提取细胞全蛋白操作方法

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细胞全蛋白提取步骤吸取培养基,预冷PBS清洗细胞三次,细胞刮刮脱细胞,收集至离心管,1000rpm离心5分钟。洗涤后的细胞转移至洁净EP管,冰上操作,配制细胞裂解液,1ml Lysis,Buffer中加入10 l磷酸酶抑制剂、1 l蛋白酶抑制剂、5l 100mM的PMSF。混匀后冰上保存数分钟待用。在洗涤好的细胞中按照每107个细胞加入1ml细胞裂解液的比例,加入细胞裂解液。200l移液器反复吹打,至蛋白析出。4摇床,温和振摇15分钟。14000rpm,4离心15分钟,上清即为细胞全蛋白提取物。BCA法测蛋白浓度。蛋白分装后保存于-70冰箱,避免反复冻融。提取细胞全蛋白整个过程中所有使用的物品及试剂均需预冷,防止蛋白降解。

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