蛋白质泛素化修饰的技术路线

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1、,http:/www.abace- TENTS,蛋白质翻译后修饰介绍,蛋白质泛素化修饰,技术路线,总结展望,http:/www.abace- Gene; More proteins.,http:/www.abace- Posttranslational Modification Of Proteins,翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。它通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团,可以改变蛋白质的物理、化学性质,进而影响蛋白质的空间构象和活性状态、亚细胞定位、折叠及其稳定性以及蛋白质-蛋白质相互作用。蛋白质

2、翻译后修饰的丰度变化在生命活动研究中具有重大意义,异常的翻译后修饰会导致多种疾病的发生。,http:/www.abace- Posttranslational Modification Of Proteins,从定义的角度,可以如下理解蛋白质翻译后修饰: 1. 对某氨基酸的修饰包括共价连接简单的官能团(如乙酰基或磷酸基)和引入一些复杂结构,如脂 类和糖类。 2.将已经结束翻译的转录本产物切割成成熟的形式,如信号肽或活性肽的加工等。 3. 氨基酸的交联,如丝氨酸和酪氨酸。 可以说,蛋白质组中任一蛋白质都能在翻译时或翻译后进行修饰,不同类型的修饰都会影响蛋白质的电荷状态、疏水性、构象和(或)稳定性

3、,终影响其功能。 诸多实例表明蛋白质的修饰都采取一种可逆模式“开”或“关” 的状态进行,或者调节蛋白质的功能,或者作为真实的分子开关。 目前已发现300多种不同的翻译后修饰,主要形式包括“磷酸化、 糖基化、乙酰化、泛素化、羧基化、核糖基化以及二硫键的配对“等。,http:/www.abace- Posttranslational Modification Of Proteins,Ubiquitination,http:/www.abace- 人们都忽视了蛋白质水解酶参与的细胞功能的调控。泛素和与其相关的蛋白水解酶的发现, 给整个科学界带来了巨大的影响。,http:/www.abace- fun

4、ction of Ubiquitination,http:/www.abace- 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。,http:/www.abace- ubiquitin: 该方案具有高特异性,但在有些生物样本中面临挑战,如动物组织及临床样本。因为泛素化发生在个体分子中不同位点不同水平上,往往会导致富集出的蛋白在酶解后产生大量非修饰肽段影响结果鉴定。,http:/www.abace- Da在质谱中可以精确检测出,但是还有其他的一些情况也会导致114Da的质量偏移结果干扰鉴定结果。具体状况如下。 天冬酰胺但单同位素残基质量分数为114.043Da; 在蛋白酶解过程中普遍运用碘乙酰胺(IAM)对肽段进行碘乙酰化反应,而此时半胱氨酸及赖氨酸(有时)上会发生碘乙酰化修饰增加57.021Da分子量; 其他氨基酸影响,亮氨酸与异亮氨酸单同位素质量分数为113.084Da以及他们m+1同位素质量分数为114 Da。,改变烷基化试剂或者调整烷基化孵化温度; 设置更高的质量准确度阈值及手动或软件验证的单一同位素质量。,挑战,解决方案,http:/www.abace- 敬请点评、指正!,http:/www.abace-

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