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1、,全自动生化基本知识介绍 迈瑞检验销售工程师 Phone number: Email:,交流的大致内容,临床生物化学检测的基本知识 生化分析仪的发展概况 评价生化分析仪的常见指标 迈瑞生化分析仪的介绍 考试,血液的基本构成,血浆 白细胞血小板 红细胞,基础知识简介,血液概述,蛋白质/酶类 代谢底物类 糖类 脂类 无机离子类,什么是生物化学检验,临床生物化学检验是一门由分析化学、生物化学、分子生物学、计算机技术和临床医学等学科相互渗透结合逐渐形成的理论与实践性较强的的边缘学科，她的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为诊断疾病、病情监测
2、、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。,临床生化检验方法学的进展,1、生化分析技术已从光谱分析技术的肉眼比色法发展为 分光光度法、投射比浊法、散射比浊、原子吸收光谱法，火焰发射光谱法，分子荧光光谱法等。 2、生化自动化分析与酶法分析 3、临床生化诊断试剂盒 4、方法学上的高新技术含量 5、全面质量管理 6、分子生物学技术,什么是光谱分析技术,光谱分析技术是利用各种化学物质具有发射、吸收或散射光谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量的技术，分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术、散射光谱分析技术等。,吸收光谱分析法,吸收光谱是指波长连续分布的光透过物质时，某些波长的光被
3、物质吸收而产生的暗线或暗带组成的光谱，利用吸收光谱对物质进行定量的技术称为吸收光谱分析法，优点是简便、快速、线性范围较宽，应用广泛。,生化分析原理,Lamber-Beer定律,其中为摩尔吸光系数，C为溶液的浓度（mol/L）,L为吸收池的厚度（cm）,生化分析原理,朗伯-比尔定律的意义是：某溶液的吸光度A等于该物质的吸光系数、浓度C和光径L的乘积。当光径不变时，浓度和吸光度成正比，这是生化分析仪器进行定量测定的基础。,吸光度与透光度,当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透过溶液。 设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度（T
4、ransmittance，T）， TI I0， 透光度的负对数称为吸光度（Absorbance，A）， A=lg Tlg I I0lg I0I,在给定条件下吸光系数是表示物质特性的常数，不同物质对同一波长的单色光可有不同的吸光系数，因此可用于不同物质的鉴别。 在吸光度与浓度之间的直线关系中吸光系数是斜率，其值愈大测的灵敏度愈高。,15,生化仪常用分析方法,自动生化仪器分析方法,一、终点法 被测物质在反应过程中完全转变为产物，即达到反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物质的浓度，称为终点法。 1、一点终点法 在反应到达终点即时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值，这种方法称为一
5、点终点法。,17,两点终点法,在被测物反应或者指示反应尚未开始时，选择第一个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度，此两点吸光度之差用于计算结果，称为两点终点法,生化仪常用分析方法,18,二、固定时间法（fixed-time assay）,指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算。有时也称此法为两点法 。,生化仪常用分析方法,19,三、动力学法（Kinetic assay） 测定底物或产物随时间的变化量，又称速率法 E + S ES E + P,生化仪常用分析方法,20,酶促反应的线性期,1及5值偏小，而234，故A1
6、点至A4点属线性段 计算线性段A/min，此值与酶活性成正比。,生化仪常用分析方法,21,动力学法反应曲线（连续监测法）,A单试剂连续监测法 B 双试剂连续监测法,生化仪常用分析方法,生化仪常用分析方法,动力学方法也可用于测定呈线性反应的代谢物浓度，一般是某些基于酶法测定的代谢物，酶活性（U/L）=A/minK（理论或校准）其中K为 103TV/STd 式中代号为物质的毫摩尔消光系数 （ ）、反应液总容量（TV） 、样品容量（SV）和比色杯光径（d）采用理论K值的前提应当是样品和试剂的加量准确、比色杯光径准确、温度控制精确以及波长准等。 酶活性国际单位指在规定条件（规定温度，最适pH，最适底物
7、浓度）下，每分钟转化1mol底物的酶量，单位为IU/L,23,四. 透射比浊法,抗原与相应的抗体结合形成的免疫复合物，在反应液中具有一定的浊度，可由一般分光光度法进行透射比浊（transmission turbidimetry）测定，可用于某些蛋白质和药物浓度等的测定。 Ag + Ab AgAb,生化仪常用分析方法,24,分析参数（analysis paramete） 测试项目的分析参数是否可由用户增加、修改、和编辑，是开放系统与封闭系统最大区别。,生化仪分析方法参数设置,25,（一）常用分析参数,试验名称（test code） 方法类型（也称反应模式）(assay mode) 主波长（pri
8、mary wavelength） 次波长（secondary wavelength） 反应方向（response direction） 样品量（sampling volum） 第一试剂量 （first reagent volum） 第二试剂量（second reagent volum）,26,总反应容量（total reacting volum）一般180-550l。 孵育时间（incubate time） 延迟时间（delay time） 连续监测时间 （continuous monitoring time）一般为60120s，不少于4个吸光度检测点（3个吸光度变化值） 校准液（calibr
9、ator）个数及浓度 校准K值（calibrate coefficient）或理论K值 线性范围（linearity range） 小数点位数（decimal point digit）,27,单波长方式：采用一个波长检测物质吸光度的方式。 双波长方式：同时使用一个主波长和一个次波长检 测物质吸光度的方式。,（二）单波长和双波长,28,消除仪器背景噪音干扰; 消除试剂空白及副反应的干扰; 减少样品本身的干扰： 当样品中存在非化学反应的干扰物如甘油三酯、血红蛋白、胆红素等时，会产生非特异性的光吸收，双波长方式可以部分消除这类光吸收干扰。,双波长的优点,29,双波长法,2,1,Y 的存在不干扰 X
10、的测定,生化仪分析方法参数设置,30,次波长的选择等吸收点法,主波长：被测物质的最大吸收波长。 次波长：干扰物在主、次波长处有相同的吸光度，而被测物在主、次波长处的吸光度有较大的差异。,生化仪分析方法参数设置,31,A,生化仪分析方法参数设置,32,（三）单试剂和双试剂方式,单试剂：反应过程中只需一种试剂的方式。 双试剂：需两种试剂的方式。 双试剂方式分析的优点是： 提高试剂的保存稳定性； 消除样本中内源性化学反应干扰。,33,（四） 校准和质控,为什么要校准？,仪器的校准和质控,校准： 维持仪器的准确性 校准物溯源,质控： 检测可能存在的系统误差，保证重复性。 对操作者的理论及操作水平有较高
11、要求。,BIPM巴黎,保存在特殊的地点，用三层玻璃罩好，最外一层玻璃罩里抽成半真空，以防空气和杂质进入（10-9）,千克原器(铂铱合金),千克副原器（铂铱合金）,中国计量科学院 北京,质量测量工具,省市计量单位,生活和贸易,质 控,室内质控 室间质控 X-B 厂家质控 L-J 市级质控 X 省级质控 X-R 国家级质控,37,校准方式,生化仪分析方法参数设置,38,校 准 要 求,（1）选择合适（与仪器和试剂配套）的校准品 。 （2）如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质。 （3）确定校准的频度。 （4）如有下列情况发生时，必须进行校准： 改变试剂的种类或批号； 仪器进行一次大维护或者更换了
12、重要部件； 质控或临床样本反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限。,39,质控测定,40,准确度与精密度关系,41,临床生化检验仪器发展,比色法 目视比色 比色计 半自动生化仪 全自动生化仪 实验室自动化,比色计或分光光度计,半自动生化分析仪,全自动生化分析仪,自动生化分析仪在中国的发展分期,生化自动分析10个环节中已采用过的技术和方法,52,自动生化分析仪由电脑控制，将生化分析中的取样(sampling)、加试剂、混匀、保温反应、检测(detect)、结果计算、可靠性判断、显示和打印、以及清洗(cleanin等步骤组合在一起自动进行操作的分析仪器。,什么是全自动生化分析仪,53
13、,自动生化分析仪的作用,提高了临床生化检验速度和质量 减轻工作者的劳动强度 有利于临床检验标准化的实现 节约样品和试剂 增加检验项目,提供更多价值,54,自动生化分析仪类型,按其工作方式不同分为： 连续流动式(continuous streaming movement style) 或管道式，低端仪器采用 离心式(centrifugation style) ，已很少用 分立式(discrete style)，应用最广泛，主流机型 干式(drying style) ，急诊多用,(一) 流动式工作原理及特点,所有测试使用同一管道和比色池 速度慢、污染大、消耗大,(二) 离心式工作原理及特点,离心旋
14、转，同一批项目测试速度快 否则不同项目速度慢。无比浊法,简便、快捷、POCT（床旁检验） 成本贵、定量差,(三) 干式原理及特点,扩散,支持,显色,试剂,58,每个测试均在各自独立的反应杯内完成比色,分立式原理及特点,59,速度快、灵活，适合用户工作流程,(四) 分立式原理及特点,60,分立式生化分析仪的主要结构,分注机构 清洗系统 硬件 恒温系统 光学系统 生化仪 控制系统 软件(配套系统),61,如何评价生化仪性能,62,如何评价生化仪性能,63,机型（流动池、离心式、分立式、干式） 速度（加样周期、分注机构技术及数量、自动化程度） 检测能力（分析方法、结果判断） 检测结果的准确性和重复性
15、 检测成本（试剂用量、维护成本） 售后服务能力,主要评价指标,64,1加样/比色周期,取样/比色周期：每加一次样品试剂的时间或比色间隔时间。取样周期决定了分析仪的理论速度。,分析速度决定因素,65,2加样针、加试剂针数量,对于单针取样的分析仪，如取样周期为10s，理论上每60min可取样360次，则其工作速度为360测试/h；若取样周期为4.5s，则理论工作速度为800测试/h，依此类推。 只有一组加试剂装置的分析仪在做双试剂法测定时，加第二试剂也要占用一个取样周期，影响工作速度；如果有两组加试剂装置，因在另一试剂吸取位置添加第二试剂，所以工作速度不变。,分析速度决定因素,66,3一次能容纳的样品数量,一次同时能容纳的样品量也即批处理样品量，分析仪对每批样品进行测定的前后均有一个启动过程和停止过程，这两个过程各需要数分钟到十数分钟不等。因此，若批处理样品量大，则分析速度快。,分析速度决定因素,67,4一次放置试剂瓶数量及试剂瓶容量,试剂仓位置多和试剂瓶容量大，样本测试项目多时，不须中途停机更换缺乏的试剂。,分析速度决定因素,68,5反应比色杯数量,比色杯数量多，连续同步测试项目多，速度快。,分析速度决定因素,69,吸样精度：加样、加试剂 交叉污染：样品针、试剂针、搅拌棒、反应杯的
