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1、子宫颈湿疣的病理变化与人乳头状瘤病毒的检测中华妇产科杂志 1999年第6期第34卷 论著单位：100029 北京，中日友好医院妇产科(袁莉云，卞美璐)，病理科(罗杰，李挺)，临床医学研究所生化室(范慕贞)关键词：宫颈疾病；尖锐湿疣；乳头状瘤病毒；人【摘要】目的了解宫颈湿疣病理变化与人乳头状瘤病毒(HPV)亚型关系。方法对计算机辅助细胞检测(CCT)诊断的71例不典型鳞状细胞、65例低度鳞状上皮内病变、17例高度鳞状上皮内病变及5例鳞状上皮细胞癌患者，在阴道镜下行宫颈多点活体组织病理学检测，同时采用聚合酶链反应(PCR)技术对宫颈脱落细胞及分泌物进行HPV6/11、HPV16/18检测；对经病理
2、检查证实的宫颈湿疣中的凹空细胞分为型和型。结果73例宫颈湿疣中，型凹空细胞的HPV16/18感染率为86.0%，明显高于型凹空细胞的16.7%(P0.01)。含有型凹空细胞的低度鳞状上皮内病变中，HPV16/18感染率及病理性核分裂相发生率均为85.7%，明显高于型凹空细胞或单纯宫颈上皮内瘤变级(P0.01)。结论根据组织病理检查发现有型凹空细胞，可以推测存在HPV16/18感染。含有型凹空细胞的低度鳞状上皮内病变与HPV16/18感染密切相关，核异型性显著，伴病理性核分裂相，在病理诊断上具有重要意义。Relationship between Histopathologic Observati
3、on of Cervical Condyloma and Human Papillomavirus InfectionYUAN Liyun, BIAN Meilu, LUO Jie, et al. China-Japan Friendship Hospital,Beijing 100029【Abstract】ObjectiveTo study the relationship between histopathologic changes of cervical condyloma and different subtypes human papillomavirus (HPV) infect
4、ion.Methods158 women with abnormal Pap smears diagnosed by computer assisted cytologic technique (CCT) including 71 cases with atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS), 65 cases with low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), 17 cases with high-grade squamous intraepithel
5、ial lesions (HSIL) and 5 cases with squamous cancers, underwent directed biopsies under colposcopy and were simultaneously detected for HPV6/11, HPV16/18 DNA by polymerase chain reaction (PCR). Koilocytotisis in 73 cases with pathologically proven cervical condyloma were grouped into type and accord
6、ing to its atypical degree of nuclei.ResultsHPV16/18 infection rate among condylomas cases was 86.0%, which was significantly higher than that of type (16.7%) (P0.01). In LSIL with type koilocytotisis, HPV16/18 infection rate and abnormal mitotic figures (AMFs) occurrence were 85.7%, significantly h
7、igher than those in type koilocytotisis or cervical intraepithelial neoplasia .ConclusionsType koilocytotisis was correlated with HPV16/18 infection. LSIL with type koilocytotisises, distinct atypical nuclei, also associated with high HPV16/18 rate and AMFs, therefore treatment and follow-up should
8、be more aggressive.【Key words】Cervix diseasesCondylomata acuminataPapillomavirus, human大量的流行病学研究显示，宫颈湿疣、癌前病变、宫颈癌三者密切相关。宫颈湿疣多表现为扁平湿疣，常伴宫颈上皮内瘤变(CIN)。随着分子生物学技术的发展，目前已经克隆了70余种人乳头状瘤病毒(HPV)亚型，其中高危型HPV与宫颈癌的发生、发展密切相关。若能从病理改变区别HPV感染亚型，对患者的临床处理具有重要意义。国外一些学者从病理表现的不同角度对此作了研究，结论不一1，2。但尚未见从凹空细胞的异型程度来区别HPV感染亚型的研究。
9、本研究从凹空细胞的异型程度分析73例宫颈湿疣的病理特点，与聚合酶链反应(PCR)技术检测HPV亚型进行对比，探讨宫颈湿疣病理改变与高危型HPV感染的关系。资料和方法一、研究对象1996年9月至1998年2月，我院妇产科门诊行计算机辅助细胞检测(computer-assisted cytologic tech- nique, CCT)36 005例，结果异常的患者158例为本研究对象，包括71例不典型鳞状细胞(ASCUS)、65例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、17例高度鳞状上皮内病变(HSIL)及5例鳞状细胞癌，年龄2260岁，平均(339)岁。二、方法1.病理标本取材：对158名患者均在阴道
10、镜下行宫颈多点活检。活检组织用10%甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色。病理片由有经验的3位病理医生共同阅片，最后诊断。2.病理诊断标准：宫颈鳞状上皮非典型增生及原位癌以Richart的CIN 3级为诊断标准。宫颈尖锐湿疣病理表现为：表层过度角化，棘层细胞及基底层细胞增生，表皮呈乳头状增生、伸长向表面突起，中表层见灶性凹空细胞。宫颈扁平湿疣表皮增生、平坦，中表层散在或成片分布凹空细胞。宫颈湿疣表中层凹空细胞的特点是：核周胞浆空泡化，细胞边缘尚留带状胞浆，核大、深染、核结构不清、核形不规则，常伴双核、多核4。凹空细胞的核表现有两种形态。一种核增大，但不超过底层细胞核的1倍，核形不规则，染色深，结
11、构不清，可见双核，偶见病理性核分裂相(AMFs)，即以放大400倍为高倍视野，病理性核分裂相12个/5高倍视野(HPFs)，该种凹空细胞我们称之为型凹空细胞；另一种核为底层细胞核的23倍，可见双核、多核、畸形核或巨核，有的核结构清晰、可见核仁，有的染色质浓聚呈团块状，结构不清，核膜增厚，不连续；核浆比例失调；常有病理性核分裂相16个/5 HPFs，我们称之为型凹空细胞。宫颈湿疣伴CIN的病理特点4：CIN病变基础上表层及中层有HPV感染的特征性凹空细胞。3.HPV-DNA的检测：采用PCR方法。取患者宫颈脱落细胞和分泌物进行常规DNA提取。PCR反应管购自中山医科大学科技开发公司，扩增按下列条
12、件：变性94 45秒退火55 45秒延伸72 60秒，共35个循环，最后置于72保温5分钟。取10 l扩增产物，用8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳30分钟后，溴乙锭染色，紫外灯下观察照相。设PBR322/BSTN1作标记物，大小为438bp的扩增产物为HPV6/11阳性；294bp的扩增产物为HPV16/18阳性。HPV6/11引物1为5-GTGGGGGAACCTGTGC- CTGA-3，引物2为5-TGTACCATTTGGGGGAGGCG-3；HPV16/18引物1为5-TGGTGCCATGGACTTTAC- TACA3，引物2为5-TCAGAGGTAACCATAGAGC- CAC-3。三、统计学方
13、法采用2检验。结果一、病理检查结果158例中，73例为宫颈湿疣，其中单纯湿疣24例，宫颈湿疣伴CIN 49例，包括CIN 15例、CIN 20例、CIN 14例。见表1。表1158名患者活体组织病理检查结果(例数)类别总例 数炎症 增生鳞化单纯 宫颈湿疣CIN宫颈湿疣伴 CIN鳞状 细胞癌不典型鳞 状细胞7135762171030低度鳞状上皮内病变6519174126970高度鳞状上 皮内病变17400322132鳞状细胞癌5000000014二、宫颈湿疣凹空细胞类型分布73例宫颈湿疣中，2例为尖锐湿疣，71例为扁平湿疣。根据核形态的差异，凹空细胞为型的有30例(图1，2)，型的有43例(图3
14、6)。见表2。1型凹空细胞核增大,核形不规则、染色深、结构不清，偶见双核。HE3002宫颈扁平湿疣伴CIN，鳞状上皮增生、平坦，中表层可见型凹空细胞，基底层细胞轻度异型。HE1503型凹空细胞核增大、结构清晰，可见核仁，核膜不连续。HE3004型凹空细胞的畸形核。HE1505为图4中畸形核的放大().HE3006型凹空细胞,核为底层细胞核的2倍,可见双核、多核，伴病理性核分裂()。HE1507鳞状上皮基底层出现CIN，中表层可见型凹空细胞，伴病理性核分裂()。HE300表273例宫颈湿疣的病理形态类型与凹空细胞分型的关系(例数)类别总例数型凹空细胞型凹空细胞单纯湿疣24195湿疣伴CIN156
15、9湿疣伴CIN20515湿疣伴CIN14014三、凹空细胞与HPV亚型的关系30例含有型凹空细胞的宫颈湿疣病变中，5例HPV16/18阳性，占16.7%，6例HPV6/11阳性，占20.0%；43例含有型凹空细胞的宫颈湿疣病变中，37例HPV16/18阳性，占86.0%。见表3。表3凹空细胞类型与HPV亚型的关系(例数)凹空细胞类型总例数HPV6/11 (+)HPV16/18 (+)HPV6/11 HPV16/18(+)型30650型431325四、低度鳞状上皮内病变病理性核分裂相与HPV16/18感染的分布病理诊断为单纯宫颈湿疣、湿疣伴CIN和单纯CIN在TBS分类中归于低度鳞状上皮内病变，共有49例。25例含有
