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1、实验一 蠕虫学粪便检查法（一）一、 内容1. 直接涂片法；2. 饱和盐水漂浮法；3. 各种蠕虫卵的特征。二、 参考资料蠕虫学粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法。因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在家畜、家禽的消化道及其相连的器官（如肝脏、胰脏），有的寄生在呼吸器官和生殖器官（家禽），如后圆线虫、前殖吸虫。寄生在这些部位的寄生虫，它们的虫卵、幼虫或节片都随着宿主的粪便排除体外，因此，通过粪便检查可以获得生前诊断。除蠕虫以外，还有一些原生动物的寄生虫，如结肠小袋纤毛虫及球虫，它们的包囊或卵囊亦随着宿主的粪便排除体外，依靠粪便检查也可以建立生前诊断。 根据蠕虫学粪便检查的目的可分为：（一） 蠕虫虫体检查法
2、： 是从粪便中检查虫体或节片，如莫尼茨绦虫，一般以肉眼直接检查；（二） 蠕虫虫卵检查法：是从粪便中检查虫卵，如大多数的吸虫、绦虫和线虫；（三） 蠕虫幼虫检查法：是从粪便中检查幼虫，如牛、羊的网尾线虫等，随粪便排出的不是虫卵而是幼虫。下面主要分述虫卵和幼虫检查法。1.蠕虫虫卵检查法（之一）：（1） 直接涂片法： 取一片洁净的载玻片，在玻片中央滴加1-2滴50甘油生理盐水，然后用镊子或牙签挑取少量粪便，与甘油生理盐水混匀，并将粗粪渣推向一边，涂布均匀，作成涂片，涂片的厚薄以放到书上隐约可见下面的字迹为宜，加上盖玻片，置显微镜下检查，检查时先在低倍镜下顺序查找，如发现虫卵，再换高倍镜仔细观察。如无甘
3、油生理盐水时可以用常水代替，加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂膜很快变干燥。但是检查原虫的滋养体，必须以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观察。 本法操作简单，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别是轻度感染时，往往得不到可靠结果，因此，本法只能为辅助的诊断方法，并且每次检查要重复观察8-10片，才能收到确实的效果。 （2）饱和盐水漂浮法： 本法基本原理是采用比重比虫卵大的溶液，使虫卵浮集于液体的表面，形成一层虫卵液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。 方法：先配制饱和盐水溶液，配制时先将水煮开，然后加入食盐搅拌，使之溶解，边搅拌边加食盐，直加至食盐不再溶解而生成沉淀为止（10
4、00毫升沸水中约加食盐380克），再以双层纱布或棉花过滤至另一干净的容器内，待凉后即可使用。（溶液凉后如出现食盐结晶，则说明该溶液是饱和的，合乎要求，其比重为1.18，此溶液应保存于温度不低于13的情况下，才能保持较高的比重）。 取粪便5-10克，置于100-200毫升的烧杯中，先加入少量饱和盐水，把粪便调匀，然后加入约为粪便的12倍量的饱和盐水，并搅拌均匀，用纱布或40目的铜丝筛过滤于另一干净的烧杯内，滤液静置30-40分钟，此时比饱和盐水比重轻的虫卵，大多浮于液体表面，再用铂耳或直径0.5-1厘米的铁丝圈蘸取此液膜，并抖落在载玻片上，进行镜检，或者将此滤液直接倒入试管内，补加饱和盐水使试管
5、充满，加上载玻片（盖玻片应与液面完全接触，不能留有气泡），静置30-40分钟，取下盖玻片，贴在载玻片上进行镜检，可以收到同样效果。 本法检出率高，在实际工作中广泛应用，可以检查大多数的线虫卵和绦虫卵，为了提高漂浮效果，可用其他饱和溶液代替饱和盐水。如在检查比重较大的后圆线虫时，可先将猪粪便按沉淀法操作，取得沉渣后，在沉渣中加入饱和硫酸镁溶液，进行漂浮，收集虫卵。常见虫卵及漂浮比重如下表：寄生虫卵比重 漂浮液比重 种类 比重猪蛔虫卵 1.145钩虫卵 1.0851.090毛圆线虫卵 1.1151.130猪后圆线虫卵 1.20以上肝片吸虫卵 1.20以上姜片吸虫卵 1.20以上华支睾吸虫卵 1.2
6、0以上双腔吸虫卵 1.20以上 种类 1000ml水中加入 比重 的试剂量（g）饱和盐水 380 1.1701.190硫酸锌溶液 330 1.180氯化钙溶液 85 1.050 同上 440 1.250硫代硫酸钠溶液 1750 1.371.39饱和硫酸镁 920 1.26饱和硝酸钠 1000 1.201.402.操作、观察注意点：（1）在操作中，粪便不能互相感染，已经使用过的工具，必须进行消毒，或另换工具，才能检查第二个粪样，粪样更不能搞错，特别在大面积普查工作中，一定要做好登好编号，每次检查都要有详细记录。（2）粪便要求新鲜，防止暴晒、腐败而失效。（3）镜检时一定要详细观察，严格区别虫卵与非
7、虫卵。虫卵：都有一定的卵壳结构，且都有一定的形状，如圆形、椭圆形、三角形等，多数都是两侧对称，内含有卵细胞或一个已发育的幼虫或毛蚴。 非虫卵：在粪便中容易与虫卵混淆的杂物有各种植物细胞、花粉颗粒、脂肪球、气泡、真菌孢子、螨类及其虫卵、纤毛虫等等。但这些物质，由于种类不同，其形状、大小、颜色也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物的，也有呈铺石状的，但都有明显的细胞壁，与虫卵结构显然不同；各种花粉颗粒，往往都带有一定的颜色，易误认为蛔虫卵，但花粉颗粒没有卵壳的结构，表面呈蜂窝状或锯齿状，仔细观察，可以区分。还有脂肪和气泡之类，亦很像虫卵，但脂肪球和气泡往往大小不一，无色，且折光
8、性很强，周围壁较厚，而内部是空虚的。不具有虫卵的一般结构。总之，粪渣中与虫卵混淆的杂物较多，但只要掌握虫卵的结构和特征是可以辨认的，有时某物与虫卵分辨不清，也可用解剖针轻轻推动盖玻片下的东西滚动，这样往往可以把虫卵和其他物体区别开来。3.各种蠕虫的特征： （1）吸虫卵：多呈卵圆形或椭圆形，大小不一，卵壳有数层卵膜组成较坚实；大多数吸虫卵其一端有一个卵盖（日本血吸虫卵、嗜眼吸虫卵除外），卵内含有许多卵黄细胞及一个胚细胞，还含有一个已成形的毛蚴；颜色多为黄色，黄褐色，有的呈灰白色。 （2）绦虫卵：因种类不同，形状差异很大，虫卵多数无色，少数为黄色或黄褐色，在高倍镜下可见到三对小钩状物。圆叶目绦虫卵
9、壳脆弱，无卵盖，卵壳在虫卵排出时已破裂脱落，常见的所谓“卵壳”实际上是胚膜，在带科绦虫胚膜的两层间呈辐射纹，虫卵圆形或不正圆形，内含六钩蚴；裸头科绦虫卵呈圆形，方圆形或三角形，内有一个含六钩蚴的梨形器；假叶目绦虫卵椭圆形，卵壳颇厚，一端常有卵盖，胚膜被有许多纤毛，内含一个钩球蚴。 （3）线虫卵：一般呈椭圆形，大小不一，无色透明，有的呈灰白色，或褐色或黄褐色，多数虫卵两侧对称，卵可多半由最外层的蛋白质膜，中间几丁质膜和内层的卵黄膜组成，有些线虫如圆形科和毛圆科的虫卵无蛋白质膜，有的卵壳平滑，有的凹凸不平或呈蜂窝状，虫卵内含单个或多个卵细胞或已发育的幼虫。 （4）棘头虫卵：多呈椭圆形或长椭圆形，卵壳很厚，外膜上常呈点窝状或蜂窝状的构造，卵内中央有一个长椭圆形的胚胎，胚胎的一端有六个小钩，颜色多呈棕黄色。 三、作业1.在显微镜下怎样识别虫卵与非虫卵？2.任选绘一虫卵形态图。
