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1、实验三：血凝和血凝抑制试验 （Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）,动物病原学实验之六,一、实验目的,掌握血凝和血凝抑制试验的原理，以及使用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结果判定方法。,二、实验原理 （一）血凝试验（HA）,有些病毒能够促使某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞发生凝集，这就是红细胞凝集现象，称做血凝试验。 病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为病毒鉴定的一个指标。,HA试验的原理图,病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较密切，不经特殊化学方法处理不能分开。例如流感、腮腺炎、新城疫
2、等病毒，病毒游离下来后，红细胞不能再次被凝集。,病毒凝集红细胞可以分为3种类型,病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开，血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等病毒，它们的凝集现象是可逆的。 象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等，凝集红细胞的条件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择，同时还要掌握反应的pH和温度等。,（二）血凝抑制试验（HI）,当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称做红细胞凝集抑制试验，也叫血凝抑制试验。,HI试验的原理图,三、试验材料,鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤
3、35次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。 0.85%生理盐水。 被检血清，采自被检鸡的血清。,四、操作步骤 （一）血凝试验（HA）,在血凝板第一排的112孔加入50l生理盐水。 在第1孔中加入50l病毒抗原，反复吸取混匀后吸50l到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50l；最后两孔（11、12）为细胞对照。,将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔加入50l。 手工震荡，37静置30min后观察结果。 结果观察（血凝价是1：？）。,1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C,以5
4、0%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为血凝价的终点，即一个血凝单位。,（二）血凝抑制试验（HI）,在血凝板的112孔加入50l生理盐水，最后一孔加100l。 第1孔加入待检血清50l，混匀后吸50l至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃50l。 从111孔，每孔加稀释好的50l 4个血凝单位的病毒悬液。,如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:26,将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔加入50l。 手工震荡，在37静置30min后观察结果。 结果判定（血凝抑制价是1：？，被检血清为阴/阳性）。,五、结果判定,血凝价是1：？； 血凝抑制价是1：？； 被检血清为阴/阳性。,
