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1、华中科技大学硕士学位论文低分子量硫酸葡聚糖抑制异种移植超急性排斥反应的研究姓名：徐婧申请学位级别：硕士专业：免疫学（移植免疫）指导教师：陈实20070401华中科技大学硕士学位论文低分子量硫酸葡聚糖抑制异种移植超急性排斥反应的研究中文摘要第一部分低分子量硫酸葡聚糖抑制人补体系统活性的研究目的研究不同浓度分子量为 5000 的低分子量硫酸葡聚糖（DXS）对人补系统活性的抑制作用。方法根据 DXS 的浓度不同分为 5个实验组，DXS浓度分别为 0.1mg/ml,0.5mg/ml, 1mg/ml, 2mg/ml 和 4mg/ml，不含 DXS 组作为对照。CH50 法检测含有不同终浓度 DXS 的人
2、血清的补体活性，MTT 比色法测定含不同终浓度 DXS 的人血清对猪内皮细胞杀伤率，免疫荧光法检测猪内皮细胞表面补体 C3 和 IgM、IgG 抗体沉积。结果 DXS 可以抑制人血清补体活性，抑制人血清对猪内皮细胞的毒性作用，剂量越大，抑制率越高, 细胞表面补体 C3抗体沉积越少，IgM、IgG 抗体沉积没有明显差异。结论低分子量硫酸葡聚糖能有效抑制人补体系统活性关键词硫酸葡聚糖; 猪；内皮细胞;补体1华中科技大学硕士学位论文第二部分低分子量硫酸葡聚糖抑制人补体介导的异种移植超急性排斥反应的研究目的研究分子量为 5000 的低分子量硫酸葡聚糖（DXS）抑制人补体激活而抑制异种抑制超急性排斥反应
3、的发生。方法建立 balbc 小鼠心脏体外灌注模型，用含 DXS 终浓度分别为0.1mg/ml(n=8)，2.0mg/ml(n=9)的 10人血清灌注液进行灌注，以不含 DXS 的人血清组为对照(n=7)，研究低分子量硫酸葡聚糖抑制人补体激活从而抑制人补体介导的超急性排斥反应.结果心脏搏动时间对照组（n=7），0.1mg/ml 组(n=7)和 2.0mg/ml 组（n=7）分别为 1711min， 4915min 和 12319min，含 DXS 组心脏搏动时间明显长于对照组（Dunnetts T 检验，P0.01）;免疫荧光及免疫酶染色显示 2.0mg/ml 组心脏内补体 C3c,C5b-9
4、 沉积较对照组明显减少。结论低分子量硫酸葡聚糖能有效抑制人补体激活从而抑制补体介导的超急性排斥反应发生。关键词硫酸葡聚糖; 小鼠; 血液体外灌注;补体2华中科技大学硕士学位论文Effect of low molecular weight dextran sulfate on hyper acuterejection in xenotransplantationPart Low molecular weight dextran sulfate inhibits humancomplement activityObjective To investigate the effect of low-m
5、olecular weight dextran sulfate (DXS,molecular weight 5000) on human complement activityMethods CH50 test was chosen to test the complement activity of the pooled normalhuman B-type serum in addition of different concentration of DXS (0.1mg/ml, 0.5mg/ml,1mg/ml, 2mg/ml, 4mg/ml). MTT test was chosen t
6、o evaluate the cytotoxicity of humanserum in addition of different concentration of DXS against PEC. Human serum withoutDXS served as control. Immunoflurescence staining was chosen to detect the depositionof complement C3c and anti-human IgM、IgG antibodies on the PEC surface.Results DXS dose-depende
7、ntly inhibit the human serum complement activity and inhibitthe cytotoxity of human serum against PEC. Compared to the control group, complementC3c deposition on the PEC surface were decreased. Significant differences of anti-humanIgM、IgG antibodies deposition could not be detected.Conclusion Low-mo
8、lecular weight dextran sulfate could effectively inhibit the humancomplement activity.Key Words Low-molecular weight dextran sulfate; Porcine; Endothelial cell;Complement3华中科技大学硕士学位论文PartLow molecular weight dextran sulfate preventhyperacute rejection in xenotransplantation modelObjective To investi
9、gate the effect of low-molecular weight dextran sulfate (DXS,molecular weight 5000)on human complement activation and prevent hyperacute rejectionin ex vivo human serum perfusion model.Methods The hearts of balbc mice were isolated and perfused with 10% pooled humanserum of B type to which 0.1mg/ml
10、or 2 mg/ml DXS were added. 10% pooled humanserum without DXS were served as control proup. Heart beating was monitored andimmunoflurescence staining and immunohistochemistry were chosen to detect thedeposition of complement C3c、C5b-9.Results In the ex vivo perfusion experiment, the mean survival tim
11、e of hearts perfusedwithout DXS was 1711min. Addition of DXS prolonged heart survival to 4915min for0.1mg/ml and 12319min for 2mg/ml. The deposition of complement C3c、C5b-9 weresignificantly decreased in experimental group.Conclusion Low-molecular weight dextran sulfate effectively inhibits the comp
12、lementactivity and prevent the hyperacute rejection in xenotransplantation.KeyWordsLow-molecularweightdextransulfate;Complement;Mouse;Hemoperfusion4华中科技大学硕士学位论文前言20世纪以来，由于器官移植技术、移植免疫基础研究以及各种免疫抑制剂的开发运用，器官移植已成为临床治疗器官功能衰竭的有效治疗手段。而供移植器官的严重短缺成为阻碍其发展的最大的问题,如何增加供体来源成为当前普遍关注的焦点.面对这样的挑战,跨物种的异种移植可能是解决器官移植领域供体
13、短缺的手段之一。异种器官移植面临的主要问题是由于供受体间的种属差异引起的超急性排斥反应（HAR）。在HAR的发生过程中，受者体内预存的天然异种抗体特异地与供者移植物的异种抗原结合形成抗原-抗体复合物，进而激活补体导致移植物损伤。补体系统的活化是超急性排斥反应发生的重要环节。目前抑制补体介导的异种HAR主要有两种方法，一是应用高纯度眼睛蛇毒因子（CVF）或者可溶性补体受体I消耗补体，二是利用转基因技术使异种移植器官内皮细胞表达受者（人）源性补体调节蛋白如CD46,CD55, CD59以抑制受者补体活化，从而抑制HAR的发生。对分子量为 5000 的低分子量硫酸葡聚糖（dextran sulfat
14、e，DXS）的研究源于对内皮细胞的研究。在生理状态下内皮细胞表面被覆一层硫酸肝素蛋白聚糖（HSPG），对内皮细胞抗炎、抗凝等功能有重要作用。分子量为 5000 的 DXS是 HSPG类似物，属于硫酸葡聚糖胺糖家族。有报道指出 DXS可以抑制补体活化的三条途径：可以通过增强 C1抑制物作用，抑制补体 C3,C4从而抑制补体经典激活途径；通过与 H因子结合位点相互作用从而阻断补体活化旁路途径；此外 DXS对补体活化 MBL途径亦有抑制作用。本实验第一部分通过检测含不通浓度 DXS 的人血清补体活性，观察了 DXS 对人补体活性的抑制作用;通过检测含不通浓度 DXS 的人血清对猪内皮细胞的毒性作用，以不含 DXS 的正常人血清为对照，进一步观察了 DXS
