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1、1不同来源北五味子的质量研究作者：可成友高珍左甜甜杨玉超马春雁吴晓芳【摘要】目的研究不同来源的北五味子的质量状况，为五味子大面积种植和快速繁殖提供基础。方法以北五味子中的五味子醇甲总量为评价指标，以高效液相测定法为测定手段，对不同来源的北五味子进行检测。结果自选品系的北五味子中的五味子醇甲含量高于其他来源的五味子醇甲的含量，并且不同来源的五味子醇甲含量不同。结论该法准确可靠，为更好地研究五味子的质量状况提供了科学依据。【关键词】目的研究不同来源的北五味子的质量状况，为五味子大面积种植和快速繁殖提供基础。方法以北五味子中的五味子醇甲总量为评价指标，以高效液相测定法为测定手段，对不同来源的北五味子
2、进行检测。结果自选品系的北五味子中的五味子醇甲含量高于其他来源的五味子醇甲的含量，并且不同来源的五味子醇甲含量不同。结论该法准确可靠，为更好地研究五味子的质量状况提供了科学依据。Abstract：ObjectiveTostudythequalityofSchisandrachinensisTurcz.Baillfromdifferentsources.MethodsWiththecontentofSchizandrolAasindex,HPLCwasusedtodetectSchisandrachinensisTurcz.Bail.fromdifferentresources.ResultsT
3、hequalityofSchisandrachinensisTurcz.Baillfromself-selectingstrainwasbetterthananyothers,andtheyhaddifferentcontentsindifferentSchisandrachinensisTurcz.Baill.ConclusionThemethodisfeasible,anditcanbeusedforthequalitycontroloftheSchisandrachinensisTurcz.Baill.Keywords：SchisandrachinensisTurcz.Baill;Hig
4、hPressureLiquidChromatography;SchizandrolA北五味子 SchisandrachinensisTurcz.Baill.是著名的滋补性中药，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子1，2 。因主产于我国东北各地，又称辽五味子1，3 。它具有敛肺滋肾、生津敛汗、涩精止泻、宁心安神的功效，其药用历史悠久，我国最早的本草丛书神农本草经对其就有记载，是中医常用的药材4 。临床已证明五味子对病毒性肝炎或化学中毒性肝损伤有降低转氨酶和改善症状的作用，对中枢神经系统有兴奋作用，能改善条件反射的形成，提高大脑皮层细胞的机能5，6 。但是由于不同来源的北五味子有效成分含
5、量不同，到现在为止关于辽宁省地产北五味子质量状况的研究尚未见报道，并且对于五味子的果肉与果核中的五味子醇甲的含量范围也未见文献报道。因此本文针对五味子木脂素的脂溶性，采用索氏回流的方法进行提取，以五味子醇甲提取量作为工艺考核指标，对其展开以下研究。21 仪器与材料1.1 材料来源自选品系五味子 0011，沈阳某药材种植场人工栽培 0012，市场售不同来源的北五味子 0013，0014，0015，0016。1.2 仪器AgilentTechnologies 由安捷伦液相色谱系统化学工作站提供；UV-2550 紫外分光光度计由日本岛津提供。1.3 试剂五味子醇甲标准品由中国药品生物制品检定所提供，
6、并且在实验过程中全部用色谱甲醇。2 方法与结果7，82.1 色谱条件色谱柱为 C18（4.6mm250mm，5m） ；流动相为甲醇-水（6535） ；检测波长 250nm；流速 1mlmim-1；柱温 30；进样量 20l。2.2 五味子醇甲标准液的配制精密称取五味子标准品粉末 5.000mg，用甲醇定容到 5ml 的小容量瓶中，配制成浓度为 1mg/ml 的标准品溶液。2.3 样品供试液的配制用托盘天平粗称 3g 北五味子，放入电热恒温干燥箱中，温度调节到 120烘干 1h 左右拿出。用瓷乳钵将北五味子研成粉末后，用电子天平精确称取 2.000g 粉末，并将其放入索氏提取器中，加入 4 倍量
7、 85%乙醇提取两次，3h/次，温度控制在 8090之间，过滤，滤液适当浓缩用甲醇定容于 25ml 容量瓶中，用微量移液器取供试品溶液 300l，将其移入 5ml 容量瓶中，用色谱甲醇精确定容，即得供试品溶液。2.4 系统适应性实验精密吸取五味子醇甲标准品溶液、0011 供试品溶液各20l，按上述色谱条件测定（结果见图 1） ，表明五味子醇甲的保留时间为5.4min 左右，理论塔板数不低于 5000，五味子醇甲峰与相邻未知色谱峰的分离度大于 2。2.5 线性关系的考察分别精密量取五味子醇甲对照品液50，100，150，200，250l，用色谱甲醇定容到 5ml 的容量瓶中，再取 20l依次注人
8、液相色谱器仪中，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积（见表 1） ，以进样浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明五味子醇甲回归方程为：Y=38293X-29.27，r=0.9999，呈良好的线性关系。表 1 标准曲线浓度与峰面积（略）32.6 精密度实验精密吸取五味子醇甲对照品溶液 20l，连续进样 5 次，按上述色谱条件进样分析，得其色谱图，可以得知每次进样的峰面积，计算可以得到 RSD=1.32%（见表 2） ，说明该方法的精密性良好。表 2 精密度实验中色谱图数据（略）2.7 重复性实验取同一批样品（0011）5 份，分别制成供试品溶液，按样品测定方法测定，结果表明 R
9、SD=2.68%（见表 3） ，说明该方法的重复性良好。表 3重复性实验中色谱图数据（略）2.8 稳定性实验精密吸取五味子醇甲标准品溶液和样品（0011）配制的供试品溶液，室温放置，分别于 0，2，4，6，8，12，24h 进样测定，测得标准品溶液的平均峰面积为 39140.36，RSD 为 1.98%（见表 4） ，样品溶液的平均峰面积为1111.914，RSD 为 2.82%（见表 5） 。结果表明，对照品溶液和供试品溶液在 24h内稳定。表 4 稳定性实验中五味子醇甲标准品的色谱图数据序号五味子醇甲峰面积 RS（略）表 5 稳定性实验中供试品溶液的色谱图数据（略）2.9 不同来源的样品含
10、量测定精密称取不同来源的北五味子制备供试品溶液，按上述色谱条件，每次进样 20l，每个样平行作 3 次，测定，按外标法计算样品中五味子醇甲含量。结果见表 6。表 6 不同来源的北五味子中所含五味子醇甲的计算结果（略）2.10 同一来源样品的果肉与果核中的含量测定将 0011 样品的果肉与果核充分分离，按照供试品溶液制备的方法制备溶液，按上述色谱条件，每次进样20l，每个样平行作 3 次，测定，按外标法计算样品中五味子醇甲含量。结果见表 7。表 7 同一来源的北五味子中果肉与果核所含五味子醇甲的计算结果（略）3 讨论在中国药典中，五味子是以其所含的五味子醇甲作为药材的质量控制指标，因此选用五味子
11、醇甲为测定指标。由于北五味子的成分比较复杂，含有种类较多，因此容易产生干扰，所以本实验用选择性很高的高效液相色谱法来测定其含量。由于地区、环境及采收季节的不同，都会影响五味子醇甲的含量，现在采用的材料都是在同一时间采收的不同地区的五味子，这就为以后研究五味子水质、土壤等环境监测提供了依据。规定生药的总灰分限度，对于保证生药的品质和纯净程度，有一定意义。中国药典规定了中药总灰分的最高限量为 5。在本实验开始时，利用中国药典规定的方法研究了各样品的总灰分含量，都小于 5，从而说明材料都符合要求。4对于提取条件的确定，采用正交实验设计的方法，发现运用 4 倍量 85%乙醇提取 2 次，3h/次，温度
12、控制在 8090之间时的提取效果最好。用紫外检测器扫描一定浓度的五味子醇甲对照品溶液的吸收光谱，发现五味子醇甲在 250nm 处有最大吸收峰，因此采用的波长为 250nm，这与文献9，10结果一致。本实验分别选择了不同流动相比例的甲醇-水进行实验，当甲醇比例较低时，色谱峰变宽，当甲醇比例较高时，分离度较低。实验结果证明，流动相选择甲醇-水（6535）时，五味子醇甲与其它物质分离效果较好，这与中国药典中规定的流动相一致。辽宁地区不同产地的北五味子的质量状况有明显的差异，其中以所采用的自选品系的北五味子质量最佳，这就为以后进行五味子大面积种植的快速繁殖研究提供基础。实验结果还表明，五味子木脂素主要
13、存在于五味子果核中，而果肉中仅含有微量的五味子木脂素。【参考文献】1应国清，俞志明，单剑峰，等北五味子有效成分的研究进展J.河南中医，2005，25(6)：84.2王明中，唐桂荣五味子的采集与加工J.中国林副特产，1994，1(4)：30.3李晓宁，崔卉，宋又群，等辽五味子果实挥发油成分的鉴定J.药学学报，2001，36(3)：215.4张林疆，刘唯芬，毕开顺.五味子质量标准的研究J.辽宁中医学院学报，2006，6(3)：219.5张兰杰，张维华，赵珊红北五味子果实中多糖的提取与纯化研究J.鞍山师范学院学报，2002，4(1)：58.6张怡北五味子的超临界 CO2 萃取研究J.中成药，2005，27(8)：880.7郝书文，宋桂娥北五味子果梗的药用研究J.山东医药工业，2003，22(2)：8.8仇焕敏，冼健民，胡美山.HPLC 法测定复方五味子糖浆中五味子醇甲的含量J.国际医药卫生导报，2006，12(18)：68.9欧金梅，罗捷华HPLC 法测定生脉饮中五味子醇甲含量J.安徽中5医学院学报，2006，25（1）：33.10赵荣淑，任洁，唐淑含，等HPLC 法测定龙苓春合剂中五味子醇甲的含量J.中医药学刊，2006，24（6）：1134.
