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1、乙肝五项（乳胶法）操作规程POS1.检测目的乙型肝炎病毒标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)检测。2.测定原理HBsAg检测采用双抗体夹心法原理，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒（即标记物）结合的HBsAb（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAb捕获，形成HBsAb标记抗体-HBsAg-HBsAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBsAb检测采用双抗原
2、夹心法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBsAg。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应（即标记抗原）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗原（标记抗原）在层析过程中先与标本中的HBsAb结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAg捕获，形成HBsAg标记抗原-HBsAb-HBsAg复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBeAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBeAb。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBeAb反应（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细
3、效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBeAb捕获，形成HBeAb标记抗原-HBeAg-HBeAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBeAg、HBcAb采用竞争抑制法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争，与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区(T)将没有
4、红色条带；阴性标本，测试区(T)会出现明显的红色条带。3.标本采集样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。检测进应尽量使用新鲜的样本。样本若不能及时送检，可在2-8冷藏3天。长期保存需冷冻于-20，忌反复冻融。发臭、溶血等异常样本请勿使用。4.试剂艾博生物医药有限公司5.操作步骤5.1使用前将试剂板和血清血浆标本恢复至室温(2030)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在1小时内应尽快地使用。5.2将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2-3滴)。5.3加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时
5、读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效。6.结果判定由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不同的，请注意区别。6.l.HBsAg、HBsAb、HbeAg6.1.1阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.1.2阴性(-)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.1.3无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质
6、损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。6.1.4注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。6.2.HBeAb、HBcAb6.2.1阳性(+)：仅质控区(C)出现一条红色条带在测试区(T)内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.2.2弱阳性(+)：质控区(C)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。
7、6.2.3阴性(-)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.2.4无效：质控区(C)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。7.质量控制7.1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。7.2质控区内(C区)一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。质控内(C)所显现的红色条带是判定标本是否足够，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。8.注意事项8.1乳胶法乙肝五项检测试剂板(血
8、清血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。8.2由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。8.生物安全防护8.1在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。8.2如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。8.3操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。8.4HBV对低温、干燥、紫外线、70乙醇均有耐受性。煮沸10010分钟、高压蒸汽灭菌12115分钟或加热1602小时均可灭活HBV。510gL次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林3772小时，0.5过
9、氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。9.临床意义9.1HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。9.2HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期或既往曾感染过HBV，现在已恢复，而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即接种免疫成功的指标。9.3HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg
10、和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为7090。9.4HBeAb阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb；在HBsAg和HBsAb阴性时，如能检出HBeAh和HBcAb，也能确诊为乙型肝炎近期感染。9.5HBcAb阳性：说明既往感染过乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈阳性,也是最晚转阴性的一项，而且有些人一辈子都是阳性。附：HBcAb-lgG阳性：高滴度表示正在感染HBV，低滴度则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。HBcAb-IgM阳性：抗-HBcIgM不是保护性抗体，血清中高滴度表达常提示HBV在复制，所以它既是感染性指标，又可视作传染性指标，是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示检验对象血液有较强传染性。同时，HBcAb-IgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎。10.参考文件乙型肝炎病毒表面抗原、乙肝表面抗体、E抗原、E抗体、C抗体检测试剂盒说明书
