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1、1不同时期大蒜中多糖组分 C 的含量测定作者：余薇王秀红陈凤吴基良闵清【摘要】目的对不同时期的大蒜多糖组分 C 进行提取纯化并测定其含量。方法用无水丙酮提取的方法分离纯化大蒜多糖组分 C，以苯酚-硫酸显色后用紫外分光光度计测定吸光度，测定波长 486nm。结果在 4.010.0g/ml 范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系，回归方程 A=0.0694C-0.0049(R=0.9996，n7)。不同时期的大蒜中多糖组分 C 的含量：2 月份的含量 87.82%，4 月份的含量88.52%，6 月份的含量 93.61%，7 月份的含量 94.28%，11 月份的含量 85.17%。结论 67 月份大
2、蒜多糖组分 C 的糖含量最高。【关键词】大蒜多糖组分 C 苯酚-硫酸法大蒜为百合科葱属植物生蒜 AlliumsativumL的鳞茎，其性味生辛热、熟辛温，具有温中消食、化肉消谷、解毒除邪、攻冷积和杀虫的功效，作为中药使用已有几千年的历史。我国是世界上最大的大蒜生产国。目前，从天然产物中寻找新的药效成分已成为国际上研究的新动向，多糖的研究颇受关注。多糖是由十个以上单糖通过苷键连接而成的聚糖。它在自然界分布极广，在高等植物、藻类、菌类及动物体内均有存在，是自然界含量最丰富的生物聚合物。大蒜多糖是从大蒜球根中提取的活性成分，本科室通过大量的实验研究发现大蒜多糖具有保肝护肝作用1，2 、抗病毒3，4
3、、保护心肌5等作用。大蒜采收期为每年的67 月份，为了更合理地开发利用，我们对不同时期大蒜中的多糖组分 C 进行糖含量比较分析，旨在为大蒜多糖 C 的药效学研究提供基础资料。1 器材1.1 药材市售山东产大蒜。1.2 试剂葡萄糖标准品，上海化学试剂公司；苯酚，上海化学试剂公司；硫酸(分析纯)，上海化学试剂有限公司；95乙醇；蒸馏水。1.3 仪器 UV-754 型紫外可见分光光度计(澳大利亚 VARIAN 公司)；TDII 台式低速自动平衡离心机(湖南星科科学仪器有限公司)；FA1104 电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。2 方法与结果2.1 大蒜多糖组分 C 的分离纯化新鲜大蒜去皮碾成
4、蒜泥无水乙醇浸泡过夜尼龙布过滤沉淀用无水乙醇浸泡 1h尼龙布过滤沉淀用无水乙醇浸泡24h尼龙布过滤沉淀（即脱脂蒜泥）用双蒸水溶解沸水浴 8h冷却尼龙布过滤滤液中滴加 45 倍无水乙醇静置 72h抽滤滤液 68水浴约 8h 蒸出乙醇滤液中滴加 34 倍丙酮静置 6h抽滤得大蒜多糖组分 C 粗品。粗2品 Sevage 法去蛋白后在 55下干燥至恒重得大蒜多糖组分 C 精制品。纯化后得大蒜多糖组分 C 在紫外可见光谱段进行扫描，结果显示在 190nm 处有多糖的特征吸收峰，而在 260nm 和 280nm 处无吸收，表明大蒜多糖组分 C 中无蛋白质成分。见图 1。2.2 溶液的配制2.2.15%苯酚
5、溶液的配制取苯酚 100g，加铝片 0.2g 和 NaHCO30.1g，蒸馏。收集 180182馏分，精密称取精制苯酚 5.0g 溶解后转至 100ml 容量瓶中定容，摇匀，得 5%苯酚试剂。2.2.2 标准品溶液的制备精密称取 105干燥至恒重的葡萄糖 10.0mg 置100ml 容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为 100g/ml 的标准品溶液。2.2.3 供试品溶液的制备精密称取 55下干燥至恒重的大蒜多糖组分C5.0mg，置 100ml 容量瓶中，加双蒸水溶解，稀释至刻度，摇匀即得多糖供试品溶液 50g/ml。2.3 检测波长的选择精确量取的葡萄糖溶液、样品溶液 1.0ml
6、分置于两支干燥试管中，分别加入 5%苯酚溶液 1.0ml 摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml 摇匀，另以 1.0ml 水同上操作，作为空白液，于室温中放置 5min，沸水浴中恒温 15min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长 400800nm 之间扫描。结果供试品与标准品溶液在 486nm 波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长无干扰，故选用 486nm 为检测波长。见图 23。2.4 标准曲线的测定精密量取标准品溶液0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0ml，分别置 7 只试管中，各加蒸馏水至1.0ml，再加 5苯酚溶液 1.0ml，摇匀后再加入浓 H2SO45.0ml，摇匀
7、，室温下放置 5min，沸水浴中恒温 15min，取出，冰水浴冷却至室温，在 486nm 处，以蒸馏水管作为空白对照，测定各浓度标准液的吸光度，以糖浓度 C 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标绘制标准曲线，计算得回归方程 A=0.0694C-0.0049(r=0.9996，n=7） ，在 4.010.0g/ml 范围内，浓度与吸光度呈良好线形关系。2.5 换算因子 f 的测定精密称取 55下干燥至恒重的不同时期提取的大蒜多糖组分 C10.0mg，置 100ml 量瓶中，加适量双蒸水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为多糖储备液(100g/ml)。精密吸取多糖储备液 2.0ml,按绘制标准曲线的方法测定吸光
8、度，由回归方程计算出多糖液中葡萄糖的质量浓度(C),按下式计算其换算因数：f=WCDW 为多糖质量(mg)；C 为多糖溶液中葡萄糖的浓度(g/ml)；D 为多糖的稀释因素。见表 1。表 1 不同时期大蒜多糖组分 C 的换算因子32.6 精密度实验随机取标准曲线绘制中其中一支葡萄糖试管液，反复测量该标准液的吸光度 5 次，结果 RSD=0.18。见表 2。表 2 精密度实验2.7 重复性实验精密称取同一批次供试品大蒜多糖组分 C 共 5 份各约5.0mg，分别置于 5 个 100ml 容量瓶中用双蒸水溶解定容，精密量取 50g/ml各 1.0ml 于 5 支干燥具塞试管中，按测定标准曲线同样的方
9、法操作，在 486.0nm处分别测定其吸光度，计算得不同时期大蒜多糖组分 C 的 RSD。见表 3。表 3 重复性实验2.8 稳定性实验随机抽取重复性实验的一支试管，按测定标准曲线同样的方法测每隔 20min 的吸光度，根据测定的样品溶液在 100min 内其吸光度的变化情况，算得吸光度的 RSD，结果表明样品溶液在 100min 内显色稳定。见表 4。表 4稳定性实验2.9 样品测定精密称取同一批次供试品大蒜多糖组分 C 共 5 份各约 5.0mg，分别置于 5 个 100ml 容量瓶中用双蒸水溶解定容，精密吸取 50g/ml 多糖样品溶液 1.0ml 于 10ml 具塞试管中，按标准曲线的
10、绘制项下的方法操作，测定供试品溶液中葡萄糖的质量浓度，按下式计算样品中的多糖。多糖含量(%)=(CDf)/W100C 为测得供试液中葡萄糖的浓度(g/ml)；D 为供试品溶液的稀释倍数；f为换算因素；W 为大蒜多糖质量(g)。见表 5。表 5 不同时期大蒜多糖组分 C 糖含量2.10 回收率实验精密吸取已知含量的供试品溶液 5 份，各 1.0ml，分别置10ml 具塞试管中，另配制与供试品溶液浓度相近的葡萄糖对照品溶液，精密移取 1.0ml 至上述具塞试管中。按测定标准曲线同样的方法操作，算得样品的平均加样回收率。见表 6。表 6 不同时期大蒜多糖组分 C 回收率3 讨论结果显示，大蒜的采收期
11、为每年的 67 月份，而 67 月份的大蒜中大蒜多糖 C 的糖含量最高；故大蒜多糖组分 C 药效学实验时宜选用 67 月的大蒜作为研究对象，有事半功倍之效。不同时期大蒜多糖组分 C 回收率均在 95%105%之间，重复性在各月份均良好，表明苯酚-硫酸法在大蒜多糖 C 含量测定中显色稳定，灵敏度高，适合于大蒜多糖组分 C 在大蒜中的含量测定。【参考文献】1郑敏，卢葵花，吴基良，等大蒜多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究4J 中药药理与临床，2005，21(3)29.2郑敏，潘世斌，姜友定，等大蒜多糖对肝损伤小鼠血清和肝组织ALT、AST 的影响及其急性毒性实验J 咸宁学院学报，2003，17(2)：85.3郑敏，梅贤臣，鲍翠玉，等大蒜多糖体外抗柯萨奇病毒 B3 作用J 中国现代应用药学杂志，2005，22(1)4.4蔡飞，陈金和，吴基良大蒜多糖对小鼠病毒性心肌炎的治疗作用J 武汉大学学报(医学版)，2003，24(2)109.5余薇，吴基良，汪晖大蒜多糖对阿霉素所致小鼠心脏毒性的拮抗作用J 中国药理学通报，2005，21(1)96.
