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1、生物技术实践微生物的培养与应用31、进入冬季，部分城市出现严重雾霾，与秸秆野外焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力。缓解环境污染。试分析并回答有关问题：（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中_在细胞结构上与其他两者不同。（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将_分解为_。（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列_，从而得到单个菌落, 再采用_方法进行鉴定，得到右图的菌落。那么，图中降解纤维素能力最强的菌株是_(填图中
2、序号)。（4）图中所示培养基从物理状态上看，属于_培养基。2、豆浆是人们喜爱的食品之一，很多家庭自制豆浆作早餐食品，为了检测自制豆浆中细菌含量，做如下图所示操作。回答下列有关问题：（1）在接种前，常常随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。（2）为了对自制豆浆中细菌进行计数，应采用的接种方法是_。采用这种方法接种培养时，取最终的豆浆稀释液0.1mL滴在平板培养基上，操作前一般用_法对接种工具进行灭菌。（3）用上述方法接种、培养后统计4个培养皿，菌落数分别为25个、31个、33个、35个，则可以推测每毫升自制豆浆中含细菌数为_个。该结果往往较实际值偏小，原因是_。3、水中细
3、菌总数可以作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。在水质卫生学检验中，细菌总数是指1mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，经37、24h培养后，所生长出的菌菌落数。为初步测定某处池水中的细菌数目，实验的大致流程为：回答下列问题： （1）对采集的池水进行梯度稀释时，应先将1mL水样加入_中以获得稀释10倍的稀释液。实验中对采集的池水要进行稀释的原因是_。（2）接种培养所用到培养基中，能为细菌同时提供碳源和氮源的物质是_。（3）为保证菌落计数结果准确，一般选择菌落数在_的平板进行计数。用这种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低，原因是_。（4）实验过程中为确保培养基上菌落来自所采集水样，避免杂菌
4、污染。实验中需要注意的具体操作有_（至少答2点）。4、聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料,科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：（1）实验小组欲从土壤中获取PET降解菌,需将土壤样品置于_为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是_。（2）该实验小组选取PET浓度为800mgL-1的富集液进行系列稀释，分别取10-3、10-4和10-5倍数的稀释液0.1 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为（286、298、297)，(35、32、31),(36、7、2),不适合用于计数的为_
5、倍数的稀释液,用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是_。（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是_。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是_。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时,须从上一次划线的末端开始划线，原因是_。（4）在保藏PET降解菌菌种时，可采取_的方法进行长期保存。5、微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。请分析回
6、答：(1)土壤有_之称，该类微生物应取自_的土壤。(2)用于筛选和纯化该类微生物的培养基从功能上讲属于_培养基。对培养基进行灭菌，常用的方法是_。(3)接种后，必须密封培养，其原因是_。培养一段时间后，在培养基上形成降油圈，此时选取降油圈_的菌落作为高效菌株。(4)扩大培养过程中需要对微生物进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为_个/mL。该统计结果_（低于/高于）实际值。1、【答案】 细菌 纤维二糖 葡萄糖 梯度稀释 刚果红染色 1 固体2、【答案】 检测培养基是否感染杂菌或是否彻底灭菌 稀释涂布平板法
7、灼烧 3.3106 少数菌落可能是由2个或多个细菌形成3、【答案】 9ml无菌水 避免池水中细菌数目过多（密度过大），得不到单菌落 牛肉膏、蛋白胨 30300 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 采集水样的容器要灭菌，稀释和接种要在酒精灯火焰旁等4、【答案】 PET 增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌 10-5 稀释倍数为10-3时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10-4组的结果 灭菌，防止微生物污染 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落 甘油管藏5、【答案】 微生物的天然培养基 长期被石油污染（含石油多的） 选择 高压蒸汽灭菌法 该类微生物是厌氧型微生物 最大 1000 低于
