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1、紫外吸收光度法鉴别和测定维生素 B12 注射液 【实验内容】1. 对照品溶液和样品溶液的配制准确称取维生素 B12 对照品适量，加水溶解稀释成 25g/mL 的溶液。精密吸取维生素 B12 注射液 0.5 ml 于 10 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，得到待测样品溶液（按标示含量稀释成 25g/ml 的溶液）。2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别取对照品溶液进行光谱扫描（250 600 nm），得到维生素 B12 的吸收曲线，寻找吸收峰，扫描后可得到在 278nm， 361 nm 和 550 nm 波长处出现的 3 个吸收峰，然后在以上 3 个吸收峰处测量维生素 B12 注射液的吸光度，并
2、计算 A361/A278 和 A361/A550 的比值。3. 维生素 B12 的定量测定根据吸收曲线选择最大吸收波长（在 361 nm 或附近）作为测量波长，测量维生素 B12【注意事项】1. 注意石英比色皿的操作使用；2. 使用 5 联池时要注意比色皿在样品池中的位置，不可混淆；3. 测定时不要打开仪器的样品池盖。【数据记录】WL ABS550.5 0.142550.0 0.141361.0 0.450278.0 0.248277.5 0.249【数据处理】 1、定性分析E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)/A(277.5nm)=1.81E(
3、1%1cm361.0nm)/E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)/A(550.5nm)=3.172、定量分析因为，A(361nm)=E(1%1cm)cl，g/100ml=10 6g/100ml=104g/ml所以，c B12=A(361nm)/E(1%cm)l=A(361nm)/207*104=0.450/207*104=21.74g/mlVitB12(%)=(cB12*n)/(500g/ml)*100%=(21.74*20)/500*100%=87.0%(n 为稀释倍数)【思考题】1 采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求？2利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上
4、测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解释。利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解释。答：不同仪器得到的吸收曲线形状基本一致，能反映出同一物质的基本特征，但吸收曲线的吸光度和吸收峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须对仪器进行定期的校正。3比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合 Beer 定律的线性范围内。 校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离 Beer 定律线性关系，也可以应用于测定。因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。
