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1、生物传感器概述及应用,一、概述,传感器（sensor，transducer） 能感受规定的被测量并按照一定的规律转换成可用输出信号的器件或装置，它通常由敏感元件和转换元件组成。,按检测对象划分,传感器,物理传感器,化学传感器,生物传感器,感受器为非生命物质,感受器为生命物质,二、生物传感器定义,生物传感器是以固定化的生物材料作为敏感元件，与适当的转换元件结合所构成的一类传感器。,酶具有识别特定分子的能力,1962年， L.C.Clark,酶与电极结合起来测定酶的底物,生物传感器是用生物成分作为感受器的传感器。,固定化葡萄糖氧化酶（GOD）氧电极,葡萄糖电极,1967年，Updike和Hicks
2、,第一个酶电极,使用溶解性酶，难重复,1956, L.C. Clark : oxygen electrode 1962, L.C. Clark : biosensor concept (electrochemical sensor + enzyme transducers as membrane = enzyme electrode),oxygen electrode enzyme electrode,三、生物传感器原理,酶 辅酶 维生素 抗原 抗体,生物功能膜（酶、微生物、细胞器、组织、细胞、抗原、抗体）,待测物质,扩散作用,固定化生物敏感膜层,分子识别,生物学反应,电信号,换能器,（一）生
3、物分子特异性识别（生物感受器）,生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。,生物传感器的分子识别元件,（二）信号转换与处理,生物传感器的信号处理方法,将识别元件上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为可用信号，并呈现一定的比例关系。,换能器感知固定化配基与待测物结合产生的微小变化，其质量好坏决定了传感器的灵敏度。,感受器是生物传感器的心脏。制备分两方面工作，一是选择最佳载体材料（需活化）；二是在载体表面固定化亲和配基（非共价和共价）,（三）生物传感器分子识别机理,1、酶促反应 2、免疫化学反应 3、生物反应中的物理量变化 4、微生物反应,1
4、、酶促反应,E + S ES E + P,2、免疫化学反应,抗体Ab 抗原Ag,3、微生物反应,微生物,呼吸或代谢,产生一些 电活性物质,消耗溶液中的溶解氧,检测,（1）热焓变化 根据热力学第二定律，一个能自发进行的反应，总伴随着自由能的降低。 GHTS 酶促反应和微生物反应常常释放出可观的热量，根据焓变可定量测定底物的浓度。,4、生物学反应中的物理量变化,（2）生物发光 生物发光是由于某些生物体内的一些特殊物质（如荧光素）的氧化而产生的现象。,FMNH(OOH) E+RCHOFMN+RCO2H+E+H2O+h,细菌发光其强度取决于积累的还原型FMN的量。,FMNH2+E+O2 FMNH(OO
5、H) E,（3）颜色反应,生物体内产生色素,酶与底物作用后产生有颜色物质,培养基中的电惰性物质,电活性产物,微生物代谢,培养液的导电性增大，阻抗降低,（4）阻抗变化,五、生物传感器的种类：,（）按照生物敏感物质相互作用的类型分类（）按照其感受器中所采用的生命物质分类 （）按照传感器器件检测的原理分类,六、生物传感器特点,(1)测定过程简单。生物传感器使用时一般不需要样品的预处理，样品中的被测组分的分离和检测同时完成，且测定时一般不需加入其它试剂。 (2)体积小、携带方便，可实现连续检测、在线检测。 (3)响应快，样品用量少，敏感材料是固定化的，看反复多次使用。 (4)准确度和灵敏度高。一般相对
6、误差不超过1。 (5)专一性强，只对特定的底物起反应，而且不受颜色、浊度的影响。 (6)成本低。,七、生物传感器应用领域,1、食品工业 生物传感器在食品分析中的应用包括食品成分、食品添加剂、有害毒物及食品鲜度等的测定分析。,食品鲜度 鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内ATP经酶解依次形成ADP、AMP、IMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用K值表示：,鱼死后520h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP-肌苷-次黄嘌呤-尿酸。 将这三个步骤的三种酶（5核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。 当K20时
7、，鱼极新鲜，可供生食。 K在2040之间为新鲜，必须熟食。 K大于40，不新鲜，不宜食用。,肉鲜度传感器,肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。 用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。,污染微生物及病原菌的检测,1 通过免疫学方法，即获得相应的特异性抗原和抗体进行分析和检测。,(1)将适宜的酶与抗原或抗体结合在一起。制成酶标抗体（或酶标抗原 ）； (2)将酶标抗体（或酶标抗原）与样品中的待测抗原（或抗体）混合，通过免疫反应二者即可特异性地结合在一起，形成酶抗体抗原复合物。 (3)通过酶催化反应的速
8、度即可测定复合物中酶的含量，进而测出样品中的待测抗原（或抗体）的量。,酶联免疫测定,2、环境监测,德国研发的环境废水BOD分析仪,3、发酵工业 微生物传感器具有成本低、设备简单、不受发酵液混浊程度的限制、可能消除发酵过程中干扰物质的干扰等特点。 微生物传感器可用于测量发酵工业中的原材料和代谢产物。还用于微生物细胞数目的测定。利用这种电化学微生物细胞数传感器可以实现菌体浓度连续、在线的测定。,生物传感在线分析系统，为发酵自动控制提供了新的基础平台,发酵罐,主机,计算机,4、医学领域 在临床医学中，酶电极是最早研制且应用最多的一种传感器。利用具有不同生物特性的微生物代替酶，可制成微生物传感器。在军
9、事医学中，对生物毒素的及时快速检测是防御生物武器的有效措施。生物传感器已应用于监测多种细菌、病毒及其毒素。,SBA-50型单电极生物传感分析仪,谷氨酸(乳酸)-葡萄糖双功能分析仪,SBA-70型血糖乳酸自动分析仪,手掌型葡萄糖(glucose)分析仪,班氏尿糖估计法确定胰岛素用量,在葡萄糖传感器问世之前，患者需采用所谓“班氏试验尿糖估计法”来指导胰岛素注射量。这一方法相当烦琐，需备酒精灯一个、试管一支、吸管一支、班氏剂一瓶。每次注射胰岛素前，取班氏试剂2毫升放入试管中，置酒精灯上烧开，开后试剂保持蓝色不变，说明试剂有效，加入病人尿液3滴，再置酒精灯上烧开，根据试剂的变色情况决定胰岛素用量的增减.,葡萄糖传感器传感器的响应原理: 葡萄糖氧化酶（GOD）参与的酶促反应,用电化学葡萄糖传感器测定人体血糖,装置由三部分组成：血糖传感器、供药泵、胰岛素药源。传感器、泵与病人的血液三者构成一个闭环控制系统（图）。传感器将测定的信号变为对供药泵开启与关闭的指令，使糖尿病病人能像正常人一样保持最恰当的血糖含量,
