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1、质量管理 文件编号：病毒检测标准操作规程文件名：干细胞病毒检测标准操作规程文件编号：制定人：日期： 年 月 日文件类型：工作标准审核人：日期： 年 月 日版 次：第一版批准人：日期： 年 月 日印 数：共5份生效日期： 年 月 日颁发部门：质量管理分发至： 质量副总经理、质量管理部、QC检验室、综合办公室变更记载修订号修订人批准日期生效日期原 因 及 目 的1 目的 制定外源病毒检测标准操作规范，确保公司角膜基质细胞检测的规范性。2 范围干细胞产品。3 职责 干细胞质检操作人应严格执行此操作规程。4 程序4.1 主要试剂人抗人类免疫缺陷病毒抗体（HIV）ELISA检测试剂盒、人乙型肝炎病毒（H
2、BV）ELISA检测试剂盒、人丙型肝炎病毒（HCV）ELISA检测试剂盒、人抗人类疱疹病毒抗体（EBV）ELISA检测试剂盒、人巨细胞病毒（CMV）ELISA检测试剂盒4.2试验步骤4.2.1样品的处理：取客户血液上清1ml或细胞培养液1mL，3000rpm离心20min，收集上清。4.2.2从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4。4.2.3设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50L。4.2.4待测样本孔加待测样本50L。4.2.5随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100L，用封板膜封住反
3、应孔，37水浴锅或恒温箱温育60min。4.2.6弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。4.2.7每孔加入底物A、B各50L，37避光孵育15min。4.2.8每孔加入终止液50L，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。4.2.9计算和结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值1.00；阴性对照平均值0.15 临界值（CUT OFF）计算：临界值阴性对照孔平均值0.15 阴性判定：样品OD值 临界值（CUT OFF）者为阴性 阳性判定：样品OD值临界值（CUT OFF）者为阳性4.3 注意事项4.3.1五种病毒检测的方法稍有
4、差别，详细方法请参见各试剂盒的说明书。4.3.2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡20min后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。4.3.3洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4.3.4封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。4.3.5由于样本内可能潜在存有病毒。因此实验过程中一定要做好防护措施。4.3.6 填写外源病毒检测操作批记录。（附件1）Appendix1 附件1 外源病毒灭活检测批记录1、操作日期： 年 月 日 2、操作内容：（1）登记和查看样品信息样品批次：样品数量：检测信息检测项目：HIV HBV HCV EBV CMV试验有效性： 是 否试验结果： 阳性 阴性临界值：操作人：_ 复核人：_第 4页 /共 4页
