实验诊断实验课课件

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1、实验一 白细胞计数,一目的：熟悉白细胞计数方法，掌握白细胞计数参考值及临床意义。 二原理：用2%稀醋酸(冰乙酸)作白细胞计数稀释液，可使红细胞溶解，留下白细胞，用血细胞计数板计数一定体积中的白细胞数，计算出每升血液中白细胞的总数。 三器材：白细胞稀释液、显微镜、计数板、采血针、小玻棒、小试管、试管架、微量吸管、小纱布、75酒精棉球、消毒干棉球,四步骤：1.以2冰乙酸溶液为白细胞计数稀释液，用吸管准确吸取稀释液 0.38ml，置于清洁干燥的小试管中。 2.毛细血管采血法:用微量吸管采血至20微升处，擦去管尖外围多余的血液，将管内血液迅速注入试管底部，并用上清液将管内残存血液洗净，立即混匀。待液体

2、呈褐色后，再振荡均匀，用小玻棒取此液注入计数池内，静置23分钟。 3.用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数(N)。 压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右。,五 计算： 四个大方格内白细胞数（N）(N)/41020106白细胞数/升 式中：四个大方格内白细胞总数/4，算出 每个大方格（即0.1微升）内白细胞平均数。 10 把0.1微升换算为1微升。 20 为血液稀释倍数。 106 将1微升换算为1L。 六 参考值 ： 成人 （410）109/L 6个月至2岁婴儿（1112）109/L 新生儿 （1520）109/L,八注意事项： 1稀释倍数一定要准确（包括采血量和加稀释液量）。 2小试管

3、、计数板一定要清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。 3.一定要待稀释液转化为棕褐色后方可进行计数，此时红细胞已完全破坏，否则可因红细胞残留而干扰计数，使结果偏高。 九思考题： 白细胞总数增多的临床意义？,实验二 红细胞计数,一 实验目的：掌握红细胞计数原理和方法，熟悉红细胞参考值及临床意义。 二 实验原理：用红细胞稀释液将血液稀释一定倍数，置于血细胞计数板内，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，然后 再计算出每升血液内的红细胞数。 三 实验器材和试剂： 红细胞稀释液（0.85%NaCl）、显微镜、 小试管、 细胞计数板、盖玻片、微量吸管、试管架、采血针、小 玻棒、75%酒精棉球、小纱布、消毒干

4、棉球、报告单。,四 实验步骤： 1.取试管1支，加红细胞稀释1.99ml。 2.消毒皮肤，用采血针刺破皮肤，使血液自动流出，拭去第一滴血，用一次性微量吸管准确取血10微升。 3.去管尖外部余血，轻轻注入红细胞稀释液底 部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。 4.倾斜试管用小玻棒沾取红细胞悬液，注入血细胞计池内，要求一次充好，不要产生气泡。静置2-3分钟，使红细胞完全沉降。 5.将计数板置于显微镜下用 高倍镜计数中央大方格红细胞计数区四个角和中间的一个中方格共5个中方格内 的红细胞。凡压在中方格边缘上的红细胞，以数上不数下，数左不数右的原则进行计数。,五 计算 R（五个中方格内RBC数

5、） R510106200= .1012个/升 式中： 5：5个中方格内红细胞数换算为1个大方 格内红细胞数 10：1个大方格容积（0.1微升）换算成1微升 106：1微升换算为1升 200：血液稀释倍数 六 实验报告方式：.1012/L 七 正常参考值： 成年男性：4.00-5.501012/L 成年女性：3.50-5.001012/L 新生儿：6.00-7.001012/L,八 注意事项： 1.显微镜物镜接近计数板时应注意，勿损坏计数板及镜头。 2.计数时进入显微镜的光线要适中，否则不易找到方格。计数池内的细胞分布要均匀，各中方格的细胞相差不应超过10%，否则重新计数。 3.试管、计数板须清

6、洁，以免杂质、微粒等被误认为红细胞。 4.稀释倍数要准确。 5.计数完毕后，用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用。 九 思考题： 1.计数不准确的常见原因有哪些？ 2.红细胞数增多减少的临床意义？,实验三 白细胞分类计数,一 实验目的：掌握白细胞分类计数原理和方法，熟悉白细胞分类计数的参考值及临床意义。 二 实验原理：白细胞的胞质、胞核和胞桨颗粒等含有不同的化学成分，其与各种染料的亲和力不同。经染色后能着上不同的颜色，根据颜色的差异，可将白细胞区别并进行分类计数。 三 实验器材和试剂：显微镜 擦镜纸 75 酒精 推玻片 吸水纸 消毒干棉球 载玻片 染色架 瑞氏染色液 采血针 香柏油 缓冲

7、液 吸球 二甲苯,四 实验步骤：1.血涂片制备- 取末梢血一滴，置于载玻片一端，将推片的一端，放在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴好沿推片散开，然后使推片与载玻片间成3045夹角，平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下一均匀薄层血膜，自然干燥。 2. 染色-将干燥后的血膜片置于染色架上。 用瑞氏染液35滴，覆盖整个血膜，固定细胞0.51min。 滴加等量或稍多的缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色510min。 平放玻片，用流水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检。 3.镜检-在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾交界部染色良好的区域滴加一滴香柏油，在油镜下按

8、一定的方向顺序对所见到的每一个白细胞进行分类，既不得重复亦不遗漏，共计数100个白细胞。求出各类白细胞所占的百分率。,瑞氏染色外周血五种白细胞形态特征：,中性杆状核粒细胞,中性分叶核粒细胞,淋巴细胞,单核细胞,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞,外周血各类白细胞的百分率及绝对值,血涂片的制备,五 注意事项： 1.所制血膜片一定要均匀，厚薄适宜，头、体、尾分明。 2.玻片需清洁，血膜干透后才可固定染色。 3.染色时间的长短与染液的浓度、室温高低及有核细胞多少有关。染液浓度愈小、室温愈低、细胞愈多、所需时间愈长。必要时可增加染液量或延长时间。 4.染液不宜过少，以免蒸发干燥，导致染料沾着于血膜上不易冲掉。

9、 5.冲洗时不可先倒掉染液，应让流水从血膜一端缓缓将染液冲去，以免染料残渣附在血膜上。 六 思考题： 白细胞分类计数的临床意义？,实验四 网织红细胞计数,一 实验目的： 熟悉网织红细胞计数的原理和测定方法，掌握网织红细胞参考值及临床意义。 二 实验原理： 网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质中含有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质，经新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构，可区别于完全成熟的红细胞。 三 实验器材和试剂：显微镜、10g/l新亚甲蓝染液，试管、载玻片、香柏油,四 实验步骤： 1. 取小试管1支加10g/l新亚甲蓝染液1滴。 2. 加入血液1滴于上述试管中，混匀。 3. 室温下放

10、置1015分钟后，取1滴制成血膜片。 4. 在低倍镜下选择细胞分布均匀，着色清晰的部位，用油镜计数1000个红细胞内网织红细胞数。 五 计算：网织红细胞百分数网织红细胞数/1000 六 参考值： 成人：0.005-0.015 (0.5%1.5%) 新生儿：0.03-0.06 (3% 6% ),七 注意事项： 1.网织红细胞必须用新鲜血液活体染色才能显示，染液与 血液的比例1：1为宜 2. 血膜制备技术很重要。红细胞应均匀散开，如有重叠 则影响结果的准确性。 网织红细胞体积较成熟红细胞体积稍大，多分布于涂片 的尾部及两侧，故进行计数时应巡视整个血涂片中网 红细胞分布情况再进行计数。 3.染料配制

11、前必须过滤，放置保存过程中应防止有任何沉淀出现以影响计数结果。 4. 为便于计数，可使用米勒窥盘进行计数。 5.血液与染液混合时间必须足够长。 八 思考题：网织红细胞的临床意义？,Miller窥盘为一厚1 mm，直径19mm的圆形玻片，玻片上的微细刻线划分成大小两个正方形。B为小正方形，A为大正方形。B位于A之内， 如附图所示。其中B的边长为A的边长的13，故其面积为A的19。将Miller窥盘置于接目镜内检测网织红细胞涂片。用小正方形（B）计数红细胞,大正方形（A）计数网织红细胞数,再接下式计算: 网织红细胞 %= A格内网织红细胞/ （B格内红细胞数9 ）100%,实验五 凝血酶原时间（P

12、T）测定 凝血酶时间（TT）测定,一 实验目的：掌握PT,TT实验的原理、操作方法和临床意义。 二 实验原理： PT原理：在受检血浆中加入足量的凝血活酶和钙离子，测定血浆凝固所需的时间，即为血浆凝血酶原时间。本试验是外源性凝血系统常用的筛检试验，此外，常利用本试验对口服抗凝剂治疗进行监控。 TT原理：受检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，测定血浆凝固所需要的时间，即为血浆凝血酶时间，TT主要用于检测血浆纤维蛋白原的减少或抗凝物质的增多。 三 实验试剂和器材：待测血浆、37度水浴箱、硅化试管、秒表、加样枪、氯化钙凝血活酶试剂、凝血酶溶液。,四 实验步骤：PT: 取待测血浆0.1ml，37 孵育3分

13、钟，加入37 预温PT试剂0.2ml,记录凝固时间，即为PT值。 TT：取37 预温待测血浆0.2mL,加入TT试剂0.2ml，记录凝固时间，即为TT值。 注意：TT试剂不需37 预温，15-25 室温直接使用。 五 参考值：PT 10-14秒 TT 10-16秒,六注意事项： 1.采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管。 2血浆分离后应尽快测定。 3血浆预温不宜超过10分钟。 4凝血活酶预温不可超过30分钟。 5待测血浆应使用 0.109mo 1L枸橼酸钠抗凝。 6手工操作时，凝血酶原和凝血酶时间的终点计算以出现混浊的 初期凝固为准。 7. 测定温度3

14、65385，过低或过高温度均使PT、TT延长。,七 临床意义：1.PT延长 ： 见于先天性凝血因子异常，如因子、缺乏症；后天性凝血因子异常，如弥漫性血管内凝血、原发性纤溶、维生素K缺乏症、严重肝病；血循环中有抗凝物质，如口服抗凝剂、肝素和FDP等。 2PT缩短 :见于高凝状态和血栓性疾病、先天性因子增多症、口服避孕药等。 3.TT延长：以DIC时纤维蛋白原消耗为多见，也有部分属于先天性低（无）纤维蛋白原血症、原发性纤溶及肝脏病变。也可见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多。 4.TT缩短：极为罕见，主要见于某些异常蛋白血症或巨球蛋白血症时，此外较多是技术原因，如标本在4度环境中放置过久，组织液混入血

15、浆等。,实验六 尿常规检查,尿液的常规检查包括： 物理学检查：尿量、气味、颜色、透明度 化学检查：蛋白、糖、PH、酮体、尿胆红素、尿胆原、尿亚硝酸盐、尿隐血、白细胞、比密、维生素C 尿沉渣（显微镜）检测：尿液细胞、管型、结晶、上皮等 一般性状检查： 1、尿量： 正常尿量 1000-2000ml/24hr平均1500ml 少尿：2500ml/24hr,2.尿液外观： 正常尿的颜色：多为澄清透明至淡黄色或琥珀色， 颜色常受食物、药物、尿色素（尿胆原、尿胆素、尿卟啉）的影响。 病理性尿液外观 1.血尿：尿中含有一定量红细胞，可呈淡红色云雾状、水洗肉样（量少时）、红色血凝块（量多时）。 2.肉眼血尿：

16、每升尿中含血量超过1ml，即可出现淡红色。 3. 显微镜血尿：尿外观无明显变化，离心沉淀后镜检，平均3RBC/Hp 4.血红蛋白尿 ：可使尿液呈浓茶色、红葡萄酒色或酱油色。隐血试验为阳性（正常尿液试验隐血为阴性） 血红蛋白尿：见于严重的血管内溶血：阵发性血红蛋尿、蚕豆病、血型不合的输血反应。,5.胆红素尿：尿就中含有大量结合胆红素，呈豆油样改变，振荡后出现黄色的泡沫且不易消失。 常见：阻塞性黄胆和肝细胞性黄疸。 6.脓尿和菌尿：新鲜排出的尿液呈白色混浊（脓尿）或云雾状（菌尿）加热加酸不溶解，内含脓细胞、炎性渗出物或细菌。 常见：泌尿道感染：肾盂肾炎、膀胱炎,尿中红细胞,尿中白细胞,脓细胞,7.乳糜尿和脂肪尿： 乳糜尿：乳糜液逆流进尿中所致外观呈不同程度乳白色，当含有 较多血液时呈乳糜血尿。常见：肿瘤、结核、丝虫病及周围淋巴管 梗阻。 脂肪尿：尿中出现脂肪小滴。常见：脂肪