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1、外周血染色体核型分析,D区，合作共建团队，大客户团队,2018.06.23,背景知识（Background information),染色体与遗传病： Genetic Disease 染色体的多变性： Variability 染色体的畸变： Aberration,多达300多种因染色体异常而导致的遗传疾病 46条染色体在不同的人体内存在恒定的微小变异 （无表型效应or病理学意义） 一定条件刺激下 （Eg. 药物、射线、病毒或母亲年龄），染色体会发生数目或结构畸变。,背景知识 (Cont.),染色体畸变 数目改变： Quantity changes 染色体畸变 结构异常： Unusual str
2、ucture,多倍性：体细胞染色体数目成倍增加。 原因： 双雄受精，双雌受精，核内复制。 非整倍性： 体细胞染色体数目增加或少一条或数条。原因： 减数分裂染色体不分离或丢失。 缺失：染色体臂中段或末端丢失。 倒位：某一染色体中间片段发生两个断裂，断片倒转180后重接。 易位： 转位，平衡易位，罗伯逊易位,简介 (Introduction),染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究对象。 外周血染色体核型分析可直接在染色体上显示带型，不仅可以检测染色体数目上的变化， 而且可以观察到缺失、重复、倒位、异位等结构上的异常，因而
3、其检测可用在遗传病以及产前婚前孕前的诊断上。,概念： Concept 目的： Purpose,染色体核型技术检测 （遗传病诊断）： Eg. 唐氏综合症 (21-3体)，Patau综合症(18-3体)， Edwards综合症(13-3体)。,明显体态异常，智力低下，发育障碍，多发畸形或皮纹明显异常，性情异常 第二性征异常或外生殖器两性畸形。 女性原发性闭经、继发性闭经或男子无精 长期接触X线、电离辐射、有毒物质的人员 恶性血液病患者,简介 (Cont.),染色体核型技术检测 （产前婚前孕前诊断）： Eg. 猫叫综合症 （5P综合症), 特纳综合症， 先天性睾丸发育不良综合症，超雄综合症 (XYY
4、综合症)， 超雌综合症(XXY综合症)。,多发性流产，死胎和不孕不孕的夫妇 35岁以上高龄孕妇 已生育过染色体异常患儿的夫妇，或双方或一方具有遗传病家族史 夫妇双方或一方为可疑或已知的染色体数目或结构异常的患者 婚前孕前检查希望进行优生优育检查的人群,简介 (Cont.),项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析,临床应用： Application 检测方法： Method 样本量： Sample,染色体异常是导致自然流产、胚胎停止发育，不良孕产史和不孕不育及发育异常的重要原因，对优生优育门诊就诊的患者进行染色体分析，在临床诊断和优生优育方面有重要意义。 培养法G显带 肝素抗凝全
5、血2.0ml,实验原理： Test Principal,外周血中淋巴细胞在含有植物血凝素(PHA)的培养基中培养68-72小时，进入生长旺盛的有丝分裂期； 之后加入秋水仙素抑制纺锤体形成，使其停留在细胞分裂中期； 再经过氯化钾溶液低渗、固定、滴片制片、胰酶消化、姬姆萨染色，在油镜下可观察到每个分裂期的染色体形态及数量。,项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.),实验操作： Test Procedure,1.接种：先在每瓶含有PHA的5ml培养基的培养瓶中接种0.5ml的外周血，接种2瓶。 2.培养：37全封闭式培养68-72h。在细胞收获前加入0.1ml浓度为20
6、ug/ml秋水仙素培养1-1.5h。 3.细胞的收获： 1）用离心机以2200转/分钟离心5分钟后弃上清液。 2）加入0.075M的KCl溶液10ml，充分混匀，低渗时间为15-18分钟 。 3）预固定：低渗后加入固定液1ml充分混匀（固定液是甲醇与冰乙酸按3：1混匀），以2200转/分钟离心7分钟。 4） 吸弃上清液，加入10ml的固定液，混匀。,项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.),5）用离心机以2200转/分钟离心7分钟，吸弃上清，加入10ml 固定液轻轻混匀（两管合一），2200转/分钟离心7分钟。 6）弃上清，加入适量的固定液轻轻混匀使成细胞悬液。
7、7）取出在4冰水中预冷的清洁玻片，对玻片进行标识，每标记完一块滴片板上的玻片,就回顾一下是否编号准确。 8）用吸管吸取细胞悬液在适当的高度滴于预冷的清洁玻片上，玻片的头体尾各一滴即可。 9）每滴完一张片后，用纸轻轻将底面擦干，放至滴片柜中，10分钟后拿出贴上细胞遗传小标签。 4.烤片：置于75摄氏度烤箱烤3小时。 5.染片：在胰酶中消化20-25s，在生理盐水中漂洗，在吉姆萨溶液中染色1-2分钟即可。,项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.),实验操作： Test Procedure,离心 5mins,PHA,秋水仙素,弃上清液,细胞增殖,KCL氯化钾溶液 0.0
8、75,固定,3x甲醇 1x冰乙酸,离心 7mins,离心 7mins,弃上清液,滴入载玻片,吸管吸取,烘烤,75摄氏度，3hours,染色,胰酶消化25s 生理盐水漂洗,吉姆萨溶液染色1-2mins,外周血,淋巴细胞,G显带评判标准： Evaluation Score 目的： 对不同级别条带水平进行评判，便于染色体的操作分析,0： 无条带 1： 鉴定同一条染色体的形态和主要标志 2： 低 (小于300条) 3： 300条带 4： 适中 (400条带) 5： 500条带 6： 好 (600条带) 7： 700条带 8： 优良 (850条带) 9： 900条带 10： 条带决定高于9级的额外带能在900bphs水平看到，一致视为双方同源。,项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.),谢谢 Thanks,
