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1、目录 一、搁璺 中文论著摘要1 英文论著摘要5 ：_ 二、英文缩略语1 0 三、论文 卤，苦j 1 2 日U 舌j 一1 论文一A p e l i n 对心肌梗死大鼠的心肌保护作用 白，言1 6 刖茜1 材料与方法1 7 结果1 8 讨论1 9 结论2 l 论文二A p e l i n 对心肌缺血大鼠心脏侧枝循环的影响 H t 言2 2I 画 材料与方法2 2 结果2 6 讨论3 0 结论3 3 论文三A p e l i n 对内皮细胞增殖，迁移和血管形成的影响 币f 。言3 4 刚舌。1 材料与方法3 4 结果3 6 讨论4 0 结论4 2 四、本研究创新性的自我评价4 3 五、参考文献4
2、4 六、附录 综述4 8 在学期间科研成绩7 1 致谢7 2 个人简介：” 中文论著摘要- A p e l i n 对心肌缺血大鼠心脏侧枝循环的影响 刖 盂 心肌梗死是威胁人类健康的重要心血管疾病之一，是引起猝死和心力衰竭的 j i 要原因，所以有必要进行积极有效的再灌注治疗，以挽救濒死心肌。再灌i l ：的 肜式，包括心血管介入治疗，冠状动脉搭桥，干细胞移植等，其中心脏的侧枝循 环形成对于防止心肌梗死，心功能的保护具有重要意义。 A p e l i n 是1 9 9 8 年日本学者T a t e m o t o 从牛胃组织提取物中分离冉一种小分予多 肽，是m 管紧张素受体A T l 相关受体
3、蛋F t ( A n g i o t e n s i o nI IP r o t e i nJ ，A P J ) 的内源性 配体，A p e l i n A P J 信号通路可以促进细胞内多种信号通路的激活产生多利，! l ：- E q ! 功 能。A p e l i n 在心血管系统高度表达，它具有增强心肌收缩力、扩张血管、减轻心 肌! 负1 ：；：、促进血管，卜长、调节水盐平衡等作用，其中A p e l i n 促进m 管形成的f i - J f j ， 越水越引起学者的重视。 A p e l i n 信号对心脏和血管的形成有重要作用。它在视网膜血管的内皮层中也 高度表达，A p e l
4、i n 足一个视网膜内皮细胞的血管生成因子。与许多其它的血箭， i 成1 人l 子相似，在低氧的情况一F ，A p e l i n 基凶的表达是增加的。用反义技术抑制 A p e l i n 的表达会导致血管生成障碍，A p e l i n 具有促有丝分裂、促进分化和抑制凋 亡的作用。另外，A p e l i n 及其受体A 甜r l b 还控制斑马鱼原肠时期心脏形态的发乍， A p e l i n 和A g t r l l b 受体表达不足或者表达过度都将导致心脏前体缺陷并最终祟及心 肼! 发育。乡j 外，A p e l i n 会加速血管生成开关的打开，潜在的激活了肿瘤的新_ ! m 篱彤
5、成。A p e l i n 基冈在三分之一的人类肿瘤中表达上调。A p e l i n 促进新7 L 血管的 特性，已经在小鼠的肿瘤新生血管形成过程中得到证实。 A p e l i n 对内皮细胞的促有丝分裂和血管生成的特性意味着它也许在治疗j f I L 管乍成有关的疾病方面有潜在的作用。A P J 的受体激动剂或许能够作为药理学I j 具在皿管形成对抗缺血性疾病方面有治疗意义，而它的拈抗剂或许能够阻J 卜m L 管 形成，以阻止肿瘤生长和缺血性视网膜病。A p e l i n 作为一个强有7 J 的内皮生K 衣J 血管生成的刺激因子，激活这种信号通路，能否促进缺血心肌的血管，E 成，减轻
6、心肌缺血所致的损伤或者坏死，目自仃尚不得而知。 本课题旨在通过观察：A p e l i n 是否参与和保护心肌缺血损伤及其机制；外源性 给3 A p e l l m 把甭促进内皮细胞的增贿，迁移和血管形成；外源性给予A p e h n n 一目i “ 增 加心肌细胞侧支循环的形成，A p e l i n 是通过那个通路促进血管的形成的，从向为 挽牧缺血、濒死的心肌寻找一条有效的途径。 目的 1 、建立在体火鼠心肌缺血模型，观察心肌缺血时A p e l i n 足否对心脏自保护作 用及其机制。 2 、外源性给予A p e h n 艇, 否促进心脏侧支循环的形成，减少心肌缺血或者心肌 梗死。 3
7、、通过H U V E C s T 解A p e l i n 对内皮细胞增殖，迁移和血管形成的影响，以探 b A p e l i n 促进m 管形成的可能机制，以及这种机制是否与哺乳动物雷帕霉索靶蛋 t ：t ( m a m m a l i a nt a r g e to fr a p a m y c i n m T O R ) 转导通路相关。 方法 1 、A p e l i n 对心肌缺血大鼠的心脏保护作用 ( 1 ) 雄性S p r a g u e D a w l e y ( S D ) 大鼠左冠状动脉前降支结扎，建锣心肌缺血 模型。腹腔注射A p e l i n ( 1 9 9 k g d
8、 2 ) ，应用心导管检查心率( H R ) 、A 窀最大收 缩J 丘( L V E S P ) 、左室舒张木期妪( L V E D P ) 、左室内压最大升降速度( 士d P d T m 烈) 以评价A p e l i n 对心功能的影响。 ( 2 ) 雄性S D 大鼠冠状动脉前降支结扎，建立心肌缺血模型，腹腔注射A p e l i n ( 1 9 9 k g d 2 ) ，抽血检测血中乳酸脱氢酶( L a c t a t ed e h y d r o g e n a s e ，L D H ) 含：最。 2 、A p e l i n 对心肌缺血大鼠心脏侧枝循环的影响 ( 1 ) 大鼠冠状动脉
9、前降支结扎，建立心肌缺血模型，同时给予A p e l i n 腹腔注 射( 1 “g 瓜g d x 7 ) 以观察A p e l i n 对心脏侧枝循环的影响。 ( 2 ) 酶联免疫法( e n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ，E L I S A ) 测定大鼠心肌 缺m 损伤时血小板内皮细胞粘附分子l ( P E C A M l C D 3 1 ) 蛋自含量。 ( 3 ) 伊文氏蓝和红四氮唑( T T C ) 双染色，应用计算机图象分析系统计算心 2 肌梗夕E 面积。 ( 4 ) 通过C D 3 1 免疫组化染色，在显
10、微镜下观察缺血心肌组织的血管牛成情 况。 ( 5 ) H E 染色显微镜下观察缺血心肌组织的损伤情况。 ( 6 ) 通过w e s t e r nb l o t 检测V E G F 和C D 3 1 的表达。 3 、A p e l i n 对内皮细胞增殖，迁移和血管形成的影响 ( 1 ) 应用甲基噻哗基四哗( m e t h y lt h i a z o l y lt e t r a z o l i u m ，M T T ) 的方法观察 A p e l i n 对H U V E C s 增殖的影响。 ( 2 ) 通过T r a n s w e l l 观察A p e l i n 对H U V
11、E C s 迁移的影响。 ( 3 ) 应用T u b e f o r m a t i o n 观察A p e l i n 对H U V E C s 血管形成的影响。 结果 1 、A p e l i n 对心肌缺血大鼠心功能的保护作用与其它各组比较，大鼠心肌缺 血4 8 h 时A p e l i n 治疗组( 1 l 上g k g d x 2 ，腹腔注射) 能明显提高L V + d p d t m 舯L V E S P ， 降低L V E D P ( 尸 聃蛾鹏础卿触嵫酗砒嘲斌瓤跏睁 P y r l ) a p e l i n 13 卜A p e l i n - 13l l q o e l i
12、n - 1 2J N ：E - 2 毒 I n a c t i v ep e p t J d e s ( 12a m i n oa c i d s ) 图2 ，A p e l i n 合成、翻译后处理和代谢过程 研究人类和两栖类动物的G P R s 受体都是基于同样的步骤，使刚简并引物， 每。次产生个编码一个G P C R 结构相关的期待扩增的受体的e D N A 。人类A P J 受体应用设计的引物扩增得到了血管加压素受体或者受体的一个亚型，诱导产生 血管紧张素受体A T l 的相似的蛋白序列。两栖类动物的受体X m s r 是应 j 米扩 增肾l 二腺素能的或者含血清素的受体，而它的蛋白序
13、列与两种缸管紧张素受体和 两种C X C 化学因子受体相似。鼠类的m s r A P J 受体是应用从人类到两栖类动物受 体的保守的氨基酸序列设计的引物扩增的。接着，鼠e D N A 序列在接下束的一1 年 L l I _ _ = = 三个4 、= 同的实验室获得【1 0 8 1 。 4 、A p e l i n 的分离 尽管血管紧张素受体和A P J 受体结构相关，人们发现血管紧张素I I 没有和 A P J 受体结合在一起。应用细胞感受器去测量增加的细胞外酸化率的方法将牛的 A p e l i n 的受体的配体I l 】辨认出来。 不司的物种的A p e l i n 序列显示全部的氨基酸序列高度保守，在C 未端地f x 带 有，形格的辨认性1 2 1 。前蛋白的突变会产生两种配体，A p e l i n ( 6 1 - - 7 7 ) 和A p e l i n ( 6 5 7 7 ) 。牛初乳的凝胶过滤色谱显示：相应的活性顶峰位于A p e l i n ( 4 2 - - 7 7 ) 和A p e l i n ( 6 5 - - 7 7 ) 洗脱的部位【8 】多种A p e l i n 的存在，这也许并不是严格的A p e l i n ( 4 2 7 7 )
