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1、微生物的实验室培养,点此播放教学视频,点此播放教学视频,(1)根据你所掌握的知识，分析导致生产失败的根源是什么?,(2)由此可见，研究和应用微生物的前提是什么？,根源在于发酵物中混入了杂菌,防止杂菌入侵，获得纯净的培养物,点此播放教学视频,一、基础知识：,（一）培养基,（1）按物理状态分： （2）按功能分： （3）按成分分：,1.培养基的类型和用途,固体培养基和液体培养基,选择培养基和鉴别培养基,天然培养基和合成培养基,点此播放教学视频,固体培养基常用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。 液体培养基常用于发酵工业。,点此播放教学视频,选择
2、培养基：从微生物群中选择具有特定表型的细胞，使之进行繁殖所用的培养基。,加入青霉素：分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐：分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物,点此播放教学视频,天然培养基有血清、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好。 缺点：来源受限；成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。,根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定；成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完
3、全满足体外细胞生长需要。,合成培养基,天然培养基,点此播放教学视频,2.培养基内所含的基本物质,(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机盐,点此播放教学视频,?,思考1,从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么一般都含有水、碳源、氮源和无机盐这些营养成分？,C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97以上。,点此播放教学视频,(1)pH值 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性 (2)特殊营养物质 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素 (3)氧气的含量 如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件,3.培养基内所需的其他条件,点此播放教学视频,(二)无菌技术,1
4、、获得纯净培养物的关键: 2、无菌技术包括的四个方面(自学) 3、消毒与灭菌 (1)消毒： 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。 方法: 煮沸消毒法 巴氏消毒法：如牛奶的消毒 化学药剂消毒：酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 紫外线消毒,防止外来杂菌的入侵,点此播放教学视频,（2）灭菌,概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌,灼烧灭菌,微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧,注意适用范围,点此播放教学视频,干热灭菌
5、160170 ；12h,能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿),高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15-30min,通常用于培养基的灭菌,点此播放教学视频,思考2,无菌技术除了用来防止实验室的培养物被污染外，还有什么目的？,?,还能有效避免操作者自身被微生物感染,点此播放教学视频,二、实验操作,1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）,步骤：计算称量溶化灭菌倒平板,点此播放教学视频,?,思考3,溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热? 加琼脂的目的是什么?,可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能 溶于水中,减少误差,作为凝固剂,点此播放教学视频,思考4,在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有
6、培养基的锥形瓶的目的是什么？ 培养皿能否用高压蒸汽灭菌？,?,在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞； 在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用,不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌,点此播放教学视频,倒平板,点此播放教学视频,问题讨论,1、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,讨论1：,2、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,3、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,点此播放教学视频,2、平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水
7、珠落入培养基，造成污染。,3、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,1、通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,点此播放教学视频,2、纯化大肠杆菌,最常用的是：平板划线法和稀释涂布平板法,平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。,微生物的接种技术,点此播放教学视频,平板划线操作,点此播放教学视频,点此播放教学视频,单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，
8、叫做菌落。,每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。,特征：,大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。,功能：,定义：,细菌的菌落,点此播放教学视频,形态各异的菌落,点此播放教学视频,平板划线时不能划破培养基，为什么？,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,点此播放教学视频,问题讨论,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,3.在作第二次以及其
9、后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,讨论2：,点此播放教学视频,2、以免接种环温度太高，杀死菌种。,3、划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,点此播放教学视频,稀释涂布平板法,点此播放教学视频,涂布平板操作,讨论3：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想想，第2步应如何进行无菌操作？,提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。,点此播
10、放教学视频,（三）微生物的恒温培养：,将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录,点此播放教学视频,三、课题成果评价,培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同,（一）培养基的制作是否合格,如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。,（三）是否进行了及时细致
11、的观察与记录,点此播放教学视频,菌种的保存：,1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法。,四、课题延伸,点此播放教学视频,本课题知识小结,微生物的实验室培养,培养基,无菌技术,制备牛肉蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌,结果分析与评价,培养基的类型,培养基的营养物质,避免杂菌污染的方法,实验室常用的消毒方法,实验室常用的灭菌方法,平板划线法,稀释涂布法,（步骤）,点此播放教学视频,【典例精析】,【例1】关微生物营养物质的叙述中，正确的 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能
12、量,解析：对于A、B选项，有的碳源只能是碳源，如CO2；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。 对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如CO2 ，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。 对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。,D,类型一 微生物的营养要素,点此播放教学视频,【例2】下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前,B
13、,解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A是正确的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他杂菌； B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物； C、D是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；而灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。,类型二 无菌技术,点此播放教学视频,【例3】右表是某微生物培养基成分，请据此回答（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。（2）若除去成分，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。,自养型微生物,类型三 制备培养基,固氮微生物,点此播放教学视频,（3）不论何种培养基，
14、在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。 （4）右表中各成分重量确定的原则是 。 （5）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分 。,调整pH,依微生物的生长需要确定,琼脂（或凝固剂）,点此播放教学视频,下课了,点此播放教学视频,操作的第一步：灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前：灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落； 划线结束后：灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,back,点此播放教学视频,
