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1、 TaKaRa Code：TaKaRa Code：DRR039A Premix Ex Taq TM (Perfect Real Time) （200 次量） 说明书 宝生物工程(大连)有限公司 宝生物工程(大连)有限公司 目目 录录 内 容 页 码 内 容 页 码 制品说明 1制品说明 1 制品内容 1 制品内容 1 适用的 适用的 Real Time PCR 扩增仪 1扩增仪 1 保 存 1 保 存 1 试剂盒原理 2 试剂盒原理 2 试剂盒特长 2 试剂盒特长 2 操作注意 2 操作注意 2 Real Time PCR 操作顺序 2 操作顺序 2 操作方法 3 操作方法 3 应用应用 Th
2、ermal Cycler Dice Real Time System 扩增仪的操作方法 扩增仪的操作方法 3 3 应用应用 ABI PRISM 7000/7700/7900 HT， 7300/7500/7500 Fast Real - Time PCR 的操作方法 的操作方法 4 4 应用 应用 LightCycler Real Time PCR 扩增仪的操作方法 扩增仪的操作方法 5 5 应用应用 Smart Cycler II System Real Time PCR 扩增仪的操作方法 R 扩增仪的操作方法 6 6 应用 应用 Mx3000P Real Time PCR 扩增仪的操作方法
3、扩增仪的操作方法 7 7 PCR 反应条件说明 8 反应条件说明 8 进行 进行 RT-PCR 反应时的实验方法 8 反应时的实验方法 8 引物设计说明 10 引物设计说明 10 特别提示： 特别提示：本公司提供用于基因表达定量分析的引物设计及合成服务 本公司提供用于基因表达定量分析的引物设计及合成服务 10 10 问 答 11 问 答 11 制品说明制品说明 本制品是采用探针法（TaqMan本制品是采用探针法（TaqMan，Molecular Beacon等）进行Real Time PCR的专用试剂。是一种 2 浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。制
4、品中的DNA聚合酶使用了改 良后的Hot Start法用 DNA聚合酶 ，Molecular Beacon等）进行Real Time PCR的专用试剂。是一种 2 浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。制品中的DNA聚合酶使用了改 良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex TaqTaKaRa Ex Taq HS，与TaKaRa精心研制的Real Time PCR用Buffer 组合使用， 可以有效抑制非特异性的PCR扩增， 大大提高PCR的扩增效率， 进行高灵敏度的Real Time PCR 扩增反应。 HS，与TaKaRa精心研制的
5、Real Time PCR用Buffer 组合使用， 可以有效抑制非特异性的PCR扩增， 大大提高PCR的扩增效率， 进行高灵敏度的Real Time PCR 扩增反应。 本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。 本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。 采用嵌合荧光法（SYBR采用嵌合荧光法（SYBR Green I）进行Real Time PCR时，建议使用SYBR Green I）进行Real Time PCR时，建议使用SYBR Premix Ex TaqPremix Ex
6、TaqTM TM（Perfect Real Time） （TaKaRa Code：DRR041） 。 （Perfect Real Time） （TaKaRa Code：DRR041） 。 制品内容制品内容（50 （50 l l 反应200 次）反应200 次） Premix Ex TaqPremix Ex TaqTM TM（Perfect Real Time） （2Conc.）*1 1.0 ml 5 支 （Perfect Real Time） （2Conc.）*1 1.0 ml 5 支 ROX Reference Dye（50Conc.）*2 200 l 1 支 ROX Reference D
7、ye（50Conc.）*2 200 l 1 支 ROX Reference Dye II（50Conc.）*2 200 l 1 支 ROX Reference Dye II（50Conc.）*2 200 l 1 支 *1 内含*1 内含TaKaRa Ex Taq HS，dNTP Mixture，Mg2+等。 等。 *2 只使用在*2 只使用在 ABI、Stratagene 等公司的等公司的 Real Time PCR 扩增仪上，用以校正 孔与孔之间产生的荧光信号误差。使用 扩增仪上，用以校正 孔与孔之间产生的荧光信号误差。使用 ABI PRISM 7000/7700/7900HT 和和 730
8、0 Real-Time PCR System 使 用使 用 ROX Reference Dye ， 7500 Real-Time PCR System 和和 7500 Fast Real-Time PCR System 使用使用 ROX Reference Dye II，Stratagene 公司的公司的 Mx3000P 也适用也适用 ROX Reference Dye II。Thermal Cycler Dice Real Time System、Light Cycler、Smart Cycler System 等等 Real Time PCR 扩增仪时不必使用。 扩增仪时不必使用。 适用的
9、适用的 Real Time PCR 扩增仪 扩增仪 ThThermal Cycler Diceermal Cycler Dice Real Time System（TaKaRa） Real Time System（TaKaRa） ABI PRISMABI PRISM 7000/7700/7900HT， 7300/7500 Real-Time PCR System， 7500 Fast Real-Time PCR System（Applied Biosystems） 7000/7700/7900HT， 7300/7500 Real-Time PCR System， 7500 Fast Real-
10、Time PCR System（Applied Biosystems） LightCycler LightCycler（Roche Diagnostics） （Roche Diagnostics） Smart Cycler Smart Cycler System（Cepheid） System（Cepheid） Mx3000P Mx3000PTM TM（Stratagene） （Stratagene） 其他各种 Real Time PCR 扩增仪 其他各种 Real Time PCR 扩增仪 保 存：保 存： 4保存。可在-20长期保存，一旦融解请于 4保存。反复冻融制品性能可能下降，请避免多
11、次反复冻 融制品。 4保存。可在-20长期保存，一旦融解请于 4保存。反复冻融制品性能可能下降，请避免多次反复冻 融制品。 -1-1- 试剂盒原理 试剂盒原理 进行 PCR 扩增时，在 PCR 反应液中加入荧光探针，然后在 PCR 扩增过程中，通过检测 PCR 反应液中的 荧光强度，可以达到监测 PCR 产物扩增量的目的。 进行 PCR 扩增时，在 PCR 反应液中加入荧光探针，然后在 PCR 扩增过程中，通过检测 PCR 反应液中的 荧光强度，可以达到监测 PCR 产物扩增量的目的。 本制品中的 DNA 聚合酶使用了改良后的本制品中的 DNA 聚合酶使用了改良后的TaKaRa Ex TaqT
12、aKaRa Ex Taq HS，并结合 TaKaRa 独自开发的 Buffer 系统， 可以有效抑制非特异性 PCR 扩增，大大提高 PCR 扩增灵敏度。 HS，并结合 TaKaRa 独自开发的 Buffer 系统， 可以有效抑制非特异性 PCR 扩增，大大提高 PCR 扩增灵敏度。 1热变性 2引物退火/探针与模板的杂交 3延伸反应 1热变性 2引物退火/探针与模板的杂交 3延伸反应 Polymerase 探针杂交 荧光物质 Polymerase 探针杂交 荧光物质 探针 探针 淬灭物质 淬灭物质 Primer Primer TaqMan 探针法 探针法 TaqMan 探针法是使用 5端带有
13、荧光物质（如： FAM 等） ，3端带有淬灭物质（如：TAMRA 等） 的 TaqMan 探针进行荧光检测的方法。 当探针完整 时，5端的荧光物质受到 3端淬灭物质的制约， 不能发出荧光。而当 TaqMan 探针被分解后，5 端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。 TaqMan 探针法是使用 5端带有荧光物质（如： FAM 等） ，3端带有淬灭物质（如：TAMRA 等） 的 TaqMan 探针进行荧光检测的方法。 当探针完整 时，5端的荧光物质受到 3端淬灭物质的制约， 不能发出荧光。而当 TaqMan 探针被分解后，5 端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。 当 PCR 反应液中加入荧光探针后，
14、在 PCR 反应的 退火过程中，荧光探针便会和模板杂交。进一步在 PCR 反应的延伸过程中， 当 PCR 反应液中加入荧光探针后，在 PCR 反应的 退火过程中，荧光探针便会和模板杂交。进一步在 PCR 反应的延伸过程中，TaqTaq DNA 聚合酶的 5 3Exonuclease 活性可以分解与模板杂交的荧 光探针，游离荧光物质发出荧光。通过检测反应体 系中的荧光强度，可以达到检测 PCR 产物扩增量 的目的。具体原理见右图。 DNA 聚合酶的 5 3Exonuclease 活性可以分解与模板杂交的荧 光探针，游离荧光物质发出荧光。通过检测反应体 系中的荧光强度，可以达到检测 PCR 产物扩
15、增量 的目的。具体原理见右图。 试剂盒特长 试剂盒特长 11 适用于 Real Time PCR 反应，可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。 适用于 Real Time PCR 反应，可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。 22 是一种 2浓度的 Premix Type 试剂，PCR 反应液配制时，只需加入模板、引物、荧光探针、灭菌蒸 馏水便可进行 Real Time PCR 反应，操作简单方便。 是一种 2浓度的 Premix Type 试剂，PCR 反应液配制时，只需加入模板、引物、荧光探针、灭菌蒸 馏水便可进行 Real Time PCR 反应，操作简单方便。 33 DNA 聚
16、合酶使用了改良后的DNA 聚合酶使用了改良后的TaKaRa Ex Taq TaKaRa Ex Taq HS，可以进行 Hot Start 法 PCR 反应，再与 TaKaRa 公司独自开发的 Buffer 系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度，高扩增特异性之特点。 HS，可以进行 Hot Start 法 PCR 反应，再与 TaKaRa 公司独自开发的 Buffer 系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度，高扩增特异性之特点。 操作注意 操作注意 以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。 11 冻结制品融解后，请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。试剂没有混匀时反应 性能会有所下降，本制品不能用振荡器混匀。 冻结制品
