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1、章节题目实验一药理学实验基本技能及实验常用仪器的操作技术 教学目的 和 要 求 1.熟练掌握实验动物的的捉拿固定法 2.熟悉实验动物的给药方法 3.熟悉生物机能实验系统的基本操作技术 重点难点 重点：实验动物的的捉拿固定法；实验动物的给药方法 难点：熟悉生物机能实验系统的基本操作技术 教学设计 （含主要教学环节、讲授内容、授课方法、课堂教学内容的组织与安排、辅助教学及板书设计、作业 与思考题、教学反思与小结等） 一、实验常用动物的捉拿固定方法 1.小鼠 小鼠性情温顺，一般不会主动咬人，但抓取时动作也要轻缓。抓取时先将小鼠放在粗糙物（如鼠 笼）上面，用右手提起鼠尾，将小鼠轻轻向后拉，这样可使小鼠
2、前肢抓住粗糙面不动，用左手拇指和 食指捏住鼠头皮肤和双耳，其余三指和掌心夹住其背部皮肤及尾部，这样小鼠便可完全固定在左手中 （如下图） ，此时右手可作注射或其他实验操作，也可将小鼠固定在特制的固定器中。 2.大鼠 捉拿固定的方法基本上与小鼠相同。由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击的方式抓取，捉拿 时较难一些。为防止大鼠在惊恐或激怒时咬伤实验者的手指，实验者应带上棉手套或帆布手套，先用 右手将鼠尾提起，放在粗糙物上，向后轻拉鼠尾，使其不动，再用左手拇指、食指捏住头颈部皮肤， 其余三指和手掌固定鼠体，是其头、颈、腹呈一直线。这时右手可作注射。 3.家兔 家兔比较驯服，一般不会咬人，但脚爪较尖，应避
3、免抓伤。抓取时轻轻将兔提起，另一只手托其 臀部，使其躯干的重量大部分集中在该手上，然后按实验需要将兔固定成各种姿势。 二、实验动物的给药方法 1.小鼠 （1）灌胃法 以左手捉住小鼠，使其腹部朝上，右手持灌胃器（在 12mL 注射器上连接细玻璃灌胃管或把注 射针头磨钝稍加弯曲制成的灌胃针头） ，灌胃管长约 45cm，直径约 1mm。操作时，先从小鼠口角 将灌胃管插入口腔内，然后用灌胃管向后上方压迫小鼠头部，使口腔与食道呈一条直线，再将灌胃管 沿着上颚壁轻轻推入食道，当推进约 23cm 时可稍感有阻力，表明灌胃管前部已经到达膈肌，此时 即可推进注射器进行灌胃，若注射器注射器推注困难，应抽出重插，若
4、误入气管给药，可使小鼠立即 死亡。注药后轻轻拔出灌胃管，一次灌药量为 0.10.3mL/10g 体重。 （2）皮下注射法 通常选择背部皮下注射，操作时轻轻拉起背部皮肤，将注射针刺入皮下，把针尖向左右摆动，以 摆动说明针尖确已刺入皮下，然后注射药液。拔针时，以手捏住针刺部位，防止药液外漏，注射药量 为 0.10.3mL/10g 体重。 （3）腹腔注射法 以左手固定小鼠，腹部朝上，注射部位应是腹部的左右下外侧 1/4 的部位，因为此处无重要器官。 用右手将注射器针头刺入皮下，沿皮下向前推进 35mm，接着使针头与皮肤呈 45角刺入腹肌，继 续向前推进，通过腹肌进入腹腔后感觉抵抗力消失，此时可注入药
5、液，一次注射量为 0.10.2mL/10g 体重。 （4）静脉注射法 一般采用尾静脉注射，事先将小鼠置于固定的筒内或铁丝罩内，或扣于烧杯内，使其尾巴露出， 尾巴置于 4550的温水中浸泡半分钟或用 75%的酒精棉球擦拭，使血管充血，选择尾巴左右两 侧静脉注射，如针头确已在血管内，推注药液应无阻力。注射时若出现隆起白色皮丘，阻力增大，说 明未注入血管，应拔出针头重新向尾根部移动注射。注射完毕后，把小鼠尾巴向注射部位内侧折曲而 止血。需反复静脉注射，应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部移动注射。一次注射量为 0.05 0.1mL/10g 体重。 2.家兔 （1）静脉注射法 注射部位一般采取耳缘静脉，
6、兔耳缘静脉的血管为静脉，中央的血管为主动脉。可用酒精棉球涂 擦耳部边缘静脉部位的皮肤，或用电灯泡烘烤兔耳使血管扩张，以左手食指放在耳下将兔耳垫起，并 以拇指按住耳缘部分，右手持注射器，针头沿皮下向前推进少许再刺入血管。注射时若无阻力或无发 生局部皮肤变白隆起现象，说明针头在血管内即可注射药液。注射完毕压住针眼，拔去针头，继续压 迫数分钟止血。 三、生物机能实验系统的基本操作技术 按照书本上的操作步骤，熟练掌握 BL-410 生物机能实验系统的基本操作。 章节题目实验二磺胺类药物的药代动力学测定 教学目的 和 要 求 重点难点 教学设计 （含主要教学环节、讲授内容、授课方法、课堂教学内容的组织与
7、安排、辅助教学及板书设计、作业 与思考题、教学反思与小结等） 一、实验目的一、实验目的 磺胺嘧啶一次性静脉给药后其血药浓度随时间变化的规律。 二、二、实验原理实验原理 已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性条件下其苯环上的氨基将被离子化而生成铵类化合物。 后者与 亚硝酸钠可发生重氮化反应进而生成重氮盐。该化合物在碱性条件下可与麝香草酚生成橙黄色化合 物。在 525nm 波长下比色，其光密度与磺胺嘧啶的浓度成正比。具体反应过称为： 根据上述原理，在给受试家兔一次性静脉注射一定剂量的磺胺嘧啶后，于不同时间点采集其静脉 血样，采用比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行定量分析，并以血药浓度对相应时间作图，从
8、 而获得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲线。 三、三、实验材料实验材料 动物：3Kg 左右的家兔 1 只。 药品：20%磺胺嘧啶（SD）、7.5%三氯醋酸、0.1%SD 标准液、0.5%亚硝酸钠、0.5%麝香草酚 （20%NaOH 配制）、1000 U/mL 肝素生理盐水、3%戊巴比妥钠、蒸馏水。 器材：721 分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、硅胶管） 、 兔手术台、注射器（5mL）及针头、移液器（0.011mL） 、吸头、试管、离心管、试管架、玻璃记号 笔、药棉、纱布、计算机。 四、四、方法与步骤方法与步骤 1.麻醉：全麻或局麻均可。取兔 1 只（实验前禁食 1
9、2 小时不进水） ，记录体重和性别，耳缘静脉注射 3%戊巴比妥钠 0.81mL/Kg 麻醉，仰位固定于兔手术台上。 2.手术： 颈部手术区剪毛， 切皮 6cm 左右， 钝性分离皮下组织和肌肉， 气管插管， 分离出颈总动脉 2 3cm 左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。 3.耳缘静脉注射 1000 U/mL 肝素 1mL/Kg。 4.插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的一段动脉上剪一“V”型切口，插入尼龙管，用线 结扎牢固，以备取血用。 5.取血：打开动脉夹放取空白血样 0.4mL，分别放入 1 号管（空白管）和 2 号管（标准管）各 0.2mL， 摇匀静置。而后静注 20
10、% SD 1.5mL/Kg，分别于注射后 1、3、15、30、45、60、90、120 分钟时由动 脉取血 0.2mL 加到含有 7.5% 三氯乙酸 2.7 mL 的试管中摇匀。标准管加入 0.1% SD 标准液 0.1mL， 其余各管加蒸馏水 0.1mL 摇匀。 6.显色：将上述各管离心 5 分钟（15002000 转/分） ，取上清液 1.5 mL，加 0.5%亚硝酸钠 0.5mL，摇 匀后，再加入 0.5%麝香草酚 1mL 后溶液为橙色。 7.测定：用分光光度计在 525nm 波长下测定各样品管的光密度值。 8.计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原理，通过空白血标准管浓
11、度及其光密 度值推算出样品管的磺胺药物浓度。公式如下： 五、五、结果与处理结果与处理 将所得数据填入表中，并用计算机软件绘制药物的药时曲线。 六、六、注意事项注意事项 1.每次取血前要先将插管中的残血放掉。 2.每吸取一个血样时，必须更换吸量管，若只用一支吸量管时必须将其中的残液用生理盐水冲净。 3.将血样加到三氯乙酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。 后：磺胺嘧啶一次性非血管内给药后的药时曲线。后：磺胺嘧啶一次性非血管内给药后的药时曲线。 1.腹腔注射 20% SD 1.5mL/Kg。 2.分别于注射后 5、15、30、45、75、120、180、240、300 分钟时进行取血。 章节题目
12、实验三镇痛药的镇痛作用 教学目的 和 要 求 重点难点 教学设计 （含主要教学环节、讲授内容、授课方法、课堂教学内容的组织与安排、辅助教学及板书设计、作业 与思考题、教学反思与小结等） 许多刺激性化学性药物（如醋酸、酒石酸锑钾、缓激肽、钾离子）腹腔注射刺激腹膜，均能使动 物产生疼痛反应，可用作疼痛模型，研究疼痛生理及筛选镇痛药物。其中小鼠扭体法常用。 一、一、目的目的 观察药物的镇痛作用，掌握小鼠扭体法实验方法。 二、二、实验原理实验原理 由于腹膜有广泛的感觉神经分布，某些化学物质（如冰醋酸等）注入小鼠腹腔内可刺激脏层和壁 层腹膜，引起深部、大面积且持久的疼痛，致使小鼠产生扭体反应，表现为腹部
13、两侧内凹、躯体扭曲、 后肢伸展和臀部高起等行为反应，统称为扭体反应。该反应在注射 15min 内出现频率最高，故注射后 15min 内发生的扭体次数作为疼痛的定量指标。镇痛药可抑制这种反应。 三、三、实验仪器设备实验仪器设备 电子天平、500mL 烧杯、棉签、1mL 注射器、鼠笼。0.2%哌替啶（度冷丁）生理盐水溶液、安 痛定生理盐水溶液（取 1mL 安痛定加生理盐水稀释至 12.5mL） 、0.7%冰醋酸溶液、生理盐水、碘酊、 2%苦味酸溶液。 四、四、方法与步骤方法与步骤 （方法方法 1） 1、实验分组取体重相近同性别小鼠 33 只，分别称重、标记、随机分成 3 组，每组 11 只动物。均
14、 由腹腔注射给药，甲组给生理盐水 0.1mL/10g，乙组给哌替啶 0.1mL/10g，丙组给安痛定 0.1mL/10g。 30min 后，每只小鼠腹腔注射 0.7%冰醋酸溶液 0.1mL/10g。 2、观察扭体反应次数观察 15min 内小鼠是否出现扭体反应，并记录 15min 内各小鼠出现扭体反应 的次数。 3、计算受试药物镇痛百分率综合全实验室结果，求甲、乙、丙三组 15min 内出现的平均扭体反应 次数，并计算两种受试药物镇痛百分率。将结果填入下表。 （方法（方法 2） 取体重 1822g 的健康小白鼠 3 只，称重，编号。甲鼠腹腔注射 0.4%盐酸哌替啶溶液 40mg/Kg （0.1
15、mL/10g）。乙鼠灌胃给 6%乙酰水杨酸混悬液 600mg/Kg（0.1mL/10g）。丙鼠腹腔注射 0.1mL/10g 生理盐水作对照。给药后 30min，各鼠腹腔注射 0.6%醋酸溶液 0.2mL/只，观察 10min 内产生扭体反 应（腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、臀部高举）的动物数。 五、五、结果与处理结果与处理 小鼠镇痛指标记录小鼠镇痛指标记录 组组别别动物只数动物只数药物及剂量药物及剂量 15 分钟内平均分钟内平均 扭体反应次数扭体反应次数 镇痛百分率镇痛百分率(%) 甲甲 乙乙 丙丙 11 11 11 生理盐水 0.1mL/10g 度冷丁0.1mL/10g 安痛定/乙酰水杨酸
16、0.mL/10g 收集全实验结果，按系列公式计算药物镇痛药百分率。 六、六、注意事项注意事项 1.醋酸溶液（也可用 1%酒石酸锑钾溶液）宜新鲜配制。 2.室温宜恒定于 20，过高或过低不易发生扭体反应。 3.给药组扭体动物数比对照组减少 50%以上才能认为有镇痛作用。 注：饱和苦味酸液的配制： 1、取 2g 苦味酸，加蒸馏水至 100mL， 2、煮沸，冷却至室温, 3、待有结晶析出时，倒出上清液即得。 章节题目实验五抗心律失常药实验 教学目的 和 要 求 重点难点 教学设计 （含主要教学环节、讲授内容、授课方法、课堂教学内容的组织与安排、辅助教学及板书设计、作业 与思考题、教学反思与小结等） 一、一、实验原理实验原理 心律失常（cardiac arrhythmia） ：指心脏电活动的频率、节律、起源部位、传导速度或激动次序的 异常， 按其发生原理分为冲动形成异常和冲动传导异常。 心脏正常功能的维持有赖于其正常的电活动， 其正常电活动基础是组成心脏的每个细胞动作电位活动的整体协调平衡， 而每一个细胞的动作电位又 取决于细胞的各种跨膜电流。 BaC
