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1、Vol. 32 No. 2 Feb. 2012 第 32 卷 第 2 期 2012年2月 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 Journal of Central South University of Forestry Both chemical sterilization and high temperature sterilization of seedlings medium were effective methods for raising the survival rate of transplanted tissue culture seedlings. The mediu
2、m mixed with humus, fi ne sand and vermiculite (the radio was 1 1 1)was the best suitable medium of 7 mediums of Populus yunnanensis seedling. Key words: Populus yunnanensis Dode; tissue culture seedlings; transplant; seedling adaptation medium 收稿日期：2011- 10- 24 基金项目：国家自然科学基金项目 (30960320) 资助；云南省应用基础
3、研究基金项目 (2009CD071) 资助；西南林业大学森林培育学云 南省重点学科 (XKZ200906) 资助；西南林业大学重点学科 (XKX200904) 资助 作者简介：辛培尧 (1975 )，男，博士，副教授 , 主要从事植物遗传育种方面的教学与研究 ;E- mail： 通讯作者：何承忠 (1970 )，男，博士，教授，从事植物遗传改良及分子生物学方面的教学与研究工作 ; E- mail： 滇杨 Populus yunnanensis Dode 属杨柳科杨属 青杨派树种， 乔木， 高20 m， 产于云南、 贵州和四川， 生于海拔 1 300 3 200 m 的山地。较耐湿热，适 应性较
4、强，生长较快，成材较早，而且易于繁殖 等优点，也是我国西南地区特有的一种乡土树种， 是全国乃至世界少有的分布于低纬度高海拔地区 的宝贵杨树资源 1- 2。由于滇杨主要分布区植物种 类繁多，加上研究者对其认识程度的不同，导致 对滇杨的系统研究工作未能得到足够的重视 3。 近年来，随着滇杨离体培养技术的不断完善，使 得利用组织培养技术对滇杨进行种质资源保存及 遗传改良成为现实 4- ,5。植物组织培养中的炼苗阶 段是该技术中较为关键的一环，它直接关系到组 培苗能否尽快地应用到生产中去，即组培苗能否 有高的移栽成活率。组培苗的移栽过程较为复杂， 在未掌握其有关理论和技术时，盲目移栽或稍有 不慎， 就
5、会造成大批组培苗死亡， 而导致前功尽弃。 因此，对滇杨组培苗的移栽炼苗技术进行研究， 辛培尧，等：滇杨组培苗的移栽技术研究24第 2 期 表 2 基质灭菌方法 Table 2 Sterilization methods for transplanting medium 处理处理方法 1(CK)不进行任何灭菌处理 2( 药剂处理 ) 将基质装入穴盘，用 0.3% 的高锰酸钾溶液淋 溶消毒，盖上小棚膜，熏蒸一个星期 3( 高压蒸气灭菌 ) 将基质包装严实，放入灭菌锅，121灭菌 45 min 从而建立高效而稳定的移栽炼苗体系，不论是对 滇杨基础理论研究，还是应用生产研究均具有十 分重要的指导意义。
6、 1 材料与方法 1.1 材料 以滇杨离体培养中生根培养阶段所得的生根 试管苗为试验材料。 1.2 方法 1.2.1 炼苗前预处理 移栽前进行一定天数的炼苗处理往往会影响 移栽成活率，为此，设计了如下 4 种不同的炼苗 前预处理 ( 见表 1)。 表1 炼苗前预处理方法 Table 1 Pre-treatment methods before transplanting 处理预处理方法 1将接入生根培养基的组培苗在培养室中培养 30 天。 2 将接入生根培养基的组培苗在培养室中培养 25 天，普通实 验室闭瓶炼苗 5 天。 3 将接入生根培养基的组培苗在培养室中培养 25 天，普通实 验室闭瓶
7、炼苗 3 天，再打开瓶盖进行炼苗 2 天。 4 将接入生根培养基的组培苗在培养室中培养 25 天，普通实 验室开瓶炼苗 5 天。 每组处理 40 株，重复 3 次，处理期间应注意 保持瓶内湿度， 防止组培苗萎蔫死亡。 处理结束后， 移栽入经高压蒸气灭菌后的河沙中，一个月后统 计其成活率。 1.2.2 基质的灭菌方法 为了探讨基质灭菌方法对组培苗移栽成活率 的影响，本实验以河沙为基质，设计了两种基质 灭菌方法 ( 见表 2)。 每组处理移栽 30 株，重复 3 次，移栽一个月 后统计其成活率。 1.2.3 基质的筛选试验 试验利用红土、河沙、珍珠岩、腐质土、蛭石， 配置了 7 种不同的基质，基质
8、配比如下 :(1) 河沙； (2) 河沙腐质土 =1 1；(3) 河沙腐质土蛭 石 =1 1 1；(4) 珍珠岩；(5) 珍珠岩腐质土 =1 1；(6) 红土；(7) 红土腐质土 =1 1。 分别将组培生根试管苗移栽到上述基质中。 每组移栽 30 株，重复 3 次，移栽一个月后统计其 成活率。移栽完毕后进行日常管理，每隔 15 天统 计一次死亡率，两个月后测量滇杨幼苗的成活率、 苗高、地径，观察苗长势，并进行统计分析。 1.3 数据处理 所有数据均在SPSS15.0软件下进行统计分析。 2 结果与分析 2.1 不同炼苗前预处理对移栽成活率的影响 图 1 为不同炼苗前预处理对移栽成活率的影 响比
9、较。图 1 显示，组培苗移栽成活率的高低顺 序为：处理 3 处理 2 处理 1 处理 4。将组培 苗放在普通实验室闭瓶炼苗 3 天再打开瓶盖进行 炼苗 2 天，这种处理效果最佳，组培苗成活率为 93.3%，这种处理使组培苗在无菌条件下基本适应 了自然光照，继而在有菌的开放条件下适应自然 条件，是一个逐步适应的过程，因而移栽成活率 较高。其他处理因为变化幅度较大，因此移栽成 活率相对较低。 图 1 不同炼苗前预处理对生根苗移栽成活率的影响 Fig. 1 Effects of different pretreatment methods on transplanting survival rate
10、 of rooting seedlings 2.2 不同基质灭菌方法对移栽成活率的影响 图 2 表明：两种灭菌后基质上移栽的组培苗 成活率差别不明显 ( 分别为 91.5% 和 93.2%)，且 均高于对照 (70%)，说明：基质灭菌是提高组培 苗炼苗成活率的有效方法。使用任何一种灭菌方 法都是行之有效的，可视具体试验条件灵活应用。 25第 32 卷中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 2.3 不同基质对组培苗移栽成活率的影响 方差分析结果 ( 见表 3) 表明，不同基质对滇 杨组培苗成活率存在一定差异，有的基质间差异 达极显著水平。据此，可以把基质分为 3 类：组 培苗成活率最好的是 2
11、号和 3 号基质，1 号、5 号 和 7 号基质生长情况较次，生长较差的有 4 号和 6 号基质。而 2 号与 3 号基质在 1% 和 5% 水平上均 无显著差异，由此可见，就滇杨组培苗的成活率 来看，可筛选出 2 号和 3 号基质为较佳移栽基质。 表 3 还显示，不同基质处理在组培苗的平均高生 长方面差异显著，个别组间差异达极显著水平。 其中，2 号、3 号和 7 号基质上幼苗生长较高，且 在 1% 和 5% 水平上均无显著差异。而高生长较差 的是 1 号、4 号和 6 号基质、5 号基质表现一般。 因此，以滇杨组培苗的在不同基质上移栽高生长 而言， 2 号、3 号 7 号基质为滇杨生根组培
12、苗的较 佳基质。不同基质在组培苗的平均地径生长方面 图 2 不同基质灭菌方法对生根苗移栽成活率的影响 Fig. 2 The effect on transplanting survival rate of rooting seedlings with different sterilization methods 表3 不同基质对组培苗移栽成活率及生长的影响 Table 3 Effects of different transplanting mediums on survival rate and growth status of plantlets 基质编号 平均成活率 /% 平均苗高 /
13、cm 平均地径 /mm 苗木生长状况 180.0 AB bc5.07 C c 1.41 BC de 生长缓慢，长势一 般，叶黄绿色 291.1 A a6.83 A a 1.48 AB bc 生长较快，长势良 好，叶绿色 393.3 A a7.43 A a1.55 A a 生长旺盛，苗木粗 壮，叶深绿 473.3 B c5.03 C c1.35 C e 生长缓慢，长势一 般，叶黄绿色 586.7 AB ab6.2 B b 1.48 AB bc 生长快，长势良好， 叶绿色 673.3 B c4.6 C c 1.42 BC cd 生长缓慢，长势较 差，叶黄绿 784.4 AB ab6.77 A a
14、1.49 AB ab 生长快，长势良好， 叶绿色 同列中不同大写字母表示组间差异达1%极显著水平，不同小写字母表 示组间差异达5%显著水平。 也存在显著差异，个别组间差异达极显著水平。3 号 及 7 号基质中，幼苗地径生长较好。表现较差的是 1 号、4 号及 6 号。由此可见，以滇杨组培苗的在不同 基质上移栽地径生长情况为标准 ，可筛选出 3 号和 7 号基质为较佳炼苗基质。另外，发析幼苗在不同基 质上的生长状况，3 号叶片颜色深绿色，2 号、5 号 和 7 号叶片为绿色，1 号、4 号及 6 号为黄绿色。综 合上述分析，我们可以看出滇杨组培生根苗在 3 号 基质上生长最佳，所以，3 号练苗基
15、质在 7 种练苗基 质是最佳的，其次是2号和7号基质，6号基质较差。 即以河沙腐质土蛭石 =1 1 1 组成的基质为 滇杨组培生根苗的最佳移栽炼苗基质。 3 讨论 3.1 组培苗出瓶前预处理 滇杨组培生根苗在出瓶前将其置于有自然光 照的普通室内，进行过渡炼苗，在出瓶前 2- 3 天， 打开瓶盖，让瓶苗逐步适应外界的光照和湿度， 以增强组培苗对环境的适应能力，可以提高组培 苗移栽成活率。这与刁桂萍 6、梁德军等7、吴立 秋等 8、乌丽雅斯 9和冯谦等 10 在不同的杨树离 体快繁研究中所得的结论相一致，但不同杨树其 过渡炼苗所需的时间不尽相同。 3.2 组培苗移栽基质筛选 在环境适宜的条件下，炼
16、苗基质的理化性质对 组培苗的移栽成活率有着很大的影响，其中基质的 透气性、保湿性、酸碱度和养分等因子对诱发新根 及成活起关键作用 11。试验表明，把滇杨组培苗移 栽入沙腐质土蛭石=111中成活率最高， 且苗长势最好。另外，试验中还发现，复合基质比 单一基质中幼苗的成活率均高，何承忠等 12 在对 马缨杜鹃组培苗移栽基质的筛选研究表明：疏松、 透气性好的基质有利于组培苗成活和生长，复合基 质比单一基质要好，这与本研究一致；而矮化石楠 组培苗移栽基质的筛选试验表明，单一基 ( 河沙、 蛭石或及珍珠岩 ) 比复合基质 ( 加入腐质土 ) 好 13。 可见， 不同植物对基质的要求存在一定的差异， 因此在筛选炼苗基质时，应参考具体植物对土壤 的质地的偏好，来设计炼苗基质。 （下转至第 30 页） 李淑娴，等：环境条件和播后覆土对水杉种子出苗率的影响3
