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1、1不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定作者：张洪娟，张妍妍隋军，徐鹏【摘要】目的建立独角莲中肉桂酸的高效液相含量测定方法；比较不同产地独角莲中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马-DiamonsilC18（250mm4.6mm，5m） ；以甲醇0.1%磷酸=4951 为流动相；流速为 1ml/min；检测波长为 280nm。结果肉桂酸在 0.21g 范围内线性关系良好，r=0.9995，平均回收率为 99.58%，RSD 为 0.95%。结论不同产地独角莲肉桂酸的含量范围为 5.247043.6776g/g，差异较大。该方法测定准确，重复性好，可作为独角莲药材的质量控制方法。【关
2、键词】独角莲肉桂酸高效液相色谱法独角莲为天南星科梨头尖属植物独角莲 TyphoniumgiganteumEngl.的块茎，具有祛风痰、定惊搐、解毒散结止痛的功能。临床应用于治疗脑血管病、面神经麻木、颈淋巴结核、慢性支气管炎等1 ，此外还用于美容祛斑方面。近年来有报道独角莲对瘤细胞具有细胞毒作用。本文以肉桂酸为考察指标，采用高效液相色谱法测定独角莲中肉桂酸含量，可有效控制独角莲药材质量。1 仪器和试药1.1 仪器岛津 LC-10AS 泵，岛津 SPD-10A 检测器，岛津 UV-160A 紫外分光光度仪，昆山 KQ-250B 型超声仪，SartoriusBP211D 型电子天平。1.2 药品肉桂
3、酸对照品，购于中国药品生物制品检定所；独角莲药材（均为鲜品，切片后自然干燥至水分符合规定） ，购于各产区，经黑龙江省药品检验所初东君主任药师鉴定符合中国药典2005 版规定标准2 。1.3 试剂甲醇为色谱纯（迪马公司） ；磷酸为色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心；水为超纯水，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件3色谱柱为迪马-DiamonsilC18（250mm4.6mm，5m） ；流动相为甲醇0.1%磷酸=4951；流速 1ml/min；检测波长 280nm；柱温为室温。按上述色谱条件，理论塔板数按肉桂酸峰计算应不低于 2500。2.2 对照品溶液的配制精密称取肉桂酸对照品适
4、量，加甲醇溶解并稀释制成浓度为 0.03mg/ml 的肉桂酸对照品溶液。2.3 供试品溶液的配制与测定取独角莲药材粉末（过 3 号筛）2g，精密称定，加 5%盐酸溶液 1ml 搅拌均匀，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇2（21）溶液 20ml，室温下浸泡 30min，滤过，精密吸取续滤液 10ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至 5ml，即得供试品溶液。2.4 检测波长的测定取肉桂酸对照品溶液，在 200400nm 波长进行光谱扫描，结果表明，肉桂酸在 280nm 处有最大吸收。确立肉桂酸检测波长为 280nm。2.5 供试品提取条件的确定2.5.1 溶剂的选择根据肉桂酸溶解度拟选择甲醇、
5、50%甲醇、三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙醚以及三氯甲烷-甲醇不同比例混合溶剂为提取溶剂。实验方法：取独角莲药材粉末（过 3 号筛）2g，9 份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加 5%盐酸溶液 1ml，搅拌均匀。分别加入不同溶剂 20ml，于室温下浸泡 30min，滤过，精密吸取续滤液 10ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至 5ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积，计算含量（见表 1） 。结果显示，以三氯甲烷-甲醇（21）为提取溶剂时，提取率最高，且无杂质干扰，故选择氯仿-甲醇（21）作为提取溶剂。图 1 肉桂酸对照品 HPLC 图（略）图 2 独角莲药材 HPLC 图（略）2.5.2 提
6、取方法筛选取独角莲药材粉末（过 3 号筛）2g，3 份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加 5%盐酸溶液 1ml，搅拌均匀，加入氯仿-甲醇（21）20ml。分别采取超声处理 30min、室温浸泡 30min 和加热回流 30min3 种方法，滤过，精密吸取续滤液 10ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至 5ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积（见表 2） 。结果显示，室温浸泡 30min，得肉桂酸含量最高，重复性较好，且方法简单易操作。表 1 溶剂的选择结果（略）表 2 提取方法筛选结果（略）2.5.3 提取时间的考察取独角莲药材粉末（过 3 号筛）2g，5 份，精密称定，置于具塞锥形瓶
7、中，加 5%盐酸溶液 1ml，搅拌均匀，精密加入三氯甲烷-甲醇（21）溶剂 20ml，室温下分别浸泡 10，20，30，45，60min，滤过，精密吸取续滤液 10ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至 5ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积，计算含量（见表 3） 。结果显示，提取时间为30，45，60min 时，肉桂酸含量最高，且无明显差异，故选择提取时间为 30min最佳。表 3 提取时间的考察结果（略）2.6 线性关系考察精密量取肉桂酸对照品适量，加甲醇制成浓度为 1mg/ml的对照品溶液，摇匀，再精密吸取 1ml 置于 50ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取
8、1，2，3，4，5ml，加甲醇稀释至 10ml，再分别注入高效液相色谱仪各 10l，按上述色谱条件测定其峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，3进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=4860.9X+31936，r=0.9995，线性范围 0.21g，峰面积 RSD=1.20。2.7 精密度实验精密吸取同一份供试品溶液 10l，重复进样 6 次，测定供试品中肉桂酸峰面积积分值。结果见表 4。表 4 精密度实验结果（略）2.8 重复性实验精密称取同一批独角莲药材粉末（过 3 号筛）2g，6 份,分别制备供试品溶液。测定肉桂酸含量，结果见表 5。表 5 重复性实验结果（略）2.9 回收率实验取已知肉
9、桂酸含量的独角莲药材粉末（过 3 号筛）1g，6 份，精密称定，分别加入 6g/ml 肉桂酸对照品 1ml，按照“2.3”项供试品溶液的制备方法操作。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10l 注入色谱仪。测得其峰面积，并计算回收率（见表 6） 。结果表明，平均回收率为 99.58%，RSD为 0.95%。表 6 回收率实验结果（略）2.10 样品的含量测定（7 个不同产地）取各产地独角莲药材粉末（过 3 号筛）2g，精密称定，置于具塞瓶中，加 5%盐酸溶液 1ml 搅拌均匀，加三氯甲烷-甲醇（21）溶剂 20ml，室温下浸泡 30min，滤过，精密吸取续滤液 10ml，挥干，残渣用甲醇溶解
10、并定容至 5ml，作为供试品溶液。测定，计算肉桂酸含量。结果见表 7。表 7 样品含量测定结果（略）“-”：未检出3 讨论在选用三氯甲烷-甲醇（21）为提取溶剂时，未经过酸化处理时，峰面积较小。经过酸化处理后，提取液直接进样，虽然峰面积增大，但峰形呈“馒头峰”，保留时间提前，且有杂质峰。而以甲醇为提取溶剂时，虽然峰面积相对较小，但峰形较好，分离度高，且杂质峰少。所以在选择方法时，考虑应先酸化处理药粉，用三氯甲烷-甲醇（21）溶剂提取，将提取液挥干，用甲醇溶解后进行测定。根据肉桂酸受热时脱羧分解的性质，研究中考察了浸泡、超声、加热回流 3种处理方法。结果显示，浸泡处理得到的供试品溶液中肉桂酸含量
11、较高，经过如此处理发现，不仅提取率提高，而且分离度很好，杂质峰较少。实验中选择全国具有地域代表性的 7 个产地独角莲药材，测得肉桂酸的含量范围在 5.247043.6776g/g 之间。由此可知，肉桂酸在不同产地独角莲中含4量差异极大，甚至个别产地药材中未检出，可能由于地域、采收季节、种植、加工过程等原因，导致了肉桂酸含量差异。本实验通过对独角莲中肉桂酸含量测定方法的研究，建立了测定准确、重复性好的方法。本法可作为独角莲及其制剂质量评价和质量控制方法。【参考文献】1孙淑芬,曾艳,赵维诚.独角莲抑制恶性肿瘤的实验研究J.中医研究,1998,11(6):8.2国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：70.3陈雪松，陈迪华，斯建勇.中药白附子的化学成分研究J.中草药，2000,31(7):495.
