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1、裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究王舒楠，张伟国，陈金华，马长锁，赵丽(第三军医大学大坪医院野战外科研究所放射科，重庆 400042)摘要：目的 建立裸鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型并进行MR中英文全称扫描，摸索注意措辞！“摸索”不严谨、不科学扫描的最佳参数，探讨1.5T磁共振在检测裸鼠颅内成瘤的可行性这两句话说的是一个意思！，为下一步实验奠定基础无谓的文字，请删除。方法 SHG-44细胞传代培养后，用微量注射器吸取肿瘤细胞悬液直接穿刺接种，在肿瘤细胞接种后第15天行1.5T MR请与MRI统一扫描，裸鼠麻醉后置于小动物线圈采集图像并利用影像工作站测量体积。而后取脑组织做病理切片，计
2、算体积后行HE及CD34染色，与MRI？图像进行对比分析。结果 除去围手术期死亡2只裸鼠外，剩余的13只裸鼠在MR增强序列图像上均能见到肿瘤，成瘤率达100%，且位置同组织切片相一致。在MR图像上测得的肿瘤体积为（29.4110.95）mm3，组织切片测得的肿瘤体积为(26.579.70) mm3，二者无显著性差异（P0.05）但具有明显的相关性（r=0.985，P ？）。肿瘤微血管丰富，且主要集中在肿瘤的边缘。结论 采用微量注射器直接建立裸鼠胶质瘤原位移植瘤模型简单便捷，成瘤率高。1.5T磁共振能活体检测裸鼠脑胶质瘤成瘤情况，并能进行一定的功能成像，是动态监测裸鼠胶质瘤发生发展的有效途径。用
3、一句话简要说明 关键词：裸鼠；胶质瘤；磁共振成像；原位移植Estabilshment of human glioma orthotopic model in nude mice and monitored by 1.5T magnetic resonance imagingWang Shu-nan, Zhang Wei-guo,Chen Jin-hua, Ma Chang-suo, Zhao Li（Department of Radiology, Daping Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400042,
4、China）Abstract：Objective To establish the model of human glioma orthotopic implantation in nude mice， and investigate 1.5T magnetic resonance in the detection of transplanted tumor. Methods The glioma cell line SHG-44 was cultured in vivo. The glioma cells were injected into nude mice brain using mi
5、cro-syringe to form glioma. Fifteen days later, nude mice were scaned by 1.5T MR with animal-coil to detect the tumor. Tumor volume was measured in AW4.3 imaging workstation. Then take brain tissue biopsy done with HE staining and CD34 staining. Tumor volnme was measure under microsope to evaluated
6、the relativity with the dates in MR imagings. Results Two nude mice were dead in perioperative, the other thirteen mice survive and be detected tumor in bran by MR scanning with contrast injected. The location in MRI is consistent with that in tissue section. Tumor volume is 29.4110.95mm3 measured b
7、y MRI and is 26.579.70mm3 measured under microsope. There is no significant difference（P0.05）but significant correlation（r =0.985）. Conclusion It is easy and convenient using micro-syringe directly to establish the human glioma orthotopic implantation model in nude mice. 1.5T MR can detect the tumor
8、 in mouse brain in vivo, and to carry out certain functional imaging. 1.5T MR is an effective way to dynamic monitor the occurrence and development of glioma in nude mice.Key word：Nude mice；Glioma；Orthotopic implantation；Magnetic resonance imaging胶质瘤是脑内最常见、浸润性最强的一种原发性脑肿瘤，临床治疗效果差，病死率很高。提高其早期诊断准确率及寻找新
9、的治疗方案是目前研究的热点问题1。针对胶质瘤研究首要的一点是建立准确可靠的胶质瘤模型。脑原位移植瘤模型形成的胶质瘤生物学性质与人类注意语文语法：“脑原位移植瘤模型形成的胶质瘤生物学性质”如何与“人类”作比较？更接近，是一种理想的研究脑胶质瘤的生物学行为和治疗方法的实验工具，但不如皮下移植瘤易于观察文献？。目前国外多采用超高场磁共振（4.7T以上）进行小动物研究，而该设备在国内配备较少。本研究通过瘤细胞接种法建立脑胶质瘤原位模型，利用临床1.5T磁共振进行动态观察，摸索扫描的最佳参数，评价1.5T磁共振在检测裸鼠胶质瘤的可行性，为下一步以裸鼠胶质瘤模型为基础的实验研究奠定一定的基础整个前言逻辑性
10、、连贯性差，请重写！按照“本研究的学科大背景本研究（分支）小环境本研究要达到什么目的、解决什么问题”这样的内容和逻辑撰写前言。1材料与方法1.1 材料欠明确 DMEM高糖培养基（Gibco公司），优级胎牛血清（Hyclone公司），胰酶（Amresco公司），1.5T磁共振及线圈（美国GE公司），钆喷酸葡胺（广州康臣药业），CD34大鼠抗小鼠单克隆抗体（美国ABCam公司），DAB显色试剂盒（北京中杉）。1.2 细胞培养SGH-44细胞由西南医院病理科惠赠晕！，复苏后接种于10%胎牛血清DMEM高糖完全培养液(含双抗，3%谷氨酰胺及适量HEPES)中，单层培养法传代培养生长至所需的细胞数，在细
11、胞于对数生长期大约80%时，以0.25%胰酶消化，收集消化液离心后去除上清液，PBS液吹打冲洗2次后制成细胞悬液，调节细胞浓度为1106/6 l，置于37 水浴中待接种。苔盼蓝排斥实验检测细胞活力95%。接种的细胞量：1106 个/只。1.3 模型制作健康裸鼠(15只、雄性、45周龄，体质量1214g)购于大坪医院野战外科研究所实验动物中心，SPF级环境饲养。采用瘤细胞悬液接种法对所有裸鼠建立胶质瘤原位移植瘤模型：在超净工作台上，以1%戊巴比妥于裸鼠腹腔内注射(0.01 ml/g)分母换算为“1”麻醉后，用棉球蘸取少量乙醚置于裸鼠鼻前。常规消毒铺巾后确定进针位置(前卤前1 mm，右侧2.5 m
12、m处), 用50l微量注射器吸取6l瘤细胞悬液垂直、缓慢插入裸小鼠脑实质中，轻柔注射完毕后留针5 min，缓慢退针，消毒后放入SPF中英文全称环境中继续饲养。每天观察裸鼠的生长状态并记录。所有模型裸鼠于胶质瘤细胞接种后第15天进行MR？扫描。1.4 裸鼠胶质瘤模型MR扫描扫描前于腹腔内注射1%戊巴比妥麻醉裸鼠后，放入自制泡沫模具中以固定位置，置于GE小动物线圈内，在空隙中塞入棉花用于保温。定位后送入1.5T磁体中开始扫描。扫描序列及参数如下：T1WI序列：（TR：300；TE：10；FOV：88；矩阵：192160；NEX：6.00）；T2WI序列（TR：2760；TE：85.7；FOV：88
13、；矩阵：256192；NEX：2.00）；DTI序列：（TR：8000；TE：112.5/FE；FOV：2424；矩阵：192160；NEX：6.00）；增强序列：裸鼠腹腔注射增强剂后，在T1WI序列上行增强扫描。扫描冠状面、矢状面、横断面，完毕后将图像传送至AW4.3工作站进行图像分析与处理。肿瘤的大小采用在增强序列上测量肿瘤最大长径（L），宽径（W）和高径（H），计算肿瘤体积采用以下公式：V=LWH/2。1.5 病理学检测过量麻醉写清楚用药的名称（必须是化学名或通用名）、剂型、剂量、用法处死裸鼠后以生理盐水和4%多聚甲醛先后经左心室灌注，至肝脏变白，断颈取脑，置于4%多聚甲醛中固定24 h
14、以上。对以上取材的组织进行石蜡包埋，以3 m厚度由前向后连续切片，直至切至肿瘤最大层面，分别测量肿瘤长径和短径，根据公式a2b/2计算肿瘤体积。做HE染色观察肿瘤组织特征。用CD34染色观察肿瘤微血管，根据Weidner等2的方法计算肿瘤微血管密度密度（ 英文全称MVD）。1.6 统计学处理 计量资料用 s表示。采用SPSS 13.0版本进行统计学处理。先行方差齐性检验，组间比较采用配对t检验，方差不齐时采用t检验或秩和检验。评价MRI和组织切片所测得肿瘤体积大小采用Pearson简单相关分析，并计算相关系数。2结果2.1 裸鼠一般情况 共有15只裸鼠参与模型建立，其中2只裸鼠在接种过程中由于
15、进针太深，预计损伤裸鼠生命中枢部分而导致死亡，其余13只裸鼠顺利建立模型。胶质瘤细胞接种后一周内，裸鼠状态正常，体质量略有增加，体质量在1517g左右。接种一周后，部分裸鼠出现神经受压症状，表现为皮肤变干，行走不稳、下肢僵直、体质量减轻，随着时间的增加神经症状越为明显，极度萎靡，偏瘫进一步加重，到后期裸鼠体质量在1011g左右，裸鼠生存期为2029 d。2.2 裸鼠磁共振扫描 在T1加权像上，肿瘤与正常组织分辨不清。在T2加权像上，裸鼠大脑右侧脑室扩张，可见片状、条带状高信号水肿带，仅能分别出肿瘤的轮廓，呈等高信号。腹腔注射造影剂后，增强扫描肿瘤显示清楚，于右侧大脑内可见边界清楚地圆形或类圆形高信号影，同周围组织信号差异明显，肿瘤内坏死、囊变少见。DTI重建后见右侧大脑部分白质纤维素中断、缺失，其范围同肿瘤范围基本一致（图1）。13只裸鼠经MRI扫描后均能显示出肿瘤存在，成瘤率达100%。AB DCA：正常裸鼠T2加权像；B：荷瘤裸鼠T2加权像，见颅内脑室扩张，水肿明显图片格式修改，拟定一个总的图题，再分A、B、C、D，再分别对A、B、C、D进行标注。这类描述性文字放入文章结果当中描述，不要作为图题。图片题目应该简洁明了（定语+主语；主语+谓语）： 简要标注箭头所指内容；C：荷瘤裸鼠增强像，可见境界清楚地肿瘤，信号同周围组织差异明显（红箭）；D：荷
