医学免疫学第一次实验1415上临本

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1、BEA Confidential. | 2,实验室规则 1 . 进入实验室后穿上白大衣，离室时脱下反叠带走。只带必要的用具，并放在远离操作的位置。 2 . 保持安静，遵守纪律，不得在实验室做与实验无关的事情。 3 . 注意安全，若出现问题，应立即报告带课教师。保护环境，废物要放在指定地点。 4 . 注意节约，爱护设备和仪器。 5 . 实验完毕，应清理桌面，洗手后方可离开实验室。值日同学负责湿性打扫卫生，并关好水电门窗。,BEA Confidential. | 3,【实验内容】 1. 直接玻片凝集反应（ABO血型、细菌鉴定） 2.直接试管凝集反应,BEA Confidential

3、细菌）与相应抗体混合，在适当条件下，如两者对应便发生特异性结合，形成肉眼可见的凝集物，为阳性；如两者不对应，便无凝集物出现，为阴性。,BEA Confidential. | 10,BEA Confidential. | 11,血型：指红细胞膜上特异抗原的类型。凝集原：红细胞膜上的一些特异蛋白质、糖蛋白、糖脂，它们在凝集反应中起抗原的作用。凝集素：能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体。,ABO血型：是根据红细胞膜上是否存在凝集原A与凝集原B而将血液分为4种血型。不同血型的人血清中含有不同的凝集素，但不含有对抗自身红细胞凝集原的凝集素。,BEA Confidential. |

4、 12,BEA Confidential. | 13,【材料】 1.抗体：抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体 2.器材：三棱针、玻片、棉签、牙签 3.消毒剂：2.5%碘酒、75%酒精,BEA Confidential. | 14,【方法】 1. 做标记取干净的玻片一张，用蜡笔划分为二，并在玻片的上角标明“抗A”及“抗B”。 2.采指血用碘酒、酒精消毒被检者的无名指末端，用三棱针刺血12滴于上述玻片，并用棉签止血。 3.加抗体取抗A、抗B单克隆抗体于相应区域的血标本中，然后用牙签两端分别搅拌均匀。 4.观结果将玻片平持手中，前后左右转动使之混匀，置室温大约10分钟，观察有无凝集现象。

5、,BEA Confidential. | 15, 代表阳性结果；代表阴性结果；,【结果】,BEA Confidential. | 16,【注意事项】 1.载玻片必须清洁，做好记号。 2.用牙签两端分别搅拌。,BEA Confidential. | 17,BEA Confidential. | 18,【材料】 1.试剂：大肠杆菌诊断血清，大肠杆菌、变形杆菌24小时琼脂培养物，生理盐水。 2.器材：记号笔，载玻片等。,BEA Confidential. | 19,【方法】 .取清洁玻片一张，用蜡笔划为三格，并注明号码。无菌操作下，用接种环于第三格加12滴生理盐水，第一、二格内加大肠

6、杆菌诊断血清12滴。,1,2,3,BEA Confidential. | 20,.无菌操作下，用接种环取大肠杆菌培养物少许，混于第三格中，再混于第一格中，将细菌与盐水或血清混合均匀使呈乳状液（取菌量不可过多），使悬液呈轻度乳浊即可。,1,2,3,BEA Confidential. | 21,.同法取变形杆菌培养物少许，于第二格内混匀。,1,2,3,BEA Confidential. | 22,.轻轻摇动玻片，经12分钟后肉眼观察，出现乳白色凝集块者，即为阳性反应；仍为乳浊液者，即为阴性反应。,1,2,3,BEA Confidential. | 23,BEA Confidential.

7、 | 24,BEA Confidential. | 25,【方法】 1.选择适当的移液器: 不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围。 2.设定体积：设定体积时，由低旋转至高值，须先超越所欲设定值至少三分之一转后，再反转至设定值；由高旋转至低值，则直接转至设定值即可。勿超过最低或最高的使用范围。,BEA Confidential. | 26,3.吸取溶液：套上微量移液器头，将按钮压至第一档，尽可能保持微量移液器垂直，将微量移液器头尖端浸入溶液，再缓慢释放按钮。释放按钮不可太快，以免溶液冲入吸管柱内而腐蚀活塞。 4.释放溶液：将微量移液器头与容器壁接触，慢慢压下按钮至第一

8、档，停一两秒再压至第二档，把溶液完全压出。,BEA Confidential. | 27,A. 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一档； B.微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮； C.保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢慢压下按钮至第一档； D. 压至第二档把溶液完全释放出； E.释放按钮回原状。,BEA Confidential. | 28,【注意事项】 1 ）勿将微量移液器本体浸入溶液中。 2）吸取黏度高之试液，先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大，并先行预润后再吸取。 3）吸取酸液或具腐蚀性溶液后，将微量移液器拆解开，各部位零件以蒸馏水冲洗干净，擦干后再正

9、确组合回复原状。 4）微量移液器的任何部份切勿用火烧烤，亦不可吸取温度高于70的溶液，避免蒸气侵入腐蚀活塞。,BEA Confidential. | 29,5）套有微量移液器头的微量移液器，无论微量移液器头中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。 6）P5000 必须使用过滤头，过滤头潮湿即需更换。 7）若不小心使溶液进入吸管柱内时，应予以拆解，将活塞组件、吸管柱、O-ring、铁氟龙垫等各部位以清水冲洗干净后，再以酒精擦拭，擦干后再正确组合回复原状。 8）定期自行以天平检查准确度，若有任何问题请送厂维修。,BEA Confidential. | 30,BEA Confident

10、ial. | 31,【原理】用已知的颗粒性抗原悬液与经连续倍比稀释的待检血清混合，在适当条件下反应，观察有无凝集现象对血清抗体的存在做出判断；并结合凝集程度与血清稀释度判定血清抗体的效价，此法属于半定量试验。,BEA Confidential. | 32,【材料】 1.诊断菌液：伤寒沙门菌菌液 2.待检血清：伤寒沙门菌免疫血清 3.生理盐水 4.U型反应板、移液器、水浴箱等,BEA Confidential. | 33,【方法】 1.编号：取一块U型反应板，选8个连续的孔，依次编号。 2.加生理盐水：用移液器吸取生理盐水，第一孔加0.9ml，其余每孔各加0.5ml； 3.加血清

11、：用移液器吸取伤寒免疫血清0.1ml，加入1号孔，并吹吸3次，使血清与生理盐水充分混合。,BEA Confidential. | 34,4.倍比稀释：从1号孔中吸取0.5ml注入2号孔并混匀，以此类推直至7号孔，再从7号孔中吸取0.5ml弃去。 5.加抗原：移液器换吸头，吸取伤寒沙门氏菌菌液，从生理盐水孔开始，每孔各加入0.5ml伤寒菌液。 6.孵育：摇匀，置于37水浴箱中18-24h后观察结果。,BEA Confidential. | 35,1：20,1：40,1：80,1：160,1：320,1：640,1：1280,0.9ml,0.1ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml

12、,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,BEA Confidential. | 36,【结果观察】 .观察之前切勿摇动，以免凝集块分散。 .先观察对照孔，此孔应无凝集现象，孔内液体仍成混浊状态。但如放置时间较长，细菌堆于孔底成小圆点状，为阴性反应。,BEA Confidential. | 37,.试验孔应自第孔观察起，如有凝集时则于孔底有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物，上液则澄清透明或不同程度混浊。 “” 管内上液完全澄清，完全沉于孔底； “” 孔内上液不完全澄清，稍浑浊，凝

13、集物大部分沉于孔底； “” 上液体较浑浊，孔底仍有明显凝集； “” 孔内液体混浊，仅少量凝集块沉于孔底； “” 孔内液体和对照孔同样混浊，无凝集块。,BEA Confidential. | 38,4.记录观察的结果并判定凝集效价，通常以能产生明显凝集（）的血清最大稀释倍数作为该血清的凝集效价。如血清的最低稀释度（即第1管120）仍无凝集，应报该血清效价低于 120 。如血清的最高稀释度（即第7管11280）仍显完全凝集现象，应报该血清效价高于11280。,BEA Confidential. | 39,要写明班级、学号、姓名、实验日期实验一直接凝集试验一、实验目的二、实验项目（一）直接玻片凝集试验 1. 原理 2. 材料 3.方法及注意事项 4.结果及讨论（二）直接试管凝集试验 1. 原理 2. 材料 3.方法及注意事项 4.结果及讨论,实验报告的格式和要求,BEA Confidential. | 40,谢谢！,

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