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1、超氧自由基（O2-）的清除能力测定法（连苯三酚自氧化法）（适用于：SOD及各种抗氧化剂） 操作图解具体方法1 溶液配制1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA）40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。用pH计测量，pH应为7.4。
2、用棕色瓶保存在冰箱内 (最多保存三天) 。（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中）取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20L，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH2.5-3.0）。再往里加连苯三酚14.6 mg (M。W.126.1 )，即得。（当天有效,以上为1个样品的用量）。2 测试液2.1连苯三酚溶液：取2950L Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50L连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至3
3、00秒（5min）时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液）AA325nm,300s - A325nm,30s。由于A值反映了生成O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的A值必须相等。此时的A为A0。3.2 样品溶液：取xL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）L Tris-HCl缓冲液，再加50L连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液）AA325nm,300s - A325nm,30s。此时的A为A样。3 计算公式清除率(A0-A样)/A0 *1004 注意事项由于连苯三酚
4、自氧化反应对温度和pH值很敏感，而pH值又受温度的波动而变化。因此，实验过程中，要严格控制温度。缓冲液宜多，比色皿用3.5mL规格。这样数据才比较稳定。5 实验结果（以原儿茶酸为例） 采用文献1的改进方法，测原儿茶酸的O2-自由基的清除能力，结果如图2（pH7.4）。用旧方法，在pH8.2时测量，结果有很大误差，是不可取的。图2 原儿茶酸的O2-自由基的清除能力的对比（pH7.4 vs pH8.2）参考文献:1 Xican Li. Improved Pyrogallol Autoxidation Method: A Reliable and Cheap Superoxide-scavenging Assay Suitable for All Antioxidants. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, 60:6418-6424.致谢：本文由广州中医药大学李熙灿教授依据其发表的论文1，整理而成。2
