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1、血红蛋白电泳操作及常见血红蛋白电泳图谱,血红蛋白的结构,血红蛋白是由4条多肽链（2对）和4个可以结合铁和氧气的血红素组成,血红素：铁原子与原卟啉复合物。 珠蛋白：包括、和 珠蛋白6种。 在人体的不同发育时期，其主要的血红蛋白（Hb）组成不同。常见的有：HbA(22), HbA2(22), HbF(22), HbH(4), Hb Barts(4),血红蛋白电泳的检测,一、原理：Hb中的珠蛋白和其他蛋白质一样为两性电解质，在不同的缓冲液中可带正或负电荷，在电场中向阴极或阳极移动，由于不同的蛋白质之间其等电点、分子大小、形态及所带电荷不同，其移动速率不同（电泳迁移率不同），在一定的支持介质中可借以分
2、离。 二、仪器：Helena BioSciences SAS-3样本分析系统(英国海伦娜生物科学) 三、操作： （一）血红蛋白液的制取 1、取一份红细胞（或全血）加十份生理盐水洗涤，3000转/分钟离心5分钟，弃盐水 2、洗涤三次后，弃盐水 3、按压积红细胞体积加等体积蒸馏水，摇匀，再加1/2体积的四氯化碳震荡1-3分钟，3000转/分钟离心5分钟，吸取上层血红蛋白溶液（此浓度约为10%）待用 （二）仪器操作 1、开机 2、吸取30ul血红蛋白溶液加入样本盘 3、取两片点样刀锋放在自动加样器2，14号位，点样的时候把梳子从14号的位置跳至12号位置 4、电泳槽内加界面液（3100） 5、揭掉电
3、泳片表面的保护膜，放入电泳片，避免气泡，擦掉四周多余液 6、用BLOTC吸去电泳片上多作的缓冲液 7、放好碳棒，盖好盖子，按下箭头选择“”为测试项目再按“START”进入程序再按“Enter”开始电泳，约18分钟，仪器示警，按“STOP”结束操作，打开盖子，铲掉盐桥 8、将电泳片放在染色架上，放入染色槽中，按下箭头选择“START”为测试项目约15分钟，仪器示警，表示已完成操作，按下“STOP”结束操作 9、拿出电泳片即可扫描,正常的血红蛋白电泳带,正常成人：HbA(22): 94.5%-98.5% HbF(22): 1% HbA2(22): 2.5%-3.5%,正常新生儿：HbA(22):
4、12%-40% HbF(22): 6%-93% HbA2(22):0.1%-1.0%,-地中海贫血,-地中海贫血是由于珠蛋白基因缺失或功能缺陷导致珠蛋白链合成受到部分或完全抑制的遗传性溶血性贫血。-珠蛋白基因定位于16号染色体短臂最末端，如果缺失两个连锁的基因（-/）称为-地贫1，如果缺失一个（-/）称为地贫2，基因突变导致珠蛋白合成减少统称为非缺失型地贫，一般临床常见的地中海贫血分为以下四种 一、静止型-地中海贫血 二、轻型-地中海贫血 三、HbH病 四、Hb Barts胎儿水肿综合征,一、静止型-地中海贫血,静止型-地中海贫血为-地贫2杂合子（ - /） HbA2和HbF正常 ,红细胞形态
5、正常，新生儿期可出现1%-3% Hb Barts,出生后3个月消失。,二、轻型-地中海贫血,轻型-地中海贫血为-地贫1杂合子（/-）或者-地贫2杂合子（-/-），HbA2含量为正常的低限（1.5%-2.5%）， HbF正常，红细胞形态出现轻度异常（如大小不等，中央淡染区扩大，异形等），新生儿期Hb Barts可达5%-8%，6个月完全消失,三、HbH病,HbH病为地贫1与地贫2双重杂合子（-/-），或为地贫1与非缺型地贫双重杂合子（T/-）仅可合成少量的肽链，肽链太多，形成四聚体4， 4四聚体极不稳定，容易解聚成单体，氧化变性形成H包涵体，附着在红细胞膜上，使红细胞变形性降低，容易遭到破坏产生
6、溶血。 HbH明显增高（ 2.5%-40% ）， HbA2及HbF含量正常。,四、Hb Barts胎儿水肿综合征,Hb Barts胎儿水肿综合征为-地贫1纯合子，由于4个珠蛋白基因完全缺失，完全不能合成珠蛋白肽链，不能形成胎儿血红蛋白HbF （22），相对多的肽链形成四聚体4，称为Hb Barts，基因型为（-/-） Hb Barts80%，无HbA，HbA2和HbF,-地中海贫血,是由于球蛋白链合成减少或完全不能合成所致。完全不能合成珠蛋白链的基因称为0，合成减少的称为+.临床上通常将地中海贫血分为以下四种类型： 一、重型 二、轻型 三、中间型 四、-地中海贫血合并异常HbE,一、重型-地中
7、海贫血,重型-地中海贫血基因型（0 /0 或+/+或0/+ ），肽链几乎不能合成或者合成很少以致无HbA或量很低，HbF比率升高。由于肽链合成受抑制，体的肽链相对过多，结果游离的肽链在红细胞膜上沉淀，改变细胞膜的通透性，引起溶血反应。,二、轻型-地中海贫血,轻型-地中海贫血的基因型为:0 /或+/,这类患者还可以合成相当量的肽链，HbA2增高和/或HbF增高,三、中间型-地中海贫血,中间型-地中海贫血通常是某些-地中海贫血变异型号杂合子，表现常与重型相类似,四、-地中海贫血合并异常HbE,-地中海贫血合并异常HbE为地贫伴基因异常突变， HbE是基因第26位密码子碱基置换后由GAA,突变后为AAA,形成26谷 赖与肽链结合形成HbE，分为重型-地中海贫血合并异常HbE和轻型-地中海贫血合并异常HbE,异常Hb病,常见有HbJ, HbK, HbG和HbD,谢谢大家！,
