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1、1维生素 A 和锌摄入对大鼠卵巢脂质过氧化影响维生素 A(VA)和锌(Zn)均是机体生长发育必需的微量营养素，但过量摄入 VA和 Zn 对机体具有一定的损伤作用。研究发现，两者的过量可降低脾脏的抗氧化功能，造成脂质过氧化损伤1 。本研究通过建立初成年 SD 雌性大鼠 VA 和 Zn过量摄入模型，探讨 VA 过量、Zn 过量、VA 和 Zn 联合过量对初成年雌性大鼠生殖系统的影响，从氧化应激角度探讨过量摄入 VA、Zn 对雌性大鼠生殖系统的可能毒性机制。1 材料与方法11 材料111 实验动物动情周期正常的初成年健康 SD 雌性大鼠(SPF 级)72 只，8周龄，体重(18015)g，(甘肃中医
2、学院实验动物中心，动物证号：SCXK(甘)2004-007)。112 试剂 VA 醋酸酯(粉剂)，纯度为 325 万 Ug(北京嘉康源化工有限公司)；硫酸锌(ZnSO47H2O)，分析纯(莱阳化工实验厂)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。113 仪器 722 型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；SHA-B 型水浴恒温振荡器(常州国华电器有限公司)；TGL-6G-A 型高速冷冻离心机(上海安亭化学仪器厂)；120 型台式电子天平(德国赛多利斯天平有限公司)。12 方法121
3、剂量选择与分组阴道涂片法连续涂片 10d，筛检动情周期连续 2 次为 45d 的初成年健康 SD 雌性大鼠 72 只，分笼单只喂养，喂饲营养均衡饲料，饮双蒸水，随机分为 6 组，每组 12 只，每日定时等容积(05ml) 灌胃给予大鼠受试物，具体剂量2为，正常对照组(CG)：双蒸水 05ml d；Zn 实验组(ZnG)：累计剂量相当于大鼠 20 倍推荐摄入量(RNI)；VA 实验组(VAG)：累计剂量相当于大鼠 30 倍 RNI；VA 和 Zn 联合实验 I 组(VA+Zn)IG：VA 和 Zn 累计剂量分别相当于大鼠 10 倍、20 倍 RNI；VA 和 Zn 联合实验组(VA+Zn)G：V
4、A 和 Zn 累计剂量分别相当于大鼠 30 倍、20 倍 RNI；VA 和 Zn 联合实验组，(VA+Zn)G：VA 和 Zn 累计剂量分别相当于大鼠 50 倍、20 倍 RNI，1 次d，连续 30d，期间正常喂饲双蒸水，每隔 3d 称重 1 次。122 卵巢组织匀浆制备于染毒第 31d 处死大鼠，分离血清，卵巢称重后剪碎，用玻璃匀浆器加入 001mmol LTris-HCl 缓冲液001mol L 蔗糖、01mmol L 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)制成 10(mv)组织匀浆，5000rmin 离心 10min，取上清液待测。2123 指标测定血清和卵巢组织中 SOD、GSH-Px
5、 活性、T-AOC、MDA 含量的测定依据试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书进行，卵巢组织蛋白以总蛋白浓度来校正。13 统计分析采用 SPSS115 软件进行单因素方差分析，并进行对照组与实验组的两两比较。2 结果21VA 和 Zn 摄入对 SOD、GSH-Px 活性的影响在卵巢组织中，各实验组SOD、GSH-Px 活性与 CG 比较明显降低各实验组与 CG 比较，差异均有统计学意义，(P001) ；(VA+Zn)G 与 ZnG 比较 GSH-Px 活性降低(P005) ；(VA+Zn)G 与 VAG 比较 GSH-Px 活性降低(P005) ；(VA+Zn)G 与(VA+Zn)G 比较G
6、SH-Px 活性降低(P005) 。在血清中，各实验组 SOD 活性与 CG 比较，除ZnG 降低外，其余各实验组均升高，但差异无统计学意义；(VA+Zn)IG 与 ZnG 比较 SOD 活性升高(P005) ，各实验组 GSH-Px 活性与 CG 比较，除ZnG、(VA+Zn)IG 降低外，其余各实验组均升高，但差异无统计学意义；(VA+Zn)G 与 ZnG 比较 GSH-Px 活性升高(P005) ，见表 1。表 1VA 和 Zn 摄入对雌性大鼠卵巢及血清 SOD 活性、GSH-Px 活性的影响（略）注：与 CG 比较，aP001 ；与 ZnG 比较，bP005 ；与 VAG 比较，cP0
7、05 ；与(VA+Zn)G 比较，dP00522VA 和 Zn 摄入对 T-AOC 活力、MDA 含量的影响在卵巢组织中，各实验组T-AOC 活力与 CG 比较明显降低(各实验组与 CG 比较，差异均有统计学意义，P001 ，其中(VA+Zn)IG 和 ZnG 与 CG 比较，P005 ；各实验组 MDA 含量与 CG 比较，除 ZnG 与 VAG 升高外，其余各联合实验组均降低，但差异无统计学意义；(VA+Zn)IG 与 ZnG 比较，MDA 含量降低(P005) ；(VA+Zn)G 与ZnG 比较，MDA 含量降低(P005) 。在血清中，各实验组 T-AOC 活力与 CG 比较降低，(V
8、A+Zn)G 和(VA+Zn)G 与 CG 比较，差异有统计学意义，P005 ，各实验组 MDA 含量与 CG 比较均降低；(VA+Zn)G 与 CG 比较，差异有统计学意义(P005) ；(VA+Zn)G 与(VA+Zn)IG 比较，MDA 含量降低P005 ，见表 2。表 2VA 和 Zn 摄入对雌性大鼠卵巢及血清 T-AOC 活力、MDA含量的影响（略）注：与 CG 比较，aP005 ，bP001 ；与 ZnG 比较，cP005 ；与(VA+Zn)IG 比较，dP0053 讨论摄入大剂量 VA 可引起急性、慢性及致畸毒性3,4 ，过量摄入 Zn 可以损害3免疫器官和免疫功能5，6 ，VA
9、 和 Zn 具有某些相似的生理功能，可能具有协同效应7,8 。本研究观察到过量摄入 VA、Zn 能引起大鼠卵巢的氧化应激。SOD与 GSH-Px 作为酶系和非酶系自由基清除剂，对维持机体抗氧化能力稳定起关键作用，各实验组卵巢组织中 SOD 活性、GSH-Px 含量有不同程度降低，说明过量摄入 VA、Zn 可抑制 SOD 活性，使 GSH-Px 含量减少，破坏机体氧化平衡状态，从而使细胞抗氧化应激能力下降，而氧化应激会进一步引起脂质过氧化、巯基耗竭等氧化性损伤。T-AOC 是机体防御体系之一，其能力强弱与健康程度存在着密切联系，该体系有酶促和非酶促 2 个体系，这种机能的降低常常导致各种疾病的产
10、生，而过量摄入 VA、Zn 所致的各实验组卵巢组织中 T-AOC 的降低，更进一步证实过量 VA、Zn 所致脂质过氧化损伤作用加剧。在本实验研究剂量下，过量摄入VA、Zn 对大鼠卵巢功能已产生一定的影响，引起卵巢组织的氧化损伤，表现在抗氧化系统活性降低，MDA 增加，由此调节卵巢抗氧化系统的活性，这可能是过量摄入 VA 和 Zn 对生殖系统损伤的毒理机制之一。【参考文献】1周源苑，王玉，马剑华.维生素 A 和锌过量摄入对大鼠脾脏的损伤作用J.中国公共卫生，2006，22（9）：1055-1056.2马剑华，王玉，张格祥，等.过量摄入维生素 A 和锌对肝脏细胞周期的影响J.中国公共卫生,2005
11、,21(8):967-969.3周建烈.维生素 A 的缺乏、补充与中毒J.中国临床营养杂志,2000,8(4):262-264.4王英姿.浓缩鱼肝油致急性维生素 A 中毒 11 例报告J.中国农村卫生事业管理,2003,23(5):63.5贾存英.缺锌与补锌J.微量元素与健康研究,2001,18(1):77.6FengyuanPiao,KazuhitYokoyama,NingMa,etal.SubacutetoxiceffectsofzinconvarioustissuesandorgansofratsJ.ToxicologyLetters,2003,145:28-35.7梁鸿雁,高宏伟,曲永利,等.锌与维生素 A 互作效应的研究J.四川畜牧兽医,2003,30(5):38-39.8李云,罗杰,王瑞淑.维生素 A 的致畸性以及锌对其致畸作用的影响J.华西医科大学,2002,33(4):613-616.
