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1、実験一酸蛋白質性質【実験目的】1. 蛋白質性質知識身2. 酸蛋白質定性、定量方法原理学一、蛋白質呈色反応蛋白質呈色反応、蛋白質酸特殊構造有色物質形成反応、一定条件下試薬必要。蛋白質分子異蛋白質中含酸残基異、呈色反応異。、呈色反応質特異的反応、蛋白質物質中含官能基（例-CS-NH、-CH2-NH2、-CRH-NH2、-CHOH-CH2NH2）、蛋白質同様反応。、私呈色反応結果蛋白質判断難。（一）反応【実験原理】尿素180度加熱、2分子尿素1分子放出、分子縮合。、性条件下銅(Cu2+)錯体形成赤紫色呈。反応反応呼。反応過程以下示。蛋白質分子構造中多結合含。構造分子基同様構造。、性条件下銅赤紫色呈色
2、反応起。反応過程以下示。【試薬】1. 蛋白質溶液（10倍蒸留水希釈、2-3層濾過卵白）2. 0.1%溶液3. 0.01%溶液4. 10%NaOH溶液5. 1%CuSO4溶液6. 尿素結晶【実験操作】1. 準備少量尿素結晶取(先程度大)。乾燥試験管中入加熱。尿素融解、再硬化加熱。硬化時直加熱停止。時、形成。冷却後、10%水酸化溶液約1ml加振蕩。更1%硫酸銅溶液2滴加振蕩、色変化観察。注意：a.操作過程中試験管先端人向b.加熱時間注意2. 反応観察試験管4本用意、下表通各試薬加、変化観察説明。表1.試薬番号1234蛋白質溶液（ml）1.00.01%溶液（ml）1.00.1%溶液（ml）1.010
3、%NaOH（ml）2.02.02.02.0蒸留水（ml）1.01%CuSO4溶液（滴）2222現象（二）反応【実験原理】弱酸性条件下（pH5-7）、蛋白質酸加熱、青紫色化合物生成。反応蛋白質酸(酸例黄色化合物生成)共通。基含他化合物反応起。【試薬】1. 蛋白質溶液：（反応同）2. 0.1溶液：（反応同）3. 0.2溶液【実験操作】試験管2本用意、蛋白質溶液01溶液1ml別試験管加。試験管溶液0.5ml加混合。沸騰水浴数分加熱、現象観察、結果記録原因説明。（三）反応【実験原理】蛋白質溶液濃硝酸加加熱黄色沈殿生、溶液加橙黄色。蛋白質中環側鎖酸（例、）環化。多数蛋白質分子環含酸持、黄色反応発生。化、
4、少量濃硫酸加黄色化合物発生。反応過程以下示。【試薬】1. 蛋白質溶液：（反応同）2. 濃硝酸3. 20NaOH溶液4. 0.1%石炭酸溶液（）【実験操作】1. 1%石炭酸溶液約1ml試験管内分注。濃硝酸5滴加、水浴加熱、結果観察。20NaOH溶液加、色変化観察。2. 試験管1本蛋白質溶液1ml濃硝酸5滴加。沈殿物確認後、加熱（沸騰必要）。沈殿物黄色確認、冷却後、20NaOH溶液加、色変化観察。結果記録、現象説明。（四）坂口反応【実験原理】性蛋白質溶液-次亜臭素酸加赤色。、過剰次亜臭素酸生成色素酸化退色。、尿素過剰次亜臭素酸分解、生成色素安定保退色遅。反応蛋白質中検出反応。、含蛋白質定性検出含量
5、測定。、N置換誘導体反応。反応過程以下示。【試薬】1 蛋白質溶液：（反応同）2 次亜臭素酸3 10%NaOH溶液4 0.2%-溶液5 0.01% 溶液【実験操作】1 試験管蛋白質溶液1ml分注。10%NaOH溶液0.5ml加、更0.2%-2滴混合。後、次亜臭素酸溶液2滴、現象観察。2 試験管0.01%溶液1ml分注、上述操作現象観察二、蛋白質沈殿反応蛋白質親水性。蛋白質安定因子破壊時、蛋白質試薬結合溶塩時、溶液中沈殿。現象蛋白質沈殿反応。（一）蛋白質塩析作用【実験原理】塩析蛋白質溶液多量中性塩類加溶解度減少、蛋白質沈殿生現象。塩析作用2種類要素関係。第一多量電解質加、電解質親水粒子周水分子奪取
6、。第二顆粒表面電荷中和。結果、粒子集沈殿。蛋白質塩析作用可逆的。、塩析蛋白質沈殿際、蛋白質変性。、沈殿蛋白質透析水希釈再溶解。必要中性塩濃度、蛋白質種類pH関係。分子量大蛋白質()小蛋白質() 塩析。【試薬】1 蛋白質溶液：（反応同）2. 硫酸（固体）3. 10NaOH溶液4. 1%CuSO4溶液【実験操作】1 試験管蛋白質溶液約2ml分注、硫酸粉末加。硫酸飽和溶解加。時溶液色乳白色。後、濾紙使濾過。2 濾液取反応、濾液中蛋白質存在確認。 3 蛋白質沈殿1ml蒸留水溶解後反応、塩析蛋白質再水溶解変性引起証明。（二）重金属類沈殿反応【実験原理】溶液pH蛋白質等電点以上時、重金属塩類(例Pb2+、
7、Cu2+、Hg2+Ag+)蛋白質結合、水不溶性塩類沈殿。重金属塩類蛋白質完全沈殿。、重金属塩類液体中蛋白質取除用。、重金属塩(CuSO4PbAc)、過剰量加沈殿物再溶解注意。【試薬】1. 蛋白質溶液：（反応同）2. 5CuSO4溶液3. 3AgNO3溶液【実験操作】1 試験管2本、蛋白質溶液1ml分注。2 2-3滴5CuSO4溶液、3AgNO3溶液加、形成沈殿物観察。3 硫酸銅生成沈殿物少量沈殿物残別試験管移。試験管残少量沈殿物5CuSO4溶液加、沈殿物溶解観察。（三）試薬沈殿反応【実験原理】植物中窒素含著生理作用持性物質。一般沈殿、作用有色反応生成物生試薬称。例酸、酸。蛋白質溶液pH値等電点
8、低時、蛋白質陽、試薬陰結合中性塩沈殿生。、溶液中蛋白質含基作用沈殿。、特酢酸用最鋭敏作用、蛋白質沈殿用。【試薬】1. 蛋白質溶液：（反応同）2. 10酢酸溶液3. 20酸溶液【実験操作】1. 試験管蛋白質溶液1ml分注、数滴酢酸溶液加現象観察。2. 試験管蛋白質溶液1ml分注、数滴酸溶液加現象観察。（四）加熱沈殿蛋白質【実験原理】大多数蛋白質加熱、安定性喪失立体構造破壊、変性凝固。温度上昇従蛋白質熱変性加速、短時間加熱凝固引起。加熱時、溶液中塩存在H蛋白質凝固対大影響与。、等電点状態蛋白質加熱最迅速完全凝固。強酸、強溶液中、蛋白質分子電荷持加熱凝固。、溶液中中性塩存在、蛋白質加熱凝固。【試薬】1. 蛋白質溶液：（反応同)2. 1酢酸溶液3. 10酢酸溶液4. 10NaOH溶液5. 飽和塩化溶液【実験操作】試験管4本用意、下表従各種試薬加。混合試験管観察。続、沸騰水浴中10分加熱。、試験管沈殿物状態比較観察。番溶液蛋白質等電点接近、最不安定最早沈殿。次第4番沈殿。番3番強酸性性、蛋白質電荷持、加熱沈殿。確認後、2番飽和塩化溶液加、直白色沈殿物現。表2.試薬番号1234蛋白質溶液(ml)1.01.01.01.01%酢酸，滴110% 酢酸，滴1010% NaOH，滴
