《分子细胞实验课件细胞培养二细胞复苏与接种及兔骨髓细胞的染色观察》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子细胞实验课件细胞培养二细胞复苏与接种及兔骨髓细胞的染色观察（26页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验八、细胞复苏与接种,实验目的：掌握细胞复苏的方法，能独立地进行细胞复苏的接种操作。 实验原理：冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞,细胞株：冻存HeLa细胞（人宫颈癌细胞 ） 器材: 小液氮罐、冻存管（塑料螺口专用冻存管）、离心管、5ml枪头、 60mm Dish,水浴锅等 试剂：DMEM培养基、小牛血清,实验材料,(August 18, 1920 October 4, 1951),第一个在体外连续培养成功的细胞,Henrietta Lacks,1、用镊子从液氮中取出冻存管，将管帽旋松后
2、再迅速旋紧，置于塑料泡沫垫上，放入水浴锅，使细胞迅速融化。,实验步骤,2、1000rpm离心10分钟，取出冻存管，用酒精壶喷撒吸水纸后擦拭冻存管，特别是管口。 以下操作都在无菌操作台上进行： 3、拧开瓶盖，用1ml枪头吸掉上清液，倒入废液烧瓶中。 4、取15ml离心管一支，加入5ml DMEM培养基，作为细胞悬浮液。 5、旋开管帽，用1ml枪头取1ml 上述离心管中的DMEM培养基1ml，加入到冻存管中，轻轻吹吸，悬液细胞后，将细胞悬液重新吸回到15ml离心管中,充分混匀 (供10人用). 6、取60mmDish一枚，加入4ml DMEM培养基，在加入0.5ml血清 7、用1ml枪头取0.5m
3、l细胞悬液，逐滴加入60mm Dish中，轻轻混匀。放入托盘，满10盘后移入细胞间CO2培养箱中，37培养，第二天观察生长情况。,培养皿标记方法：,1.简述细胞复苏和接种的过程,作业题：,实验目的,掌握骨髓细胞的制片技术,实验原理,瑞氏染料中含有碱性美蓝和酸性伊红两种成分。细胞核中强碱性的组蛋白、精蛋白与伊红油亲和力，故染成红色。但细胞核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白与美蓝结合，但其量太少而不显蓝色，故细胞核呈紫红色,实验九、兔骨髓细胞的染色观察,原始红细胞 中性粒细胞 单核细胞 酸性粒细胞 碱性粒细胞 巨核细胞 淋巴细胞 淋巴细胞,原 红 细 胞 Normoblast,胞体大,直径1522um,
4、细胞外缘可见伪足,胞浆量少,呈深蓝色,部分核周可见淡染区,胞核圆形居中,核染色质呈细颗粒状,较原粒粗密着色深，核仁1-5个.,早 幼 红 细 胞 Basophilic normoblast,胞体变小,胞浆量变 多变浅,仍可见淡染 区及伪足，核染色 质 聚集成小块状,核 仁消失.,中 幼 红 细 胞 Polychromatic normoblast,胞浆内出现血红蛋 白呈嗜多色性,核染色质 聚集成团块状,似车轮 状,可见副染色质.,晚 幼 红 细 胞 Ortho-choromatic normoblast,胞浆量多,呈粉红色, 核染色质聚集成大 团块状,染紫黑色.,原 粒 细 胞 Myelobl
5、ast,胞体大,胞浆量少成淡 兰色,核圆形,核染色 质成细沙状,核仁 1-3 个清晰易见,早 幼 粒 细 胞 Promyelocyte,胞体较原粒大，核 染色质聚集，核仁可有可无，胞浆呈淡兰色，含有大小，形态，数量不一，分布不均的紫红色非特异性颗粒。,中幼粒以下阶段,胞浆中出现特异性颗粒，从核的凹陷程度来划分各个阶段，从特异性颗粒的不同划分为嗜酸，嗜碱性及嗜中性。,中性粒细胞,中性粒细胞,碱性粒细胞,酸性粒细胞,原巨核细胞,原巨核细胞：核 仁不甚清晰；胞 质量较少，深蓝 色，边缘常有不 规则突起。,幼巨核细胞,幼巨核细胞：胞体明显增大。胞核开始有分叶、核形不规则并有重叠，核仁模糊或消失。可有有
6、少量嗜天青颗粒。,颗粒型巨核细胞,颗粒型巨核细胞： 胞体明显增 大，胞核明显增 大，高度分叶，胞 质极丰富，充满大 量细小紫红色颗粒,产血小板型巨核细胞,产血小板型巨核细胞： 胞质周缘部分已裂解 为血小板脱落,单核细胞系统,原单核细胞： 核仁大而清楚。不含颗粒。 幼单核细胞： 核仁模糊或消失。胞质可见许多细小、分布均匀的淡紫红色嗜天青颗粒。 单核细胞： 无核仁；胞质充满多数细小、分布均匀、细尘样淡紫红色颗粒胞核圆形或不规则形，凹陷、切迹、扭曲或折叠。胞质丰富，边缘常不整齐，有时可有伪足状突起。能吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片。,淋巴细胞系统,原淋巴细胞： 核仁明显,不含颗粒。 幼淋巴细胞：
7、 核仁模糊或消失。可有数颗深紫红色嗜天青颗粒。 淋巴细胞：,实验器具和药品,实验材料：兔股骨骨髓、兔血 器具：解剖剪、镊子、牙签、载片、滤纸 药品：瑞氏染液，Giemsa染液，0.01M磷酸缓冲液（PBS）pH6.8。,实验方法,1.骨髓涂片的制作 用手术剪刀剪掉大腿部的肌肉，充分暴露股骨，再用大剪刀从上端剪断股骨，用中号镊子夹股骨以挤出骨髓，如果骨髓不易取出，可用牙签插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于一载玻片上，涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并迅速使之干燥。 2. 血涂片的制作 常规法,2.血液涂片、骨髓涂片的染色 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖,染色1分钟 滴加经稀释的姬姆萨染液（用PBS稀释，每毫升PBS加一滴姬姆萨染液）1滴 染色10分钟； 分色：用自来水缓缓冲洗至少3分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。 3.镜检,作业,观察比较骨髓细胞与血液细胞的差异,
