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1、实验七 食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求1、 了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。2、 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。3、 掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。4、 掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。二、原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜
2、在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个制生理盐水3、250ml三角瓶3个制培养基等4、10100mm试管6支血浆凝固酶试验5、1ml移液管2支6、10ml移液管2 支7、直径为90mm平皿12套制血平板B-P平板8、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总
3、量所用容器1. 无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）2. 0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）3. 0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶4. 7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶5. 普通营养琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶6. BP培养基95ml/瓶1瓶250ml三角瓶7. 兔血液5ml四、实验内容 （一）、增菌培养法样品处理选择性增菌选择性平板分离血浆凝固酶试验鉴别结果报告第一天 样品处理和增菌培养（一）、样品处理固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内，于8000
4、r/min均质12min，制成1:10样品匀液。 液体食品:：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇制成1:10样品匀液。（二）、增菌培养接种操作：吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中。37C培养24小时。培养：放于361培养24h。培养结果：在NaCl肉汤中呈混浊生长，胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长。第二天 接种选择性平板进行分离培养（一）、接种选择性平板取增菌液1环，划线接种于血平板或BP平板。（二）、培养放于361培养24h。第三天 观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试验（一）、
5、观察分离结果结果：金黄色葡萄球菌，在血平板上呈：金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈；在Baird-Parker平板上：菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。 （二）、革兰氏染色、镜检操作：革兰氏染色镜检结果：金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞，直径0.5-1m。（三）、结果报告：综合形态特征，血平板情况以及血浆凝固酶试验结果，判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。五、思考题1、 金黄色葡萄球菌在血平板或BP平板上的菌落特征如何？为什么？2、 食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在？为什么？3、 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么？
