环境消毒.监测与验证课件

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1、环境消毒、监测与验证 耳轮,第一部分：洁净区清洁与消毒 第二部分：洁净室环境监测 第三部分：设备清洁,本章内容：,我们已经走得太远，以至于忘记了为什么而出发。 黎巴嫩 纪伯伦（18831931）,心得：,第一部分：洁净区清洁与消毒,表面擦拭 手工喷雾 蒸汽熏蒸（热过程） 干雾消毒、灭菌（冷处理）,房间消毒的方法,一种效果非常好的洁净房间的消毒方式。 在越来越“以人为本”和“环境保护”的今天，应该格外关注“甲醛”和“臭氧”等气体消毒剂的不良影响。,熏蒸,熏蒸（fumigating）灭菌概念： 这一标准于1980起收录于USP ，如今已为世界各国普遍接受和采用。 在一定温度和压力的密闭条件下，化学

2、毒剂由固态或液态迅速转成气态渗透到生物体内，使生物致死。 熏蒸有助于降低洁净区内死角的微生物污染。,熏蒸消毒：,消毒灭菌时间： 12小时接触时间（通常推荐）。 排气、通风时间： 24小时。一个漫长过程。,甲醛熏蒸：,3.1.5.1 概述： 甲醛是一种灭菌剂，对所有的微生物都有杀灭作用，包括细菌繁殖体、芽孢、真菌和病毒。 3.1.5.2 适用范围：可用于对湿、热敏感、易腐蚀的医疗用品的灭菌。 3.1.5.4 注意事项 (5) 甲醛有致癌作用，不宜用于室内空气消毒。,甲醛熏蒸：,卫生部：消毒技术规范 2002,杀菌彻底，广谱 可杀灭细菌繁殖体和芽孢、病毒、真菌等，并可 破坏肉毒杆菌毒素。对霉菌也有

3、极强的杀灭作用。 无残留，是一种无污染的消毒剂。 臭氧是气体灭菌，能迅速弥漫到整个灭菌空间， 灭菌无死角。,臭氧灭菌,空气消毒：用于无人的情况下，室 内空气 的消毒。,卫生部：消毒技术规范 2002,3.1.7.4 注意事项 (1) 臭氧对人有毒，国家规定大气中允许浓度为 0.2mg/m3。 (2) 臭氧为强氧化剂，对多种物品有损坏，浓度 越高对物品损害越重，可使铜片出现绿色锈 斑、橡胶老化，变色，弹性降低，以致变脆、 断裂，使织物漂白褪色等。 使用时应注意。 (3) 多种因素可影响臭氧的杀菌作用，包括温度、 相对湿度、有机物、pH、水的浑浊度、水的 色度等。使用时应加以控制。,臭氧熏蒸：,卫

4、生部：消毒技术规范 2002,常见的化学消毒剂： 1）醇类：使蛋白质变性。如75%酒精用于皮肤和容器表面消毒；10%丙二醇用于熏蒸消毒。 （2）酚类：损害细菌的细胞壁和细胞质膜。如苯酚一般使用浓度为0.5-3%，甲苯酚为2-5%。 （3）醛类：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高锰酸钾用于熏蒸，并密闭12-24小时；2%戊二醛用于熏蒸消毒。,（4）酸类：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。 （5）氧化剂：作用于细菌酶系统。如0.2-0.5%过氧乙酸、高锰酸钾、过氧化氢和臭氧等。 （6）表面活性剂：作用于细菌质膜，主要用于表面消毒、浸润消毒和手消毒等。如0.1-0.2%新洁尔灭、0.05

5、-0.1%杜灭芬、0.1-0.2%洗必泰。,消毒剂：过氧化氢和过氧乙酸 消毒方式：干雾消毒系统,介绍一种消毒剂和消毒方式,干雾：,小液滴会反弹不会破碎。,大液滴破碎而湿滑表面。,生产7.5 m的液滴 像气体性质 反弹离开表面 不湿润接触的表面 空间分布均匀，符合布朗运动原理。,干雾系统,洁净区生物负荷研究（风险分析） 洁净区操作人员行为的规范 规范洁净区操作人员的行为是维持洁净区平 衡不可或缺的！,洁净区洁净度平衡的维持,第二部分：洁净室环境监测,细菌数：在细菌培养基上菌落形成单位的平均数。 真菌数：在真菌培养基上菌落形成单位的平均数。 微生物总数 = 细菌数 + 真菌数,微生物总数,细菌、真

6、菌培养基：,采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30 35 培养箱中培养，时间不少于2d； 采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20 25 培养箱中培养，时间不少于5d。,GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010,细菌培养基上生长的真菌如何计数？ 真菌培养基上生长的细菌如何计数？,微生物计数的困惑 ！,定义：在TSA（大豆酪蛋白琼脂）培养基上 生长的包括真菌的菌落形成单位总的 数量。 培养温度/时间： 1、细菌： 3035 5天。 2、细菌： 3035 2天； 霉菌或酵母菌： 2025 3天。,总好氧微生物数（TAMC）：,定义：在SDA

7、（沙氏葡萄糖琼脂）培养基上 生长的包括细菌的菌落形成单位总的 数量。 培养温度/时间： 2025 5天。,酵母菌和霉菌总数（TYMC）：,1、TAMC时，如果真菌被发现生长，应该被 作为TAMC计数的一部分。 2、TYMC时，如果细菌被发现生长，应该被 作为TYMC计数的一部分。 3、当TYMC由于细菌的生长而超过了可接受 标准，应当使用含有抗生素的SDA培养基。,计数原则：,洁净室环境监测培养基的选择？ （关键区域使用培养基的特殊要求）,洁净区微生物监测的动态标准 （GMP2011版）,CHP2010,中国药典2010年版 二部 附录XIX Q “药品微生物实验室规范指导原则” 用于环境监测

8、的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的结果。,附录B: B.3 培养基平皿培养及保存 制备好的培养基平皿宜在28保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜的方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期的标记。,GB/T 16293-2010 / GB/T 16293-2010,1、TSA 用于细菌取样。 培养温度/时间：3035 不少于2天。 2、 SDA 用于霉菌和酵母菌取样。 培养温度/时间：2025 不少于5天。,环境测试培养基：,3、用户认可并验证了的培养基。 以上

9、摘自：GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010,环境测试培养基：,1、忽视洁净环境中的影响因素 2、忽视培养基的选择,环境监测中常忽视的两个方面：,（1）API 的残留 （2）消毒剂/杀孢子剂的残留,1、忽视洁净环境中的影响因素,抗菌素 药物活性成分,API,消毒剂/杀孢子剂,常见的化学消毒剂： 1、酚类 2、醛类 3、过氧化氢类 4、季胺盐类化合物 5、以上混合物,（1）选择性低下，营养全面 （2）含有中和剂 （3）“无菌”平板培养基,2、忽视培养基的选择,营养琼脂 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）,培养基的选择,参见：“中国药典”2010年版 附录109页 附录XI J 表

10、1： “常见干扰物中和剂或灭活方法”,中和剂的使用：,青霉素酶（ -内酰胺酶） 可以有效的水解-内酰胺类抗生素。 包括： - 青霉素G - 氨基青霉素类，如氨苄西林、阿莫西林、匹氨西等 - 羧基青霉素类，如羧苄西林、替卡西林等 - 脲基青霉素类，如呋苄西林、美洛西林等 - 头孢、,酶（1）：青霉素酶,头孢菌素酶 可以有效水解头孢类抗生素及以上的头孢类 抗生素。 包括：头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢克洛、头孢呋辛、 头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松等。,酶（2）：头孢菌素酶,抵抗消毒剂的中和剂：,1、吐温-80 能够消除六氯酚和含汞类消毒剂的影响。 2、卵磷脂 能够消除洗必泰类消毒剂的影响。

11、3、卵磷脂、吐温-80 能够消除季胺类化合物（苯扎溴铵、苯扎 氯铵等）消毒剂的影响。,无菌平板培养基 （预灌装无菌培养基）,理想的环境测试培养基：,1、A级、B级、C级洁净区直接使用 2、室温储存 3、有效期长 4、无菌包装、包装完整 5、特制平板 6、培养基灌装量大,无菌平板培养基优点：,55mm接触平板（Rodac Plate）,Replicate Organism Detection and Counting GMP2011和 EU GMP: - 平板尺寸：15 X 55 mm - 取样单位面积：25cm2,接触板的取样面积： 2430cm2,USP1116 洁净室和其它控制环境的微生物

12、评估,取样面积：不小于20cm2 。 取样方法： 采样时培养基表面应与采样点接触不少于10s，向整个接触表面施加恒定均匀的压力（如施加的质量约为25g/cm2），不得有环形或线性运动，装置有接触并拿开后，要加盖并尽快用适当的培养条件培养。,ISO 14698 洁净室及其相关控制环境,目前各类官方的指导原则中，很少有对洁净环境微生物监测方法提出要求的。 目前各类官方的指导原则中，各种微生物只有生长在如下两种固体表面上的测试方法：琼脂培养基和滤膜，才能够得到确认。,洁净环境微生物检测：方法确认,培养基就是微生物检验员的“分析仪器”。 培养基的质量控制相当于“培养基验证”。,培养基 = “分析仪器”

13、,TSA TSA+吐温80+卵磷脂 TSA+酶,关键区域环境监测培养基：,第三部分：设备清洁,第一百四十三条 清洁方法应当经过验证，证实其清洁的效果，以有效防止污染和交叉污染。清洁验证应当综合考虑设备使用情况、所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的性质和限度、残留物检验方法的灵敏度等因素。,GMP 2011年版：,一、FDA对设备清洁“警告信”汇总 二、清洁验证的关注点 1、残留物如何确定？ 2、残留物限度规格制定？ 3、分析方法如何验证？ 4、日常监控如何实施？,1、没有定期对设备和器具进行清洁与维护， 有可能造成污染，并对药品的安全性、鉴 别特性、浓度/效价、

14、质量和纯度造成影 响。,FDA关于设备洁净“警告信”统计：,2、生产中所用的设备（包括器具）的清洁维 护没有建立完善的规程。,FDA关于设备洁净“警告信”统计：,3、没有保存药品生产中所用设备的维护、清 洁、消毒和检查记录，无设备清洁、维护 使用的记录，包括日期及使用时间。,FDA关于设备洁净“警告信”统计：,写好要做的 做好所写的 记好所做的,“GMP”口号：,二、清洁验证的关注点 1、残留物如何确定？ 2、残留物限度规格制定？ 3、分析方法如何验证？ 4、日常监控如何实施？,活性成分残留 辅料残留物（非水溶性） 清洁剂和溶剂残留 生物细胞及代谢物残留 微生物 润滑油,残留物分类：,制剂残留

15、关注点：,二、清洁验证的关注点 1、残留物如何确定？ 2、残留物限度规格制定？ 3、分析方法如何验证？ 4、日常监控如何实施？,1、实际的 2、可以被验证的 3、可实现的 4、能够经得起科学推敲的,限度和可接受标准制定原则：,PDA技术报告：1998增刊52卷 第6号,1、目检（肉眼检测） 2、化学检验 3、微生物检验,限度规格制定的三个层面：,原则：目检不得有可见残留。 是直观、定性、简单评估清洁的方式 经验数据：目见能发现最低的残留物 限度是14g/ cm2 这是换品种生产时设备清洁的最低标准！,1、肉眼检测限度：,该种方法不适用于高效、低剂量的产品。,1) 残留物浓度限度：10 X 10

16、-6 (百万分之十) 2) 生物活性度：正常治疗剂量的1/1000 3) 残留溶剂限度标准,2、化学检验残留物限度的确定,10 X 10-6/百万分之十/10ppm 含义：上批产品残留在设备里的物质全 部溶解到下批产品中的浓度限度 10 X 10-6 检测：最终冲洗水中残留物的浓度限度 10 X 10-6,（1）残留物浓度限度,正常治疗剂量的1/1000 含义：最低日治疗剂量（MTDD）的1/1000 检测： MTDD = 每次给药数X活性成分含量X每日最少给药次数 允许残留物总量（g/ cm2 ） = MTDD X 最小生产批量 X 1000 单个制剂质量X每日最多使用制剂数X设备内表面积,（2）生物活性度（安全系数）：,可用于清洗的化学溶剂 (三级溶剂) 在下批生产中允许的溶剂残留小于初始溶液浓度的0.5%。,（3）残留溶剂限度标准：,特殊产品，如致敏性产品（青霉素、头孢类）或高活性产品在使用最好的检测手段的前提下，不应被检出。 实际上意味着对