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1、免疫的临床应用,第一节 免疫学诊断,一、抗原或抗体的检测 抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。 抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检 测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。 免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。,（一）、抗原-抗体反应的特点,1、特异性：抗原-抗体的结合是特异性结合,2、可逆行：抗原抗体结合是分子表面的非 共价键结合,3、可见性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例密切相关,抗原抗体比例对反应现象的影响,（二）、抗原-抗体反应受多种 因素影响,1 电解质：
2、抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液 ，以供给适应浓度的电解质。 2 温度：一般常使用反应在37度水浴 或孵育箱中进行。 3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度 为PH68。,抗原-抗体反应受多种因素影响,（三）、常见的抗原抗体反应类型,1、凝集反应(Agglutination) 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象，称为凝聚反应。,（1）、直接凝集反应： 将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。 （2）、间接凝集反应： 将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。,血 球 凝 集,（3）
3、、间接凝集抑制试验,2、沉淀反应 （Precipitation),血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。,(1)、单向免疫扩散 (Single Immunodiffusion),是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。,含抗体的凝胶,沉淀环,（2
4、）、双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion),是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性 、组成和两种抗原相关性分析的检测。,3、免疫标记技术,用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变抗体（或抗原）的免疫学特性，同时标记物的性质依然存在，因而极大的提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。免疫标记技术主要有三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶技
5、术和同位素标记技术。,（1）、免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence Technique),是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，FITC) 与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。 包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。,直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。 间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加
6、。 补体结合免疫荧光法：此法是在间接法的第一步抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3抗体进行示踪。,间接免疫荧光法示意图,免疫荧光显微技术,（2）、酶免疫测定 (Enzyme Immunoassay, EIA),是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，HRP和碱性磷酸酶，AP) 标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体， 后者测定组织中或细胞表面的抗原。,酶联免疫吸附试验 (Enzyme Linked Immunosorb
7、ent Assay, ELISA),是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法BAS-ELISA等。,ELISA 检测抗体,（3）、放射免疫测定法 (Radioimmunoassay, RIA),是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使检测的敏感性达pg水平。常用于标记的放射性核素有I125和I131。常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的测定。,放射免疫测定法(RIA)示意图,二、 淋巴细胞 的测定,检测各群体淋巴细胞的数量
8、与功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。,（一）、免疫细胞数量检测,1、T细胞数量检测 （1）、花结试验：E花结试验可用于检测T细胞数目。70%-80% 2、B细胞数量检测 （2）、EA花结试验可用于检测B细胞数目。8%-15%,花结试验示意图,（二）、免疫细胞功能检测1、T细胞功能测定,体外法 ：T细胞增殖试验 形态学检查 3H-TdR掺入法 MTT法 体内法 ： 用生物抗原或化学抗原作皮内试验。 OT-PPD皮试 SD-SK皮试,淋巴细胞转化试验 （形态学示意图）,原理：人T细胞表面有PHA
9、或ConA受体，T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。,淋巴细胞增殖3H-TdR掺入法,原理：将单个核细胞中加入PHA共同培养，在终止培养前815小时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR), 经-液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA的3H-TdR掺入量，推测淋巴细胞增殖的程度。,淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图,细胞毒试验（51Cr释放法）示意图,第二节 免疫学防治,提 要 免疫预防有人工主动免疫和人工被动免疫。人工自动免疫是人为地给机体注射含有具有抗原性的物质（疫苗），使机体主动产生特异性免疫力；人工被动免疫是直
10、接给机体注射抗原特异性抗体等，使机体被动获得特异性抵抗力。,一、人工主动免疫 1、 死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。 2、 减毒活疫苗：是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。 3、 类 毒 素：细菌外毒素经甲醛处理后，失去毒性而保留其免疫原性即为类毒素。常用的类毒素有破伤风类毒素、白喉类毒素等。,4、新型疫苗,亚单位疫苗 提取病原微生物中的有效抗原成分，制成疫苗。 基因工程疫苗 利用基因工程技术，将编码有效抗原的目的基因与载体重组后导入宿主细胞，随宿主细胞的增殖，目的基因表达大量的有效的抗原成分。,死疫苗和活疫苗的比较,二、人工被动免疫 是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染疾病。人工被动免疫力维持的时间短，约23周。常用制剂有： 抗毒素 人免疫球蛋白制剂 细胞因子制剂 单抗/基因工程抗体,三、过继免疫,给患者转输能继续扩增的效应细胞的一种治疗方法。如：骨髓移植、LAK细胞法。,四、计划免疫,根据某些特定传染病的疫情监测和人群免疫状态分析，按照规定的程序有计划地进行人群预防接种，以提高人群免疫水平，达到控制以至消灭相应的传染病的重要措施。,
