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1、1头顶一棵珠对实验性脑缺血的保护作用【摘要】目的研究头顶一棵珠对脑缺血的保护作用。方法小鼠断头形成急性脑缺血模型观察断头后张口喘气的时间；结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血模型,观察头顶一棵珠对大鼠脑含水量的影响；利用结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血再灌注模型,观察对脑含水量、脑组织 ATP 酶的活性、LPO 含量的影响。结果头顶一棵珠明显延长小鼠断头后张口喘气时间，减少脑含水量，并可有效降低脑毛细血管通透性，明显提高脑组织 ATP 酶活性,减少过氧化脂质 LPO 的生成。结论头顶一棵珠对实验性脑缺血具有明显保护作用。【关键词】头顶一棵珠；小鼠急性脑缺血；脑缺血再灌注损伤头顶一颗珠系百合科延龄草属植物头
2、顶一颗珠 T.tschnoskiiMaxim.的干燥根状茎及根,分布在湖北的神农架、恩施自治州、郧阳，四川中南部、甘肃东南部、云南北部山区1 。其味甘性温,有小毒,有止血、解毒、接骨续筋等功效,主治头痛眩晕、高血压病、神经衰弱、脑震荡后遗症、跌打损伤、疔疮肿毒等2 。中医临床应用较广,且疗效显著。但现代药效学研究报道较少,其对脑血管疾病治疗作用的药理学研究目前鲜见报道。我们通过该药对脑缺血大、小鼠的影响,观察其用于治疗缺血性脑血管疾病的可行性。1 材料与仪器1.1 药品与试剂试药头顶一颗珠根状茎及根由我院中草药标本中心提供;头顶一颗珠根状茎及根醇提液:取头顶一颗珠根状茎及根粗粉,乙醇回流提取
3、3 次,除去乙醇以后制成 1gml-1 的醇提取液,复方丹参注射液（上海第九制药厂,批号 991213）;伊文思蓝系中国医药公司北京采购供应站提供,批号 971123;甲酰胺系上海化学试剂采购供应站经销,批号 941205；ATP 酶活性测定试剂盒(由四川省迈克科技有限责任公司提供,批号:1104091)。1.2 仪器与动物 721 分光光度计系上海第三分析仪器厂产品;另有恒温培养箱、电热烤箱等。Wistar 大鼠、昆明种小鼠均由由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。2 方法与结果2.1 头顶一棵珠对实验性脑缺血大鼠的作用 Wistar 大鼠,雌雄各半,体质量(29348)g,随机分 5
4、组,有假手术组、模型组、头顶一棵珠低剂量（0.5g/kg）组和高剂量（1g/kg）组及复方丹参 10g/kg 组。ig 给药,1 次/d,共给药 7d,其中假手术组和模型组 ig 同体积自来水。末次药后 1h,用乌拉坦 1g/kgip 麻醉,分离出双侧颈总动脉,股静脉注射 5%伊文思蓝 50mg/kg,5min 后结扎模型组和各给药组大鼠的双侧颈总动脉,假手术组大鼠不结扎,3h 后断头取脑称重,浸泡于 5ml 甲酰胺溶液中,45温育 48h,期间定时振摇,然后取上清液,并加入 1.5ml 氯仿溶液,混匀离心,吸取上清液,于 620nm 处比色,根据标准曲线计算出伊文思蓝的含量。脑2组织水含量的
5、测定3参照 Hallenbeck 法,切取大脑前极到视交叉处的脑片,分别称量右脑片,称湿重;105烘干至恒重,即干重,分别计算脑指数(g 脑/100g 体质量)和脑含水量。按下列公式计算脑含水量,脑含水量(%)=脑湿重(g)-脑干重(g)/脑湿重(g)100%。统计分析数据均以表示,采用方差分析和检验(余下相同)。结果见表 1。表 1 头顶一棵珠对实验性脑缺血大鼠的作用（略）表 1 可见,缺血模型组大鼠脑内伊文思蓝含量、脑指数及脑含水量均非常显著地高于假手术组大鼠(P0.01)。头顶一棵珠 1g/kg 则可明显减少脑内伊文思蓝含量、脑指数及脑含水量(P0.05),头顶一棵珠 0.5g/kg 对
6、脑含水量也有明显降低作用，表明该药具有减轻缺血性脑血管通透性增高和脑水肿的作用,从而保护大脑。2.2 头顶一棵珠对实验性脑缺血小鼠存活时间的影响健康小鼠,雌雄各半,体质量（21.41.6）g,随机分 3 组,对照组、头顶一棵珠高剂量（2g/kg）组和低剂量（1g/kg）组。ig 给药,1 次/d,共给 7d,对照组 ig 同体积自来水,末次药后 1.5h,用乌拉坦 1.3g/kgip 麻醉,分离出双侧颈总动脉,结扎并记录呼吸停止时间。结果见表 2。表 2 头顶一棵珠对实验性脑缺血小鼠存活时间的影响（略）表 2 可见,头顶一棵珠 ig2,1g/kg 可非常显著地延长小鼠双侧颈总动脉结扎的存活时间
7、(P0.01)。提示头顶一棵珠可增强大脑缺血性缺氧所形成脑循环障碍的耐受力。2.3 头顶一棵珠对小鼠断头后张口喘气时间的影响健康小鼠,雌雄兼用,体质量（22.51.8）g，随机分 4 组：对照组，头顶一棵珠高（4g/kg） 、中（2g/kg） 、低（1g/kg）剂量组。ig 给药,1 次/d,共给 7d,对照组 ig 同体积自来水,末次药后 1.5h,自小鼠颈部剪断鼠头,记录断头后张口动作的持续时间。结果见表 3。表 3 可见,头顶一棵珠中、高剂量具有显著延长小鼠断头后喘气时间的作用。表 3 头顶一棵珠对小鼠断头后张口喘气时间的影响（略）2.4 对结扎大鼠双侧颈总动脉所致脑缺血再灌注模型的影响
8、4Wistar 大鼠,雌雄各半,体质量（29341）g,随机分为 5 组。采用双侧颈总动脉结扎法造模,25%乌拉坦 5ml/kg 腹腔麻醉,颈部正中切开分离,用小动脉夹夹闭双侧颈总动脉 30min 后,松开双侧小动脉夹,恢复再灌注 60min,制成缺血再灌注模型;假手术组颈部切开分离后不结扎颈总动脉。在缺血后 30min 经舌下静脉注射头顶一棵珠醇提取液;模型组注射等量生理盐水;假手术组不结扎颈总动脉,其它操作同生理盐水组。逐层缝合伤口,术后回笼饲养,各组均腹腔注射给药 5d,末次给药 1h 后断头处死,迅速取脑,以检测脑含水量及脑组织 Ca2+，Na+-K+-ATP 酶活性及过氧化脂质(LP
9、O)含量。脑组织水含量的测定方法同“2.1”项;脑组织 Ca2+，Na+-K+-ATP 酶及过氧化脂质(LPO)含量的测定:断头取脑组织,用冰生理盐水按体积比为 19 比例稀释后在冰水浴下制成 10%的脑匀浆,于 43500r/min 离心 10min,取上清液弃沉淀,置 20冰箱中保存。按试剂盒方法分别测定脑组织中 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP 酶活性。过氧化脂质(LPO)含量测定:取冻存大鼠脑皮质,加生理盐水,用匀浆器研磨成 10%的匀浆液,用硫代巴比妥(TBA)法测定。结果见表 4。表 4 头顶一棵珠对脑缺血再灌注大鼠脑组织含水量、Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP
10、3酶活性和 LPO 含量的影响（略）由表 4 可见,脑缺血模型组与正常对照组比较,脑含水量明显增加。头顶一棵珠 1mg/kg 组及复方丹参组的动物,脑水肿程度较模型组明显降低,缺血再灌注时脑组织 ATP 酶活性下降,头顶一棵珠高、低剂量组能提高脑组织 Na+-K+-ATP 酶活性,差异有显著性。模型组 LPO 含量均显著高于各用药组和假手术组。头顶一棵珠 1,0.5mg/kg 组 LPO 含量明显降低。3 讨论本实验结果表明,头顶一棵珠 ig 给药,可明显降低结扎双侧颈总动脉大鼠脑内伊文思蓝含量、脑指数、脑含水量;显著延长结扎双侧颈总动脉小鼠的存活时间;延长断头小鼠张口动作持续时间。提示,该药
11、可改善脑缺血造成的脑血管通透性增加、脑水肿,并对大脑缺血性缺氧所形成的脑循环障碍,可增强其耐受力,降低脑耗氧量,保护大脑。同时本实验结果也显示:缺血再灌注时脑组织 Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-ATP 酶活性下降与脑组织缺血缺氧引起的能量合成障碍有关。头顶一棵珠高剂量能提高脑组织 Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-ATP 酶活性,从而能减轻细胞内 Ca2+超载,减轻细胞内 Ca2+对细胞膜及线粒体膜的损伤;缺血再灌注时大鼠脑组织中的过氧化脂质LPO 含量显著增加,提示脑缺血再灌注可激活氧自由基生成系统,导致自由基生成过多或清除能力下降,因此测定这些物质的活性或含量变化可作为评价药物
12、抗脑缺血再灌注损伤作用的有效指标。该药还可显著降低缺血再灌注大鼠脑组织中的过氧化脂质 LPO 含量,说明其具有抗氧化,清除自由基作用。综上所述,头顶一棵珠可明显改善脑缺血和缺血再灌注大鼠的脑代谢,具有明显的脑缺血保护作用，本研究为指导今后临床应用提供了理论依据。【参考文献】1中科院植物研究所.中国植物志，第 13 卷M.北京:科学出版社，1978：97.2谢宗万，范崔生，朱兆仪，等.全国中草药汇编,上册，第 2 版M.北京:人民卫生出版社,2000:225.3丁永芳,袁冬萍,方泰惠,等.注射用银杏叶(冻干)对实验性脑缺血的保护作用J.时珍国医国药,2003,14(4)201.4高艳.麦芽醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的防治作用J.咸宁学院学报,2005,19(2)84.
