680MicroplateSpectrophotometer.ResultsTotalflavonoidsofUighurmedicinesNitrariatangutorunBobr.notonlyhadsignificantinhibitioneffectonMDAlevelsbutalsoincreasedtheratioofSODactivityandGSH-PXactivity.ConclusionThetotalflavonoidsofUighurmedicinesNitrariatangutorunBobr.hasgoodanti-o
4、xidativeeffect.Keywords：NitrariatangutorumBobr;Totalflavonoids;Anti-oxidativeeffectD-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型因其衰老变化明显,模型稳定,在抗衰老研究中被广泛应用1 。一般认为,D-半乳糖引起的代谢紊乱使机体过氧化反应增强是其致老化反应的重要因素。唐古特白刺 NitrariatangutorunBobr.为中国特有种,是蒺藜科典型的旱生荒漠植物，具有耐干旱，耐盐碱，能适应高温低寒的特点。唐古特白刺资源丰富，分布广泛，是新疆防风固沙的优良野生树种2 。唐古特白刺的果实在新疆作为维吾尔民间药物入药，具有健脾胃、调
5、经活血、降压等作用。常用于治疗消化不良、月经不调和高血压、头晕等疾病，临床证明疗效确切，无毒副作用。近年来对唐古特白刺的研究报导很多，但对其药理作用的研究甚少，仅见有关白刺果实有降血脂和抗氧化作用的报道3 ，果实中化学成分繁多复杂，到底哪种成分起效尚不清楚，因此，为了深入研究民族药，并为维药白刺的充分开发利用提供科学依据，本文研究了维药白刺总黄酮对衰老模型小鼠氧化能力的影响。现报道如下。21 材料与方法1.1 药品1.1.1 白刺果总黄酮提取与制备唐古特白刺果（石河子大学生命科学学院阎平教授鉴定为 NitrariatangutorunBobr.） ，采自新疆北部地区。样品采集后自然晾干，机械粉
6、碎，过 20 目筛后备用。称取白刺果粗粉适量，置圆低烧瓶中，以料液比 17 加入 80的乙醇，水浴加热回流 2h，重复提取 4 次，合并提取液并浓缩至浸膏。用碱溶解酸沉淀法制得白刺总黄酮样品。1.1.2 阳性对照药维生素 E 胶丸（上海中洋海洋生物工程股份有限公司，批号 050902） 。1.1.3 亚急性衰老模型药 D（+）半乳糖（国药集团化学试剂有限公司，批号F20050711） 。1.2 试剂与仪器 SOD 试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号 20051108） ；MDA 试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号 20051221） ；GSH-PX 试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号 2
7、0051111） ；蛋白定量测试盒（南京建成生物工程研究所,批号 20051220） ；Model680 酶标仪（美国 BIO-RAD 公司） ；TDL-5000 低温冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂） ；PufferHubbard 超低温冰箱（美国 HARRIS公司） ；XW-80A 旋涡混合器（上海精科实验有限公司） ；电热恒温水浴锅（北京泰克仪器有限公司） ；TN 型托盘式扭力天平（上海第二天平仪器厂） 。1.3 动物分组与处理健康昆明小鼠 96 只(石河子大学实验动物中心提供)，体重(255)g，雌()雄()各半，喂养普通饲料适应 1 周后,空腹称重，眼底静脉采血测血清 MDA 后随机分
8、为 6 组，每组 16 只，各半。组间体重、血清MDA 水平无明显差异。6 组分别是正常组腹腔注射(ip)生理盐水+灌胃(ig)蒸馏水 ，衰老模型组ipD（+）半乳糖 200mg/kg+ig 蒸馏水 ，低剂量组ipD（+）半乳糖 200mg/kg+ig 白刺果总黄酮 50mg/kg ，中剂量组ipD（+）半乳糖200mg/kg+ig 白刺果总黄酮 100mg/kg ，高剂量组ipD（+）半乳糖200mg/kg+ig 白刺果总黄酮 200mg/kg ，阳性对照组ipD（+）半乳糖200mg/kg+ig 维生素 E100mg/kg 。1.4 标本采集本实验用昆明小鼠 ipD（+）半乳糖造成衰老模型
9、，ipD（+）半乳糖后 6 周，模型组小鼠血清 MDA 高于正常对照组，但无统计学意义；当时间增至 8 周后，血清 MDA 明显高于正常，两组数据比较有显著意义，故实验时间定为8 周。8 周后取材，所有小鼠于取材前 1d 停饲料，并禁食 12h，乙醚麻醉，眼底静脉取血，颈椎脱离处死，取肝脏，制备血清及肝匀浆，储存于-20备用。1.5 统计方法采用 SPSS12.0 软件处理，实验数据以s 表示，多组间比较用方差分析，两均数比较用 t 检验。32 结果2.1 白刺果总黄酮对实验性衰老模型小鼠肝系数的影响小鼠造模 8 周后,各给药组与模型和正常对照组的肝系数虽有差别，但各组之间比较,经统计学分析无
10、显著性差异(P0.05)。见表 1。表 1 白刺果总黄酮对实验性衰老模型小鼠肝系数的影响（略）2.2 白刺果总黄酮对衰老模型小鼠血清和肝组织脂质过氧化物 MDA 含量的影响 MDA 常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。血清 MDA 测定数据显示：模型组血清脂质过氧化物 MDA 含量比正常饲料组有明显增高(P0.001)，阳性对照组及高、中剂量组均能明显降低血清 MDA 水平，与模型组比较均有显著性意义(P0.05） ；肝组织 MDA 测定数据显示：模型组肝组织MDA 含量造模后比正常饲料组 MDA 有极明显增高(P0.001)，而阳性对照组、高剂量组、中、低剂量组均能
11、明显降低肝组织 MDA 水平，与模型组比较均有显著意义(P0.01)。见表 2。表 2 白刺果提取物对实验性高脂模型大鼠 MDA 的影响（略）2.3 白刺果总黄酮对衰老模型小鼠血清和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响 SOD 对机体的氧化和抗氧化平衡起着至关重要的作用。血清 SOD 测定数据显示,模型组血清 SOD 含量造模后比正常饲料组有极明显降低(P0.001),阳性对照组及高、中剂量组均能明显升高血清 SOD 活力水平，与模型组比较均有显著统计学意义(P0.05） ；肝组织 SOD 测定数据显示：模型组肝组织 SOD 含量造模后比正常饲料组 SOD 有明显增高(P0.001),而阳
12、性对照组、高剂量组均能明显升高肝组织 SOD 活力水平,与模型组比较均有显著意义(P0.01)，中剂量组虽没有阳性对照组作用强，但与模型组比较具有显著性差异(P0.05)，低剂量组作用与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义。见表 3。表 3 白刺果总黄酮对衰老模型小鼠 SOD 活力的影响（略）2.4 白刺果总黄酮对衰老模型小鼠血清和肝组织 GSH-PX 含量的影响 GSH-PX是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。血清 GSH-PX 测定数据显示:模型组血清 GSH-PX 含量造模后
13、比正常饲料组有极明显降低(P0.001)，阳性对照组及高剂量组均能明显升高血清 GSH-PX水平，与模型组比较均有显著意义(P0.001)，中剂量组虽没有阳性对照组作用强，但与模型组比较具有显著性差异(P0.05)，低剂量组作用与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义；肝组织 GSH-PX 测定数据显示:模型组肝组织GSH-PX 含量造模后比正常饲料组 GSH-PX 有明显降低(P0.001)，而阳性对照组、高、中剂量组均能明显升高肝组织 GSH-PX 活力水平，与模型组比较均有极显著意义(P0.001)，低剂量组作用与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义。见表 4。表 4 白刺果总黄酮对衰
14、老模型小鼠 GSH-PX 的影响（略）3 讨论4在模型形成期间，可以逐渐观察到模型组小鼠的皮毛，活动状态与正常组及其它组的区别。模型组小鼠的皮毛颜色暗淡，有掉毛的倾向，并且活动迟缓。一般认为给小鼠连续注射 D-半乳糖后,因其代谢产物半乳糖醇不能进一步代谢而堆积在细胞内,导致细胞肿胀,致使小鼠组织细胞出现衰老时的退行性改变以及功能的改变410 ，同时 D-半乳糖在体内氧化产生的大量自由基超过机体的清除能力,引发脂质过氧化的链式反应,并且过氧化脂质(LPO)的分解终产物(如 MDA)可与 DNA,RNA 蛋白质、磷脂等物质结合,损伤细胞膜,引起神经系统的功能障碍12，13，18，19 。通过检测小
15、鼠血清、肝组织 MDA，SOD，GSH-PX 的水平，得出模型组的 MDA 水平显著升高，SOD，GSH-PX 活力水平显著降低。实验证明,高剂量组与阳性对照组比较，小鼠中血清、肝组织 MDA 降低、SOD，GSH-PX 的活力升高；中剂量组与阳性对照差别有的不是很显著，提示在进一步的研究时剂量可以以中剂量组的数据做参考进行相关数据换算11，1417 。低剂量组虽没有阳性对照组作用显著，但与模型组比较也可以降低小鼠中血清、肝组织 MDA、升高小鼠中血清、肝组织 SOD，GSH-PX 的活力。因而推测白刺总黄酮可能通过提高机体内 SOD 和 GSH-PX 活性,增强其对自由基的清除能力,抑制脂质
16、过氧化，降低体内 MDA 的生成,从而起到保护机体组织的作用，同时达到延缓衰老的目的20 。【参考文献】1邵义祥.医学实验动物学教程M.南京：东南大学出版社，2003：224.2严奉伟,罗祖友,吴季勤，等.菜籽多糖的抗氧化作用与机理研究J.中国农业科学，2005,38(1):157.3江苏新医学院.中药大辞典M.上海:上海科学技术出版社,1977：644.4胡一鸿,牛健康.超氧化物歧化酶研究进展J.生物学教学，2005,30(1):2.5王素敏,张杰,李兴琴，等.车前子对高脂血症大鼠机体自由基防御机能的影响J.中国老年学杂志，2003,23:529.6孙晓芳,韩艳梅,杜锦朵，等.辅酶 Q10 抗衰老小鼠的脂质过氧化作用J.中华实用中西医杂志，200
