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1、第十五章,甾体激素类药物的分析,基本要求,结构与性质,鉴 别 试 验,杂 质 检 查,含 量 测 定,练习与思考,概 述,基 本 要 求,1掌握甾体类药物的结构特点与分析方 法之间的关系。2掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3掌握甾体类药物的含量测定原理与方法。4熟悉甾体类药物杂质检查的方法。,回顾,激素（hormone）是生物体内特殊的腺体或组织产生的，直接分泌到体液中，通过体液运送到特定的部位，从而引起特殊激动作用的一群微量的有机化合物。,回顾,外分泌腺和内分泌腺的区别,无排泄管。其分泌物直接进入细胞周围的血管和淋巴，由血液和淋巴输送到各组织或器官中。,有排泄管。其分泌物通过腺导管输送到相应
2、的组织或器官发挥其调节作用。,回顾,动物激素,植物激素,脊椎动物激素,无脊椎动物激素,氨基酸衍生物激素,肽和蛋白质激素,类固醇激素,脂肪酸衍生物激素,甲壳类激素,昆虫激素,回顾,（一）氨基酸衍生物激素,甲状腺素,肾上腺素,5-羟色胺,（二）肽和蛋白质激素,这类激素包括由垂体（腺垂体、神经垂体），下丘脑、胰腺、甲状腺、甲状旁腺、胃肠和胸腺等分泌的激素。,回顾,回顾,（三）脂肪酸衍生物激素 前列腺素(prostaglandin,PG）,前列腺烷酸,前列腺烷酸,基本结构：环戊烷骈多氢菲,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,概
3、述,类固醇激素,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,肾上腺皮质激素,氢化可的松,肾上腺皮质激素,醋酸地塞米松,肾上腺皮质激素,曲安息龙,肾上腺皮质激素,地塞米松磷酸钠,雄性激素,甲睾酮,雄性激素,丙酸睾酮,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,孕激素,黄体酮,孕激素,醋酸甲地孕酮,雌性激素,炔雌醇,雌性激素,雌二醇,炔诺酮,此外,炔诺孕酮,一、结构与性质,1. 肾上腺皮质激素,2. 雄性激素及蛋白同化激素,3. 孕激素,4. 雌性激素,二、鉴别试验,（一）与强酸的呈色反应,甾体激素类药物,呈色,H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl,（母核）,与硫酸显色反
4、应,显 色 荧光 加水稀释,泼尼松龙 深红 絮状灰,泼尼松 橙 黄蓝绿,炔雌醚 橙红 黄绿 红色,炔雌醇 橙红 黄绿 絮状玫红,醋酸可的松 黄或微 褪色并澄 带橙 清,(二) 官能团的反应,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐OH,1、C17 醇酮基,还原性,呈色反应,此外还有裴林试液、多伦试液,甾酮类激素药物,呈色,羰基试剂,2.C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛,3.甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁 氰化纳,其他甾体,淡橙色不显色,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,4.有机
5、卤素,茜素氟蓝 硝酸亚铈,硝酸硝酸银,AgCl,呈色,雌激素类药物,红色偶 氮染料,重氮苯磺酸,5. 酚羟基,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,6. 乙炔基的沉淀反应,(三)制备衍生物测定m.p.,1. 缩氨基脲的生成,m.p.约180（分解）,2. 酯的水解,m.p.为150 156,-3-酮、苯环、其他共轭结构,（四）UV法,1. 结构依据,240nm左右,280nm左右,2. 示例,曲安西龙,丙酸倍氯米松,溶剂,甲醇,乙醇,20g/ml,浓度,20g/ml,结果判断,在238nm处有最大吸收,在239nm处有最大吸收，A为 0.570.60，在239nm与263nm 处的吸收度比值为2
6、.252.45,结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基,炔雌醇,（五）IR法,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羟基,醇羟基,1615cm-1,苯环的骨架振动,黄体酮,结构特征：-3-酮、C17-酮基,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,双键,（六）TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,（七） HPLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软
7、膏）,方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,三、 特殊杂质检查,（一）其他甾体的检查,检查意义：其他甾体与甾体激素药物结 构相似，也有一定的药理作 用而又互不相同.,检查方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）,（1）TLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色,例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1） 60g/ml 层析：供试液 点样、展开、斑点检出。 对照液判断：
8、供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜 色与对照液的主斑点比较，不得更深。,（2）HPLC法（主成分自身对照法）,判定方法： 规定杂质峰数目规定杂质峰面积,硒的检查,（二）,来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,有毒,方法,药物,氧瓶燃烧,二氨基萘比色法测定,（三）有机溶剂残留量的检查,（灵敏度法）,甲醇 不得出峰 检测限= 3.1ng,丙酮 5.0% 内标法 + 校正因子,以地塞米松磷酸钠为例 GC法,地塞米松磷酸钠,检查 甲醇和丙酮,精密称取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)与丙酮100l(79mg)置1
9、00ml量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得出现甲醇峰。,（四）游离磷酸盐的检查,地塞米松磷酸钠,对照品比色法,供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 钼蓝：740nm对照液：同上,（对照液 0.0035%KH2PO4）,USP、BP、JP均采用,RPHPLC（大多内标法）,（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）,四、含量测定,测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。,示例：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相 ODS，流动相 甲醇-水 （65:35），检测波长254nm， 内标物 己烯
10、雌酚系统适用性试验：n 1000，R符合规定。,测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法,对照品溶液,供试品溶液,己烯雌酚,黄体酮,（二）UV法,-3-酮 240nm（）,肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药,苯环 280nm（）,雌激素,醋酸地塞米松片的含量均匀度检查（1）配制供试液（2）测定：240nm（3）计算,肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,C3酮基,（1） 原理,异烟腙（黄）,酮基,异烟肼,-,3,C,HCl,（缩合）,（三）比色法,异烟腙（黄色）,（2）方法,对照品法,（3）讨论,反应速度（反应专属性）,A.,C3= O C17= O 、
11、C20= O C11= O 不反应,反应专属性 C3酮基,B. 溶剂的选择,异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇,无水甲醇无水乙醇,C.水分、温度、O2与光线的影响,含水量腙水解A%,不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响,t ,D. 酸的种类和浓度及异烟肼的浓度,肾上腺皮质激素类,C17 -醇酮基,强还原性,（1）原理,2. 四氮唑比色法,三苯甲瓒深红,H,蓝四氮唑（BT）,（2）方法,对照品法,B. 溶剂、水分的影响,以无醛乙醇为溶剂,C. O2与光线的影响,避光,隔绝空气、快速、充N2,D. 碱的种类及加入顺序,以氢氧化四甲基铵的结果最佳,加入顺序：,E. 温度与时间,（1）原理,雌激素,雌二醇-3-甲醚,max=465,max=515,(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚,Iron-phenol Reagent,
