《2015届高三生物高频考点深度解读：专题34微生物的培养和利用（解析版）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2015届高三生物高频考点深度解读：专题34微生物的培养和利用（解析版）（24页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、专题三十四微生物的培养和利用【高频考点解读】1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。【热点题型】题型一微生物的实验室培养例1、可以作为硝化细菌碳源、氮源和能源的是()ACO2、NH3、光能B(CH2O)、N2、NH3CCO2、NH3、NH3D(CH2O)、NH3、N2【提分秘籍】1培养基的种类(1)按物理状态分类：培养基种类特点用途液体培养基不加凝固剂工业生产固体培养基加凝固剂(如琼脂)微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏(2)按功能分类：种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的抗性而设计从众多微生物中分离所需
2、的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌2.消毒和灭菌的比较3.微生物的纯化培养平板划线法与稀释涂布平板法方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项(1)接种环的灼烧：第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者(1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰12
3、 cm处注意事项 (2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破 (2)涂布平板时：涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体目的在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体菌落培养平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染4.平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的
4、不同(1)第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。(2)每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。(3)划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。【方法规律】自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同(1)自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。(2)含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。【举一反三】如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：(1
5、)依物理性质，该培养基属于_培养基；依用途划分，则属于_培养基。(2)根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型是_，培养的微生物可能是_。(3)该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是_和_；倒平板时，一般需冷却至_左右，在_附近操作。(4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是_，至少应加入的物质是_，为检测纤维素分解菌的存在与否还应加入_，形成_色复合物，若产生_，则证明有纤维素分解菌存在。【热点题型】题型二分解尿素细菌的分离与计数例2、用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()
6、A涂布了一个平板，统计的菌落数是230B涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案：D【提分秘籍】 1筛选菌株的原理微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一
7、氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。2统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法：原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用计数板计算。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)：原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作：a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布
8、平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。4鉴定分解尿素的细菌(1)原理：CO(NH2)2H2OCO22NH3；由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。(2)方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。5.选择培养基的选择方法(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为唯一碳源时，
9、可以分离出消除石油污染的微生物。(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。【方法规律】微生物分离的常用方法(1)培养基中的营养成分的改变可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物。(2)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离出能消除石油污染的微生物的目的。(3)改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养，只能得到耐高温的微生物。【举一反三】下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实
10、验，完成下列问题：(1)实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。(2)材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。(3)方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，操作过程应在火焰旁。制备土壤稀释液：取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至9 mL的无菌水的大试管中
11、，依次稀释到107稀释度。涂布：按照由107103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基一般应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板。培养：放入恒温箱内，在2830 下培养34天。细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数为_的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是_(稀释度是105)。(4)预测结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基平板上的菌落数应多于无氮培养基上的数目。请说明原因_。【热点题型】题型三分解纤维素的微生物的分离例3、下列有关刚果红染色法的叙述，不正确的是()A刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入B刚果红可以在菌落
12、形成后加入C刚果红在菌落形成前倒平板时加入，加入的刚果红不需要灭菌D在菌落形成后加入刚果红时，刚果红不需要灭菌【提分秘籍】 1筛选原理2实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量梯度稀释涂布平板：将样品涂布于鉴别培养基上挑选产生透明圈的菌落3两种刚果红染色法的比较方法先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应在倒平板时就加入刚果红过程培养基长出菌落覆盖CR溶液(质量浓度为1 mg/mL)倒出CR溶液加入NaCl溶液(物质的量浓度为1 mol/L)倒掉NaCl溶液产生透明圈配制CR溶液(质量浓度为10 mg/mL)灭菌按照1 mL CR溶液/200 mL培
13、养基比例混匀倒平板培养透明圈优点显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作简便，不存在菌落的混杂问题缺点操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显透明圈，与纤维素分解菌不易区分【举一反三】幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有_，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现
14、_色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。A高压蒸汽 B紫外灯照射C70%酒精浸泡 D过滤(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得_菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。若不倒置培养，将导致_。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。解析：此题考查微生物的分离与培养知识。(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用
