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1、1中药对耐甲氧西林葡萄球菌的体外敏感性研究作者：栾耀芳，吴国英，孔祥山，王军【摘要】目的对多重耐药的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）进行中药体外敏感试验，观察其诸多改变对中药治疗作用的影响，筛选有效中药。方法采用琼脂扩散法，以临床收集的 MRS30 株为实验组，非耐甲氧西林的葡萄球菌 30 株为对照组进行体外敏感性研究，所选中药通过水提、醇提法制备药液，观察各种中药的抑菌环直径。结果所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为：半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白头翁水提液、鱼腥草水提液、白头翁醇提液、射干水提液。实验组与对照组细菌的抑菌效果经统计学分析，P0
2、.05，差异无显著性。结论对 MRS 引起的感染，在抗生素选择压力增大的情况下，中药可以成为治疗的较好选择。【关键词】中药；耐甲氧西林葡萄球菌；体外敏感性耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）通过合成分泌 -*基金项目：山东中医药管理局“十一五”计划项目（编号：2005-218）内酰胺酶及改变膜的渗透性、基因突变等方式，使自己呈现多重耐药性。通常 MRS 不论其体外药敏试验结果如何，所有的青霉素类、头孢菌素类、-内酰胺类/-内酰胺酶抑制剂均无临床疗效，并且绝大多数对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素耐药，临床治疗起来非常困难。那么细菌的诸多改变是否影响中药的治疗作用呢？这一方面未曾见有报道，为此我们选择了具
3、有清热解毒、清热燥湿作用的中药通过水提与醇提的方法制备药液，对 MRS 进行了体外敏感性的对比研究，并对有效中药进行筛选，现报告如下。1 实验材料1.1 中药选择鱼腥草：三白草科植物蕺菜 HorttuyniacordataThunb.的干燥地上部分，切段。射干：鸢尾科植物射干 Belamcandachinensis（L.）DC.的干燥根茎，切片。蒲公英：菊科植物蒲公英 TaraxacummongolicumHand.-Mazz.、碱地蒲公英 T.sinicumKitag.或同属数种植物的干燥全草，切段。半枝莲：唇形科植物半枝莲 ScutellariabarbataD.Don 的干燥全草，切段。
4、白头翁：毛茛科植物白头翁 Pulsatillachinensis（Bge.）Regel 的干燥根，切薄片。以上药物均购自我院中药房。1.2 实验菌株来自本院门诊及病房临床标本中分离的葡萄球菌。选择经鉴定为耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）菌株 30 株为实验组，其中 MRSA8 株，MRCNS22株;非 MRS 菌株 30 株为对照组，其中金黄色葡萄球菌 17 株，其他凝固酶阴性葡萄球菌 13 株。 （仪器：英国先德 SENSITITRE 全自动微生物鉴定仪，鉴定符合率295%以上。MRS 鉴定采用 2004 年 NCCLS 出版的药敏试验指南 M100S14 手册推荐的 30g 头孢西丁纸片法。
5、 ）实验方法2.1 中药制备2.1.1 中药水提液取中药鱼腥草、射干、蒲公英、半枝莲、白头翁各 500g，分别置提取容器中，加水适量，浸泡 20min，继续加水 68 倍（根据药物容积不同，加水量不同） ，加热煎煮提取 2 次（2h,2h） ，过滤去渣，合并 2 次提取液，慢火浓缩至 500ml 左右（1g/ml） ，灌封，备用1 。2.1.2 中药醇提液取中药鱼腥草、射干、半枝莲、白头翁各 500g，分别置提取容器中，加 65%乙醇适量，浸泡 20min，继续加提取溶剂 68 倍量，加热煎煮提取 2 次（2h,2h） ，过滤去渣，合并 2 次滤液，回收乙醇。慢火浓缩至 500ml 左右（1g
6、/ml） ，灌封，备用1 。2.2 菌液制备挑取培养 1824h 的纯菌落，制成 0.5 麦氏单位，浓度相当于（11.5）108CFU/ml 的菌悬液，备用。2.3 操作以无菌棉棒蘸取菌悬液，均匀涂抹于 M-H 琼脂平板，稍倾，在平板上打 56 个直径 6mm 左右的孔，深度约为 45mm，加入浓度为 1g/ml 的中药液60l，置平板于 3537孵箱培养，24h 后量取抑菌环直径，以无菌生长的透明环的直径为最终结果。3 结果经 24h 培养观察，所有中药对实验组及对照组细菌表现出不同的抑制效果，结果见表 1、表 2、表 3，图 1。表不同中药对两组细菌的抑制效果比较表 2 中药的不同提纯方法
7、对实验组细菌抑制效果比较表 3 中药的不同提纯方法对对照组细菌抑制效果比较从表中可以看出，所试中药对实验组及对照组细菌在抑菌效果上经统计学分析，均 P0.05，差异无显著性，因此，无论是显示多重耐药的葡萄球菌还是普通的葡萄球菌，中药的抑菌效果是基本相同的，说明这些多重耐药的特殊菌的诸多改变尚未影响中药的治疗作用，这样在用药环境上比较西药显示出了很大的优势，无需实验室进一步分类即可用药，可做到及时、高效。另外，根据抑菌环直径大小，所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为：半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白头翁水提液、鱼腥草水提液、白头翁醇提液、射干水提
8、液。从表、表中可以看出，鱼腥草醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液抑菌效果均明显优于相应的水提液，经统计学分析，P0.01，两者对比差异有非常显著性。对照组半枝莲水提液效果优于醇提液，经统计学分析，P0.05，两者对比差异无显著性。34 讨论MRSA 自 1961 年被发现后，到 20 世纪 80 年代后期就已成为全球发生率最高的医院内感染病原菌之一。全世界范围内，目前能够被证实对 MRSA 有效的只有万古霉素。因此，MRSA 被列为世界三大最难解决感染性疾患的第一位，甚至有专家将之称为“超级病菌” 。2007 年 10 月 17 日美国弗吉尼亚贝德福德一名 17岁高中生就因感染 MRSA 而死亡
9、。我国 20 世纪 70 年代上海报道 MRSA 约占金黄色葡萄球菌的 5%，19851988 年上海及北京等地区为 10%24%，19941996 年上升到 50%77.9%2 ，2001 年我国的全国调查报道波动在 40%90%3 ，比利时报道波动在 1.6%62.4%，表明世界各地都有不同程度的增长，甚至各医院病房之间亦可有明显差异4 。30%60%MRSA 定植的病人以后会并发感染，一旦某部门发生 MRSA 流行，则院内 MRSA 感染发生率增加，病死率高，会给患者造成极大痛苦。但抗生素的开发明显滞后，并且始终围绕高效、广谱，其用于临床的后果自然是细菌的耐药性越来越强，在这一方面无疑中药具有很大优势，我们国家是中药生产大国，药源广泛，价格低廉，如果能够及早得到开发利用，必将惠及全社会。【参考文献】1 谢秀琼.现代中药制剂新技术，北京：化学工业出版社，2004，4.2 韦莉萍，靳士英，李春梅，等.金黄色葡萄球菌医院感染危险因素的调查.中国抗感染化疗杂志，2001，1（2）：91-93.3 马越，金少鸿.我国细菌耐药性监测研究的新特点.中华检验医学杂志，2005，28（4）：344-348.4HerwaldtLA.ControlofMRSAinthehospitalsetting.AmJMed,1999,106（5A）:11-18.
