《石蜡切片原位杂交免疫组化》由会员分享，可在线阅读，更多相关《石蜡切片原位杂交免疫组化（93页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1病 理 检 验 技 术江汉大学医学与生命科学学院病理学与病理生理学教研室2004 年 4 月内 容 提 要 本书介绍组织病理学常用的多种技术。包括常见的技术，即福尔马林固定、石蜡包埋、HE 染色技术 ，同时也介绍了常用的特殊染色技术，免疫组织化学技术，并简明地介绍了分子生物学技术的基本理论以及在组织病理学中的应用。 全书理论与实践并重，经典与改良结合，内容丰富，通俗易懂，实用性强，为实验室工作的必备参考书。适合从事病理学、组织学、生物学、法医学等的科研教学和临床工作的技术人员、教师、医师和研究生使用。同时也适合临床医学检验专业中专、专科生使用以及临床医学专业专升本学生和临床医学专业本科生选用
2、。第一篇 石蜡切片技术第一章 组织标本的处理第一节 取材5第二节 组织的固定26第三节 大体标本的处理和固定14第四节 陈列标本的固定15第五节 脱钙16第六节 组织的冲洗18第二章 石蜡包埋技术第一节 脱水19第二节 透明21第三节 浸蜡22第四节 包埋22第三章 切片技术第一节 切片刀25第二节 切片机27第三节 石蜡切片的制作327第四节 特殊组织石蜡切片的制作29第五节 石蜡切片的异常及处理29第四章 染色与染色剂第一节 染色的基本原理31第二节 染色剂染色的化学基础33第三节 染色剂的分类34第四节 常用染色剂及配制35第五节 苏木素伊红染色法39第六节 封固剂41第五章 特殊染色技
3、术第一节 结缔组织染色法43第二节 脂类染色法47第三节 糖原及粘液染色4法48第四节 色素染色法50第五节 神经组织染色法52第六节 核酸及核蛋白染色法52第七节 肌肉组织染色法53第八节 病原微生物染色法54第九节 特殊染色技术的应用57第二篇 免疫组织化学和亲和免疫组织化学技术第一章 免疫组织化学技术第一节 基本原理62第二节 染色步骤67第三节 常用试剂的配制72第二章 亲和免疫组织化学技术第一节 基本原理577第二节 染色步骤80第三篇 分子生物学技术第一章 核酸原位杂交技术第一节 核酸原位杂交的基本原理83第二节 核酸原位杂交的主要过程84第三节 核酸原位杂交的基本操作步骤86第四
4、节 常用试剂的配制87第五节 核酸原位杂交的应用89第二章 原位 PCR 技术第一节 基本原理91第二节 基本类型91第三节 基本步骤92第四节 原位 PCR 技术的应用936第一篇 石蜡切片技术切片技术的应用到现在已有一百年多的历史了。最早应用的只是冰冻切片，随着冰冻切片的应用和实践又进一步利用石蜡的硬度，将要检查的组织块浸渍并包埋于这种坚实的介质之中，制成了石蜡切片。后来又利用明胶，火棉胶等物质的韧性来包埋组织，制成了明胶切片和火棉胶切片。切片技术随着生物学和医学的发展，经过不断地改进而逐渐的完善起来，随着光学仪器和切片机器的日益的精密和不断向前发展。现代切片技术巳成为生物形态学微观结构研
5、究的一个重要方面，更是病理检验技术中不可缺少的一个组成部分。将各种组织制成非薄的切片标本，需要经过一系列比较繁杂的过程，每一步都要求病理技术工作者要认真，耐心，细致地使整个过程一环扣住一环，才能获得优良结果。制作切片的主要过程有：（1）取材， （2）固定， （3）脱水， （4）包埋， （5）切片， （6）染色， （7）封固。在这七个主要过程中，又包括着若干步骤， （详见切片制作程序表） 。冰冻切片 石蜡切片 火棉胶切片 取 材固 定 冰 冻 冲 水 脱 水 透 明 乙醚酒精 浸 蜡 胶液渗透 石蜡包埋 火棉胶包埋 冰冻切片 切 片 切 片 染 色 染 色 染 色 封 固 封 固 封 固 凡欲制
6、作切片的组织，首先必须固定，以防止组织自溶而产生死后变化。组织经过固定之后，再以流水冲洗。如为冰冻切片，即可直接将组织冰冻进行切片。如欲制石蜡切片或火棉胶切片，为了使石蜡或火棉胶渗透到组织中去，以能包埋组织，在固定水洗之后，还须经过脱水，媒剂（透明） ，石蜡火棉胶的渗透，才能包埋切片。7在切片以后，为了便于观察，还要对其进行不同的染色，最后将切片封固，制成长久保存的组织切片标本。第一章 组织标本的处理第一节 取 材取材是制作切片程序中的首要步骤，取材不当，将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要，不能随意的切取组织来制作组织切片，否则病理检验的结果是不会令人满意的。一、取材工
7、具：取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦，不应使用有钩镊子或血管钳等手术器械镊取标本，以免损害组织造成人为组织变化，给诊断带来困难或导致错诊，漏诊。二、标本的选取：应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。切取标本的原则是求准而不是求量多，所以切取组织宜小不宜大，以不超过 24x24mm2 为佳，厚度以 35mm 为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。特殊目的者应属例外。1、 了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间及时固定。组织的固定以愈新鲜愈好。2、 取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述。包括形状、大小，硬度，颜色，病
8、灶（或可疑病变）部位等。对所取的组织应定位编号。3、 切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和科研价值的肉眼标本，不能因取材而对标本造成人为的“病变” 。肠粘膜组织上沾有少量粪便，也不应以手拭去或以水洗去。 4、 下的组织块应尽量防止其弯曲扭转，如胃肠等组织，应先平展于草纸上粘着以后，慢慢地放入固定液中（故应在动手剖验之前做好准备工作） 。固定液的量要充足，应为固定组织的 10 倍。5、 组织采取应在正常与病灶交界之处。组织形状最好为方形或长方形状，这样有利于制片。切不可以形状定位，组织厚薄要均匀。因为组织块的厚度决定固定的速度，要充分满足它在一定时间内全部达到适宜的固定。如组织厚薄不均，在脱水时将会引起标本变形或 曲，而影响制片。在典型病变部位不妨多切数块，以备日后添制教学切片或研究的需要。 6、 微量标本和易碎标本，为避免破损或丢失应以纱布包裹，但包裹前纱布必须浸湿，以免标本粘附纱布上。7、 各组织块应包括各脏器的重要结构，如肾脏组织包括皮质部分和髓质部分。在有浆膜的脏器（如胃等）组织块中，要至少有一块带有浆膜。8、组织内的钙化病灶或骨质，应
