药物检测中的常见问题及最新解决方案

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1、2015 Waters Corporation 1 药物检测中的常见问题及最新解决方案 王志英 Waters应用工程师 13817876853 zhiying_ 2015 Waters Corporation 3 药物检测中常遇到的问题 如何开发高效可靠的液相分离方法？ -有关物质检测、含量检测 杂质是什么？ -申报资料中要求对杂质进行全面的研究 基因毒性杂质？ -哪些是基因毒性杂质、如何检测并控制 如何加快溶出度测定的效率 -批次多，样品量大，数据后处理繁琐 2015 Waters Corporation 4 药物检测中常遇到的问题 如何开发高效可靠的液相分离方法？ -有关物质检测、含量检测

2、 杂质是什么？ -申报资料中要求对杂质进行全面的研究 基因毒性杂质？ -哪些是基因毒性杂质、如何检测并控制 如何加快溶出度测定的效率 -批次多，样品量大，数据后处理繁琐 2015 Waters Corporation 5 举例 注射用阿洛西林 中国药典中采用方法为磷酸盐等度法，但经实践发现，用含量较低的产品做有 关物质测定，其纯度仍很高，也就是其有关物质方法未能完全检测其中杂质。 min051015202530354045 mAU 0 5 10 15 20 25 VWD1 A, Wavelength=210 nm (LJMALXL11040002.D) 2 .2 0 0 2 .9 5 4 3

3、.1 5 1 3 .4 2 1 4 .1 0 7 6 .0 3 9 7 .9 0 3 1 0 .3 5 2 1 3 .3 2 8 2 1 .9 4 4 2 3 .9 1 3 2 5 .1 0 8 3 7 .3 4 5 4 4 .2 5 8 C18（4.6150mm，5m） 2015 Waters Corporation 6 举例 注射用阿洛西林 经客户进行初步改进，方法如下： 时间（分钟） MPA(20mmol甲 酸铵) MPB(ACN) 0.00 90 10.0 5.00 90 10.0 30.00 80 20.0 40.00 70 30.0 41.00 60 40.0 50.00 60 4

4、0.0 51.00 90 10.0 65.00 90 10.0 色谱柱：Waters Xselect HSS PFP 3.0*100mm，2.5um, 流动相：甲酸铵 溶液（pH6.5）乙腈，流速： 0.2ml/min， 检测波长：210nm. m in01 02 03 04 05 06 0 m A U - 7 5 - 5 0 - 2 5 0 2 5 5 0 7 5 1 0 0 1 2 5 V W D 1 A , W a v e le n g th = 2 1 0 n m ( L J M 2 0 1 3 L J M 2 0 1 3 - 1 2 - 0 4 1 3 - 2 5 - 5 7 A L

5、 X L 0 0 0 0 0 2 .D ) 4 .5 6 5 5 .1 3 0 5 .5 4 0 5 .9 0 2 6 .3 5 8 8 .4 6 5 1 2 .7 1 6 1 7 .6 8 4 1 8 .5 2 1 1 9 .5 6 5 2 2 .1 2 3 2 2 .8 6 2 2 5 .5 2 6 3 4 .8 5 9 3 6 .9 6 9 3 9 .7 6 7 4 0 .0 4 6 4 0 .8 4 1 4 2 .7 3 0 4 3 .2 7 1 4 4 .9 8 7 4 6 .5 3 8 Xselect HSS PFP 3.0*100mm，2.5um *客户希望：1，基线更好些；2，

6、杂质 分离更好些；3，对杂质进行进一步鉴定 2015 Waters Corporation 7 举例 使用UPLC色谱柱改进检测方法 流动相： A:10mM 甲酸铵/水 B：8mM 甲酸铵/（乙腈/水=200/50）色谱柱： UPLC BEH C18 1.7 m，2.1100cm;流速：0.43ml/min;梯度洗脱 UV 210nm 谱图 一级总离子流图 2015 Waters Corporation 8 举例 使用UPLC色谱柱改进检测方法 BEH C18 （2.1100cm,1.7 m） m in01 02 03 04 05 06 0 m A U -7 5 -5 0 -2 5 0 2 5

7、 5 0 7 5 1 0 0 1 2 5 V W D 1 A , W a v e le n g th = 2 1 0 n m (L J M 2 0 1 3 L J M 2 0 1 3 -1 2 -0 4 1 3 -2 5 -5 7 A L X L 0 0 0 0 0 2 .D ) 4 .5 6 5 5 .1 3 0 5 .5 4 0 5 .9 0 2 6 .3 5 8 8 .4 6 5 1 2 .7 1 6 1 7 .6 8 4 1 8 .5 2 1 1 9 .5 6 5 2 2 .1 2 3 2 2 .8 6 2 2 5 .5 2 6 3 4 .8 5 9 3 6 .9 6 9 3 9 .7

8、 6 7 4 0 .0 4 6 4 0 .8 4 1 4 2 .7 3 0 4 3 .2 7 1 4 4 .9 8 7 4 6 .5 3 8 min051015202530354045 mAU 0 5 10 15 20 25 VWD1 A, Wavelength=210 nm (LJMALXL11040002.D) 2 .2 0 0 2 .9 5 4 3 .1 5 1 3 .4 2 1 4 .1 0 7 6 .0 3 9 7 .9 0 3 1 0 .3 5 2 1 3 .3 2 8 2 1 .9 4 4 2 3 .9 1 3 2 5 .1 0 8 3 7 .3 4 5 4 4 .2 5 8 C

9、18（4.6150mm,5m） Xselect HSS PFP （3.0*100mm,2.5um） 2015 Waters Corporation 9 UPLC-亚二微米粒径色谱柱 HPLC 3.5，5um粒径色谱柱 UPLC 亚二微米粒径色谱柱 峰容量 灵敏度 分离度 速度 2015 Waters Corporation 10 举例2 阿维菌素的分离 UV chromatogram from customer UV chromatogram by UPLC 从分离效果来看，和客户给的谱图分离基本相当，或者说略好，但分析时间大大缩短。 Agilent poroshell 120 EC-C18

10、（1504.6mm，2.7m） BEH C18（100*2.1mm, 1.7m) 2015 Waters Corporation 11 举例3 注射用蒿甲醚 HSS T3(100*2.1mm,1.8 m) C18 (250*4.6mm,5.0 m) 2015 Waters Corporation 12 举例4 头孢地尼 药典方法，离子对试剂流动相， C18（4.6150mm， 5m）；梯度洗脱 乙酸铵体系流动相， CSH C18（100*2.1mm, 1.7m) ；梯度洗脱 2015 Waters Corporation 13 QbD准则和DoE方法学自动科学地进行方法开发 Fusion AE

11、软件、Empower软件 2015 Waters Corporation 14 QbD准则和DoE方法学自动科学地进行方法开发 Fusion AE软件、Empower软件 传统的方式传统的方式 Fusion + ACQUITY UPLC AU 0.000 0.010 0.020 0.030 0.040 0.050 0.060 0.070 Minutes 1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.00 AU -0.005 0.000 0.005 0.010 0.

12、015 0.020 0.025 0.030 0.035 0.040 Minutes 1.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00 1.591 2.229 2.833 3.286 3.733 4.125 4.310 4.482 4.594 Imp A - 4.738 Imp B - 4.947 API 1 - 5.189 API 2 - 5.661 Lastpeak - 6.128 5 m粒径色谱柱 10几根色谱柱 等度的和梯度的方法 不同的梯度变化 流动相的组成 1.7-1.8 m粒径色谱柱 3根色谱柱 不同梯度系统 流动相的组成 不

13、同的pH值 泵的流速 2015 Waters Corporation 15 UPLC & HPLC 系统成本对比表 15% 2015 Waters Corporation 16 药物检测中常遇到的问题 如何开发高效可靠的液相分离方法？ -有关物质检测、含量检测 使用亚二微米色谱柱、UPLC 系统、Fusion AE自动方法开发软件 杂质是什么？ -申报资料中要求对杂质进行全面的研究 基因毒性杂质？ -哪些是基因毒性杂质、如何检测并控制 如何加快溶出度测定的效率 -批次多，样品量大，数据后处理繁琐 2015 Waters Corporation 17 药物检测中常遇到的问题 如何开发高效可靠的液

14、相分离方法？ -有关物质检测、含量检测 使用亚二微米色谱柱、UPLC 系统、Fusion AE自动方法开发软件 杂质是什么？ -申报资料中要求对杂质进行全面的研究 基因毒性杂质？ -哪些是基因毒性杂质、如何检测并控制 如何加快溶出度测定的效率 -批次多，样品量大，数据后处理繁琐 2015 Waters Corporation 18 杂质是什么？如何快速鉴定？ 杂质多，鉴定时日长，且需较强专业背景 流动相为不挥发盐，与质谱不兼容 2015 Waters Corporation 19 杂质鉴定所用仪器及软件-目前最新最先进 Xevo G2-XS QTof Time of Flight Mass S

15、pectrometer (TOF)原理： 离子质量越大，到达检测器时间越长 离子质量越小，到达接收器时间越短 2015 Waters Corporation 20 保证采集数据的准确性保证采集数据的准确性 IntelliStart自动校正质量轴，保证质量轴的准确性 自动化操作，使用简单方便，两三分钟即可完成 Waters LockSpray专利技术 外标校正实现内标校正的效果 2015 Waters Corporation 22 在宽浓度范围内的准确分子质量 -0.3 ppm 0.7 ppm 0.8 ppm 0.1 ppm 0.1 ppm M-C5H3NO2S Ritonavir M-2H O

16、H M+O M-2H-C5H3NO2S S S OHO O O O NH NH NHN N N S OHO O NH NH2 NHN N S OHO O NH NH2 NHN N S S OHO O O O NH NH NHN N N S S OHO O O O NH NH NHN N N 2015 Waters Corporation 23 一针进样同时获得母离子及碎片离子的高分辨、 高质量精确数据； MSE由“低碰撞能”与“高碰撞能”两种扫描 交替构成，分别记录母离子及碎片信息； 其中包括了母离子扫描、子离子扫描和中性丢 失扫描的结果，并且避免了杂质信号的丢失； MSE 数据采集技术 2015 Waters Corpor