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1、第十五章 目标产品的蛋白质分析检测技术及质量控制,基因工程产品的鉴定,美国食品与药品管理局的要求： 分子量,溶解度,等电点,氨基酸序列,肽谱,二硫键配对,糖脂电泳图谱,二级结构,三级结构,与内源性物质的关系,受体的分布和结合等。,一、蛋白质含量和纯度,含量:mg/ml, mg/g材料 纯度:每单位重量样品中目标蛋白质占总蛋白的比例.是一个相对指标,可用百分比表示.一般指是否含有杂蛋白,而不包括是否含有盐、离子等小分子的物质。纯度等级可分为95%，99%和99.9%等。,蛋白质含量和纯度测定方法,含量测定:凯氏定氮法、TCA比浊法、双缩脲法、福林-酚法、紫外线法和考马斯亮兰法（Bradford法
2、）。 纯度衡量:电泳法、层析法、质谱法等。 一般应采用二种以上方法鉴定纯度，而且同一原理的方法不应该采用二次。,五种蛋白质测定方法比较,氨基酸分析,柱后反应法：将游离氨基酸经过色谱柱分离后，氨基酸再与显示剂（茚三酮、荧光胺、邻苯二甲醛）作用。 柱前衍生法：将各种氨基酸和荧光试剂先生成氨基酸衍生物，然后再用柱把各种衍生物分开。,蛋白质的分子量测定,超离心法 光散射方法 凝胶过滤法（测完整蛋白质分子） SDS-PAGE电泳法（测亚基） 较新的方法：毛细管电泳、质谱,等电聚焦法,测定蛋白质的等电点 鉴定蛋白质的纯度,肽谱,指蛋白质被酶解或化学降解后肽段的分离分析或制备。,蛋白质突变点分析,天然蛋白质和突变蛋白质肽谱的比较 荧光标记Cys; 同位素标记法； 紫外吸收法,二硫键分析,同位素标记 化学修饰 直接分析二硫键的异构物 质谱定位二硫键,蛋白质的序列测定,测定蛋白质的一级结构方法： 蛋白质化学法：（Edman降解法测定N端和羧肽酶或化学法测定C端） cDNA演译法 质谱法 二维核磁共振,试分析影响蛋白质在电场中行为的主要因素? 什么叫蛋白纯度?如何测量蛋白质纯度?,
