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1、广东药学院硕士学位论文卡维地洛对映体在经不同诱导剂诱导的人肝细胞中的代谢特征姓名：蒋卉申请学位级别：硕士专业：药剂学指导教师：陈一岳20070601卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征中文摘要卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征硕士研究生：蒋卉导师：陈一岳教授摘要研究背景手性药物在所有药物中占有相当大的比例，据统计，天然或半合成药物几乎都有手性，化学合成药物至少有40 %为手性药物，然而其中90 %是以外消旋体形式给药，从立体化学的角度看，实际上给予的并不是单一物质，而是两种或多种立体构象上不同的药物。这是因为手性是生物系统的基本特征，人体就是一种高度复杂的手性环境
2、，构成机体的大分子物质如酶、载体、受体、血浆蛋白等都具有手性特征。因此手性药物作用于机体后，对映体与这些大分子物质结合，形成不同性质的非对映体复合物，呈现作用机制和结合力的差别，从而导致手性药物的体内立体选择性特征，即对映异构体在生物环境中表现出药物效应和药代动力学性质方面的特异性，包括药物效应的种类和强度，药物的吸收、分布、代谢、排泄等方面立体选择性的差异。因此，在临床治疗中，我们要结合考虑手性药物各对映体的药物动力学性质、效能、毒副反应，以及各种影响对映体选择性的因素，从而制定出合理的临床用药方案,以达到最佳的疗效。治疗个体化是近年来的重点和热点，阐明药物代谢的关键酶及其代谢途径，将减少临
3、床按经验调整药物治疗方案和剂量的盲目性，真正实现临床用药的合理化和个体化。在机体内，物质代谢主要是在肝脏进行的，肝细胞色素 P450氧化酶系(cytochromeP450，CYP450)是肝脏中重要的混合功能氧化酶系，对许多内源、外源性化合物在体内的生物转化有重要作用，在药理学和毒理学研究中有极其重-卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征中文摘要要的意义。P450氧化酶系是由多个同工酶组成的基因超家族，其中参与内源性和外源性物质（包括药物、杀虫剂、环境污染物等）代谢的 CYP450主要有 CYP1A、2A6、2B6、2C、2D6、2E1和 3A，分别占 P450总量的 13、4、0
4、.2%、20、120、7和 30。卡维地洛为一新型具有多种药理活性的抗高血压药物，它在临床上通常也以外消旋体给药，但据报道其对映异构体在药理学活性和药代动力学方面有较大差别，目前，国内尚没有关于卡维地洛对映异构体的代谢差异这方面的文献报道，国外早期有人做过 CYP2D6和 CYP3A4这两种酶的代谢产物和立体选择性差异。因此本文选用肝细胞体外温孵法，以萘黄酮(BNF)和异烟肼(INH)分别诱导人肝细胞作为CYP1A1和CYP2E1组成的酶源，并以未经诱导的人肝细胞作空白对照，研究卡维地洛R(+)和S (-)两种对映体体外代谢的酶动力学变化,探讨在不同的酶源亚族中卡维地洛对映体代谢的差异和立体选
5、择性，从而可深层次地认识一些药物相互作用的机制，并积极预测一些药物相互作用的发生，为临床合理用药提供依据。本研究包括二部分，分述如下。-卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征中文摘要第一部分柱前衍生化法测定肝细胞培养液中卡维地洛对映体目的建立人肝细胞培养液中卡维地洛消旋体的手性拆分方法，以研究卡维地洛体外代谢的立体选择性方法选用GITC为柱前衍生化试剂，反相高效液相色谱法检测，色谱柱：KromasilC18柱(4.6 mm 150 mm，5 m)；流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钠（25:75），磷酸调PH至4.3；流速：1.0 ml/min；进样量：10L；使用荧光检测器
6、检测，激发波长：285 nm，发射波长：340 nm。结果完全拆分了卡维地洛对映体，分离度为3.2，定量限为0.068mg/L，平均日间和日内精密度都10结论该方法分离效果好，方法学结果满意，可用于卡维地洛体外代谢的立体选择性的研究-卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征中文摘要第二部分卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征目的通过肝细胞体外温孵法，以BNF和INH分别诱导人肝细胞作为由不同亚族CYP1A1和CYP2E1组成的酶源，并以未经诱导的人肝细胞作空白对照，研究卡维地洛两种对映体体外代谢的酶动力学变化，为临床合理用药提供依据。方法1分别以 7-乙氧基试卤灵(7-
7、ER)和氯唑沙宗为底物，测定 CYP1A1和 CYP2E1的活性变化，以确定 BNF诱导 CYP1A1和 INF诱导 CYP2E1的最佳浓度2建立 HPLC法测定卡维地洛含量的方法学3测定在 BNF和 INF的诱导下，以及不经诱导时卡维地洛的酶动力学参数4分别测定不同时间点时经 BNF和 INF的诱导以及不经诱导空白对照的卡维地洛的剩余浓度，建立底物浓度-反应时间曲线结果和结论空白对照组中肝细胞是对 S(-)对映体有立体选择性的；同时结果显示 CYP1A1对两对映体并无立体选择性，但较明显增加了对 R(+)对映体的代谢；CYP2E1同样对 S(-)对映体具有选择性。关键词卡维地洛对映体肝细胞细
8、胞色素 P450酶药代动力学酶动力学代谢-卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征英文摘要Metabolic characteristics of carvedilol enantiomers in the cytochromeP450 of human hepatocytes treated with different inducersMaster of Science Candidate: Jiang HuiSupervisor: Professor Chen Yi-yueGuangdong Pharmaceutical UniversityAbstractChiral dru
9、gs extensively exist in the all kinds of drugs. According to the previousstudies, natural and semisynthetic drugs are almost chiral drugs and many syntheticdrugs, at least 40 percent, are also chiral drugs. However, 90 percent of them are usedas raceme in clinical practice. In fact, the enantiomers
10、of chiral drug have obviousstereoselectivity in vivo, which therefore make their notable different properties in theprocesses of absorption, distribution, metabolism and elimination. This phenomenonis regarded as the stereoselectivity in pharmacokinetics. So, it is important andnecessary for the pat
11、ientshealth to clarify the metabolic characteristics of differentenantiomers of chiral drugs.In vivo, drug and xenobiotic metabolism occur mainly in liver. While all ofcytochrome P450, the large family of mixed function oxidases, are the key enzymeswhich involved in the phase I metabolism of a varie
12、ty of chemically diversesubstances ranging from endogenous compounds to xenobiotics. Cytochrome P450sconsist of many members, in which CYP1A, 2A6, 2B6, 2C, 2D6, 2E1and 3A are themost important. The specific P450 enzyme(s) involved in the biotransformation of adrug can show the specific characteristi
13、c of drugs in pharmacokinetic behavior, anddrug interactions can occur by competing the same P450, by which the drugsadministered simultaneously are oxidated. Pharmacokinetic and clinical issues mayalso occur in individuals who are deficient in a specific P450 enzyme. So cytochromeP450s play central
