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1、1奥洛他定在健康人体的药动学研究作者：林晓珊，李国成，李萍，温预关【摘要】目的建立快速、灵敏的奥洛他定在人体内血药浓度的测定方法，并研究 10 名健康志愿者单剂量口服 5mg 盐酸奥洛他定片后的药动学特点。方法分别于给药前及口服给药后0.25、0.5、0.75，1、1.5，2、3、4、6、8、10、12、16、24、48h 采集肘静脉血，用高效液相色谱-质谱法测定血浆药物浓度，并采用 DAS 程序计算主要的药动学参数。结果单剂量口服盐酸奥洛他定片 5mg 后，其血药质量浓度时间曲线拟合符合二室模型，主要药动学参数分别为：T1/2(6.552.50)h、Tmax(0.980.32)h、Cmax(
2、53.751976)gL-1 、AUC0-48(159.5460.94)ghL-1、AUC0-(161.7961.19)ghL-1。结论建立的奥洛他定人体内血药浓度测定方法灵敏、可靠、简便;国产盐酸奥洛他定片单剂量给药后在健康人体内耐受良好。【关键词】盐酸奥洛他定片;高效液相色谱-质谱法;阿米替林;药动学Abstract:ObjectiveTodeveloparapidandsensitiveHPLC-MSmethodfortheanalysisofolopatadineinhumanplasma,andstudyonthepharmacokineticscharacteristicsofol
3、opatadinehydrochloridetabletsafterasingleoraldoseof5mginhealthyvolunteers.MethodsAsingleoraldoseof5mgolopatadinehydrochloridetabletswasgivento10healthyvolunteers.Bloodsamplesweretakenbeforedosingandat0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12,16,24,48hafterasingleoralof5mg.AHPLC-MSmethodwasusedtoassaytheco
4、ncentrationofolopatadineinplasma.ThepharmacokineticparameterswereevaluatedwithDASprogram.ResultsTheconcentrationsofolopatadineinplasmawerefittedwithatwo-compartmentmodel.Themainpharmacokineticparametersbyoraladminstrationwereasfollow:T1/2(6.552.50)h，Tmax(0.980.32)h，Cmax(53.7519.76)gL-1，AUC0-48(159.5
5、460.94)ghL-1，AUC0-(161.7161.19)ghL-1.ConclusionTheanalyticalmethodappearedtobeaccurate,sensitiveandconvenient.OlopatadinetabletscanbewelltoleratedinhealthyChinesevolunteersafterasingledose.Keywords:olopatadinehydrochloridetablet;HPLC-MS/MS;amitriptyline;pharmacokinetics盐酸奥洛他定(olopatadinehydrochlorid
6、e)是一种高选择性的外周 H1 受体阻断剂，具有抗组胺和抗变态反应活性，属第二代非镇静性抗组胺药，于 2000年 12 月在日本被批准用于治疗过敏性鼻炎、慢性荨麻疹、湿疹性皮炎、瘙痒、皮肤瘙痒症、寻常性牛皮癣和多形性渗出性红斑。本文参照文献1对北京嘉林2药业股份有限公司研制生产的盐酸奥洛他定片进行人体药动学研究，为临床用药提供依据。1 材料与方法1.1 药品与试剂盐酸奥洛他定片(北京嘉林药业股份有限公司，5mg/片,批号：20080901，失效期 2010 年 8 月);盐酸奥洛他定对照品(北京嘉林药业股份有限公司，批号：080801，质量分数 99.8%);内标物阿米替林对照品(批号：100
7、518-200401，中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯，默克公司);甲酸铵(质谱纯，美国 Sigma 公司);水为重蒸去离子水;甲酸(色谱级，美国迪马公司);醋酸乙酯、二氯甲烷(分析纯，均由广州化学试剂厂提供)。1.2 仪器Agilent1100 高效液相色谱仪系统(G1313A 自动进样器，G1311A 自动调配泵G1316A 可调柱温恒温箱，AgilentLC/MSDTrapXCT 质谱仪，Agilent 色谱化学工作站)，XW-80A 旋涡混合器(原上海医科大学仪器厂)，BP110S 型电子分析天平(瑞士 Sartorius)，MIKR012-24 型高速离心机(美国 Micro1
8、2-24)，111 型真空干燥箱(德国 MMM-Group)。1.3 受试者选择试验前试验方案经医院伦理委员会审批，志愿者本人签署知情同意书后，进行体格检查，胸透、心电图、血压、血尿常规及肝肾功能等各项指标均正常者入选为受试者。受试者 10 人，男女各半，平均年龄为(223)岁，受试者禁食过夜(至少 10h)，于次日早晨 7：30，200mL 温开水送服盐酸奥洛他定片 5mg，给药后2h 内不得饮水，4h 后进食统一低蛋白、低脂肪标准餐，试验期间不做剧烈运动。1.5 血样采集与 ADR 监护10 例受试者均于用药前在前臂静脉安置留置针抽血，用药前采空白血约4mL，再分别于给药后0.25、0.5
9、、0.75，1、1.5，2、3、4、6、8、10、12、16、24、48h 采集肘静脉血 5.0mL，置肝素化的试管中，3000r/min 离心 10min 分离血浆，置-20下冰柜储存备用。整个试验过程均在医师和护士监护下进行，并于给药后不同时间监测受试者的反应，及时处理和记录试验过程中发生的不良反应。试验期间禁用其他药物及含咖啡因类饮料、烟和酒。1.6 样品测定1.6.1 色谱条件色谱柱：AgilentEclipseplusC18(4.6mm150mm，3.5m);3流动相：甲醇-水(含 0.005molL-1 甲酸铵和质量分数 0.1%甲酸)(体积比 955);流速：0.5mLmin-1
10、;柱温：40。质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正离子化，扫描方式为选择性离子监测，奥洛他定 m/z338.3165.2，阿米替林m/z278.191.0，毛细管电压 4000V，喷雾气压力 50Pa，干燥气流速 10Lmin-1，干燥气温度 350，奥洛他定和阿米替林碰撞能量均为 28U，裂解电压均为135V，四级杆捕捉时间均为 0.2s，电子倍增器电压 200V，进样量为 20L。1.6.2 血样的处理取含药血浆 0.5mL 置 2mL 的带塞离心管中，加入200gL-1 的阿米替林甲醇溶液 50L，快速振荡 5s，加乙腈(含质量分数 1%甲酸)0.5mL，密塞，振荡 15s，16000r
11、min-1 离心 5min，吸取上清液转移至10mL 带塞磨口锥形玻璃离心管，加醋酸乙酯-二氯甲烷(体积比 41)混合液3mL，密塞，旋涡振荡 1min，3000rmin-1 离心 5min，吸取有机层置 3mL 的带塞磨口锥形玻璃离心管内，42真空干燥至干。进样前加入流动相混合溶液200L，快速振荡 10s 使残渣溶解，3500rmin-1 离心 5min，吸取上清液20L 进样。1.6.3 标准溶液的配制精确称取盐酸奥洛他定、盐酸阿米替林对照品各若干(分别含奥洛他定、阿米替林各 10mg)，分别置 10mL 容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，即配制成质量浓度为 1gL-1 的贮备液，贮存于
12、4冰箱避光保存备用。试验前按试验所需用流动相稀释成相应浓度的标准工作液。另配制质量浓度为200gL-1 的内标阿米替林甲醇溶液。1.6.4 方法专属性分别取 6 名受试者的空白血浆各 0.5mL，在“1.6.1”色谱条件下测得的 6 种来源空白血浆、含药血浆及受试者给药后血样的 HPLC-MS 色谱图分别见图 1。奥洛他定、阿米替林的出峰时间分别约为 2.99min 和 3.15min。结果表明，空白血浆中内源性物质不干扰奥洛他定及内标阿米替林的测定。1.6.5 标准曲线制备取空白血浆 1mL，分别加入质量浓度为2、5、10、50、100、200、500 和 1000gL-1 的奥洛他定对照品
13、溶液 50L，振荡 5s，使血浆药物质量浓度分别相当于 0.2、0.5、1、5、10、20、50 和100gL-1，然后按“1.6.2”项处理。在“161” 项下色谱条件进行HPLC-MS 分析，以奥洛他定峰面积与内标峰面积之比(y)为纵坐标，以血浆奥洛他定质量浓度(x)为横坐标，权重系数为 1/x2，血浆中奥洛他定质量浓度在0.2100gL-1 范围呈良好的线性关系，典型方程为：y=0.3038x+00032 ，r=0.9956(n=8)。血浆样品奥洛他定定量下限质量浓度为0.2gL-1(S/N10)，平行对质量浓度为 0.2gL-1 的 5 个含药血浆样品处理后进行色谱分析，RSD 为 6
14、.36%。1.6.6 精密度和回收率按“1.6.5”项方法分别配制低(0.5gL-1)、中(20gL-1)和高(50gL-1)质量浓度的奥洛他定血浆溶液各 15 份，分为 3 批，每批 5 份，并于每批的标准曲线同时进行，依“1.6.2”项处理后取 20L 进样，计算质控样品的测得浓度，与配制浓度对照，求得本法的准确度和精密度。同法以空白血浆，除不加标准系列溶液和内标外，按“1.6.5”项方法处理后，再加入相应浓度的奥洛他定和阿米替林，残留物以流动相 200L 溶解，离心后取 20L 进样，以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。结果见表 1。日内精密度测得值/(gL-1)RSD/4
15、1.6.7 稳定性试验按“1.6.5”方法分别配制低(0.5gL-1)、中(20gL-1)、高(50gL-1)的质控血浆样品，每个浓度 18 个样品分析，分成 3 组，分别在 25(0h、24h)、-20冻融(冻融 1 次、3 次)和长期-20冻存(1d、60d)下进行质谱测定，结果 RSD 均在 15%(低质量浓度 RSD 在 20%)内。1.7 质量控制每批样品检测前均先制作随行标准曲线，测定样品时，随行检测低(0.5gL-1)、中(20gL-1)、高(50gL-1)质量浓度的质控样本(制备方法同“16.5”) 。结果随行标准曲线线性良好，低、中、高 3 个浓度质控样品的偏差均在 15%内
16、，符合体内药物分析要求，本试验血浆样品的测定结果准确、可靠。1.8 数据处理绘制受试者口服盐酸奥洛他定片后的血药质量浓度时间曲线。将各受试者给药后各时间点血浆中奥洛他定的浓度数据输入计算机，用上海宏能软件有限公司编写的 DAS 程序对血药质量浓度时间数据进行拟合，求算有关药动学参数。2 结果2.1 平均血药质量浓度时间曲线10 名健康志愿者单剂量口服盐酸奥洛他定片 5mg 后的平均血药质量浓度时间曲线见图 2。2.2 有关药动学参数将血药质量浓度时间数据用 DAS 程序处理，结果表明，10 名健康志愿者的药时曲线符合以权重为 1/C 拟合的静脉给药二室模型。Cmax 和 Tmax 采用实测值，AUC0-24 采用梯形面积法计算，AUC0-=AUC0-24+C24/ke 计算，其主要药动学参数见表 2。2.3 不良反应情况10 名受试者在试验过
